王惠珍
- 作品数：90 被引量：261H指数：9
- 供职机构：山西医科大学更多>>
- 发文基金：山西省自然科学基金国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程文化科学更多>>
- 重组人肝细胞生长因子α在大肠杆菌中的表达及活性检测被引量：2
- 2005年
- 目的 建立人肝细胞生长因子α链 (rhHGFα)高效原核表达体系。方法 以pRC/CMV hHGF为模板 ,扩增hHGFαcDNA ,继以XhoI酶切为 386和 95 4bp 2个片段 ,亚克隆入pBSKS,DNA测序后 ,将上述两个片段与pBV2 2 0连接 ,构建重组质粒。转化E .coliJM10 9、DH5α和BL2 1(DE3) ,筛选高效表达菌株。分离包涵体 ,8mol/L尿素溶解 ,梯度复性后利用反相和凝胶过滤层析纯化重组蛋白 ,经MTT法检测活性。结果 所克隆的hHGFα基因序列正确 ,筛选出高效表达菌株BY ,经SDS-PAGE显示在相对分子质量 5 2 0 0 0处出现特异的目的蛋白表达带 ,表达量约占全菌蛋白的 2 5 %。表达产物以不溶性的包涵体 (IBs)形式存在 ,复性后具有刺激原代大鼠肝细胞生长的作用。结论 已成功表达了rhHGFα蛋白 ,为研究rhHGFα结构与功能及中试生产奠定了基础。
- 杨利军杨涛牛勃程牛亮王惠珍赵建滨
- 关键词：HGFDH5ΑΑ基因大鼠肝细胞复性包涵体
- 乳糜微粒作为肝脏靶向基因治疗载体的应用
- 本发明涉及乳糜微粒的一种新用途，即乳糜微粒作为基因治疗药物的载体的应用，特别是乳糜微粒作为肝脏靶向基因治疗药物的载体的应用。在乳糜微粒中含有apoE，而在肝细胞和肝癌细胞膜表面均存在apoE受体，可以特异的识别和结合ap...
- 解军于保锋徐钧司海东张小曼程凯王惠珍张悦红赵虹刘志贞张俊涛弓韬胡晓年向前
- 一种特异识别血小板α<Sub>IIb</Sub>β<Sub>3</Sub>的抗栓药物RWR
- 本发明提供了一种小分子多肽，对RGD三肽进行改造，根据RGD特异结合α<Sub>IIb</Sub>β<Sub>3</Sub>的特点，在其N端增加疏水性氨基酸和碱性氨基酸，第四位增加一个疏水性氨基酸W，第五位增加一个碱性氨...
- 杨利军杨涛孙海飚刘海桃赵海霞常冰梅王惠珍
- 文献传递
- AoGDW肽抑制血小板聚集的作用机制被引量：8
- 2007年
- 目的研究RGD(精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸)肽衍生物-AoGDW(ω-氨基辛酸-甘氨酸-天门冬氨酸-色氨酸)抑制血小板聚集的作用机制。方法采用双色荧光标记以及流式细胞技术检测AoGDW肽对CD41抗体与血小板GPⅡb/Ⅲa受体结合的抑制作用以及对血小板膜上P-选择素表达的影响。结果随着AoGDW肽浓度的增加,CD41抗体与活化血小板GPⅡb/Ⅲa受体结合率呈现下降趋势,相对于阴性对照组,P<0.01。但CD41抗体与静止血小板GPⅡb/Ⅲa受体的结合率以及CD62p抗体与静止血小板P选择素的结合率与阴性对照组相比,P>0.05。结论AoG-DW肽是通过占据血小板上纤维蛋白原的结合位点即活化的GPⅡb/Ⅲa受体而发挥抑制血小板聚集的作用,并且不具有活化血小板的作用,是一种选择性的GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂。
- 王晓霞李晓钟刘红林解军张悦红王惠珍牛勃
- 关键词：RGD流式细胞技术
- 人肝细胞生长因子β链基因的克隆及表达载体的构建被引量：1
- 2001年
