雷建园
- 作品数：4 被引量：4H指数：2
- 供职机构：天津医科大学第二医院更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人Sox2和Nanog基因的克隆及其对胎肺成纤维细胞分化的影响被引量：2
- 2011年
- 目的克隆人Sox2、Nanog基因编码序列,构建pSG5-Sox2及pSG5-Nanog真核表达重组质粒,转染胎肺间质成纤维细胞,观察Sox2、Nanog基因表达并鉴定其功能。方法应用RT-PCR方法分别从4～6周龄流产胎儿脑组织和膀胱癌细胞中扩增出Sox2及Nanog基因编码全序列,将其连接至pSG5表达载体。经测序比对后,将重组质粒pSG5-Sox2及pSG5-Nanog转染胎肺成纤维细胞,采用免疫细胞化学法检测Sox2及Nanog基因表达情况,倒置显微镜观察转染前后细胞的形态学变化。结果人Sox2基因和Nanog基因编码序列全长957bp和934bp,重组质粒pSG5-Sox2、pSG5-Nanog测序成功,BLAST比对成功,转染胎肺成纤维细胞后,免疫细胞化学检测到Sox2、Nanog阳性表达。转染后胎肺成纤维细胞形态学先呈现干细胞样变化,进而分化为上皮样细胞,CK(广谱)染色阳性,并有向神经细胞分化的趋势,巢蛋白、胶质纤维酸性蛋白、神经元特异性烯醇化酶染色阳性。结论克隆了人Sox2、Nanog基因,成功转染胎肺成纤维细胞并检测到基因阳性表达,胎肺间质成纤维细胞呈干细胞样生长并有向上皮及神经样细胞分化的趋势,为进一步研究Sox2和Nanog基因功能及重编程细胞分化奠定了基础。
- 孙中帅雷建园广茜茜畅继武
- 关键词：基因SOX2基因NANOG成纤维细胞细胞分化
- pSG5-Oct4真核表达质粒的构建及瞬时表达
- 2011年
- 目的克隆人胚胎干细胞的关键基因Oct4,构建真核表达质粒pSG5-Oct4,并检验其在胎儿胰岛间质细胞中的瞬时表达。方法通过RT-PCR从胎儿骨髓间充质干细胞克隆出基因Oct4的全长序列,插入真核表达载体pSG5中,经筛选阳性克隆、EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切鉴定及测序分析后,用Fugene HD转染试剂转染胎儿胰岛间质细胞,采用RT-PCR和免疫细胞化学染色检测重组质粒pSG5-Oct4在胎儿胰岛间质细胞中的表达情况。结果经RT-PCR扩增得到大小约1.1 kb的条带,测序与GenBank中Oct4(NM_002701.4)基因序列的同源性达97%;EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切重组质粒,琼脂糖凝胶电泳分析插入基因的大小和方向均正确;经RT-PCR和免疫细胞化学染色检测,pSG5-Oct4转染胎儿胰腺间质细胞后能表达Oct4蛋白。结论本实验成功构建了真核表达质粒pSG5-Oct4,且目的基因可在胎儿胰岛间质细胞瞬时表达,为进一步研究Oct4在真核细胞中的调节作用及后续实验奠定了基础。
- 雷建园畅继武郭嘉宁李奕
- 关键词：真核表达
- 体外诱导胎儿骨髓间充质干细胞向胰岛β样分泌细胞的分化被引量：2
- 2011年
- 背景:体外诱导人骨髓间充质干细胞定向分化为胰岛样细胞,目前尚无成熟的鉴定方案。目的:探讨胎儿骨髓间充质干细胞在适当的条件下体外分化为胰岛样分泌细胞的可能性。方法:将胎儿骨髓间充质干细胞与胎儿胰岛素细胞分别接种于Transwell双层细胞培养板上下层共培养。对照组中的骨髓间充质干细胞仅用胰岛细胞培养基培养。倒置相差显微镜观察胎儿骨髓间充质干细胞、胎儿胰岛细胞的形态,放射免疫分析法检测共培养刺激下胰岛素的分泌情况。结果与结论:未经诱导的骨髓间充质干细胞呈长梭形贴壁生长,与胰岛细胞共培养的骨髓间充质干细胞逐渐变圆,并聚集成团,共培养9d后骨髓间充质干细胞经RAI检测分泌大量胰岛素,DTZ染色为阳性,细胞免疫化学检测阳性。而对照组无胰岛素释放。提示在适当的培养条件下,胎儿骨髓间充质干细胞具有向胰岛素分泌细胞分化的能力。
- 郭嘉宁雷建园李奕畅继武
- 关键词：间充质干细胞胰岛细胞共培养免疫细胞化学
- 真核表达质粒pSG5-Oct4的构建及瞬时表达的研究
- 目的
人胚胎干细胞/(embryonic stem cell, ES/)具有无限增殖、自我更新及多向分化的潜能,这也使得ES细胞成为了基础研究和临床应用的种子细胞。干细胞广泛应用的前提是明确其自我更新和定向分化的...
- 雷建园
- 关键词：OCT4胎儿骨髓间充质干细胞真核表达神经细胞
- 文献传递