- 目的 构建重组人肝细胞生长因子 β(rhHGF β)的克隆表达体系。以期进一步研究HGF基因的表达调控及HGF的生物学、医学作用。方法 从人胎肝组织中提取总RNA ,运用RT PCR技术 ,对HGF β基因转录前加工修饰 ,与载体重组 ,构建rhHGF β的克隆。并对克隆进行限制性内切酶酶切图谱分析 ,对重组体中插入的外源基因进行序列分析。 结果 获得了rhHGF β完整的cDNA序列 ,重组体克隆的酶切结果与设计一致。 结论 首次成功地构建了人肝细胞生长因子 β(rhHGF β)的克隆表达体系。
- 解军牛勃程牛亮吴玲王惠珍杨涛常冰梅
- 关键词：肝细胞生长因子分子克隆基因表达
- hHGF-αcDNA的克隆及表达载体的构建被引量：1
- 2001年
- 目的 定点突变法扩增制备完整hHGF αcDNA ,克隆并构建其原核表达载体。方法与结果 以含有人HGFcDNA全序列的质粒 pRC/CMV hHGF为模板 ,设计合成一对特异引物进行聚合酶链反应 (PCR) ,扩增hHGF αcDNA基因 ,琼脂糖凝胶电泳检测 ,结果显示扩增得到了 1 34kb长的目的基因产物。将扩增产物以限制性内切酶XhoⅠ酶将其切为 386bp、95 4bp两个片段 ,分别以EcoRⅠ /XhoⅠ、XhoⅠ /BamHⅠ与 pBSKS载体连接重组 ,对目的基因分段克隆后进行序列测定 ,结果表明除通过定点突变引入的起始密码ATG、终止密码子TAA、TGA及EcoRⅠ、BamHⅠ识别位点外 ,扩增得到的PCR产物序列与Nakamura等报道的HGFcDNA中不包括前体序列的α链部分完全相同。将以EcoRⅠ /XhoⅠ、XhoⅠ /BamHⅠ从pBSKS HGF α 386、pBSKS HGF α 95 4中切出的 386bp、95 4bp两个片段以EcoRⅠ /BamHⅠ与pBV2 2 0连接构建重组表达质粒 pBV2 2 0 HGF α ,限制性内切酶图谱分析显示HGF αcDNA插入到载体pBV2 2 0的EcoRⅠ /BamHⅠ位点 ,插入方向正确。温度诱导表达 ,SDS PAGE显示一分子量与单体hHGF α链吻合的蛋白带 ,证明表达质粒构建成功。结论 设计制备了hHGF α链cDNA ,克隆建立了hHGF α链原核表达质粒。
- 党素英程牛亮牛勃王惠珍赵建滨张祖珣
- 关键词：肝细胞生长因子克隆CDNA基因表达
- 重组人肝细胞生长因子重链(rhHGF-α)蛋白的表达与纯化被引量：1
- 2001年
- 大肠杆菌中表达的rhHGF α以包涵体形式存在 ,表达量约占菌体总蛋白的 2 5 %。为了建立一条简便的分离纯化生产工艺 ,我们研究了包涵体溶解及复性条件 ,并进行了活性测定。结果表明 ,用含有 4mol/L尿素的缓冲液洗涤包涵体 ,8mol/L尿素溶解包涵体后的上清 ,经过SephacrylS 2 0 0凝胶过滤、复性后 ,得到纯度达 90 %的rhHGF α ,SDS PAGE测定相对分子质量为 5 2 0 0 0。与rhHGF β体外共复性后 ,完整的rhHGF具有明显刺激原代培养大鼠肝细胞生长的活性。
- 杨涛牛勃王惠珍程牛亮解军常冰梅陈显久
- 关键词：肝细胞生长因子分子生物学纯化
- rhHGFα重组质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达
- 2004年
- 目的 :建立人肝细胞生长因子α链 (rhHGFα)高效原核表达体系 ,分离纯化rhHGFα蛋白 ,检测其生物活性。方法 :以pRC CMV hHGF为模板 ,扩增hHGFαcDNA继以XhoⅠ切为两个片段 ,亚克隆入pBSKS,测序后 ,将上述两个片段与pBV2 2 0连接 ,构建重组质粒。转化大肠杆菌 ,筛选高表达菌株。分离包涵体 ,8mol L尿素溶解 ,稀释复性后纯化重组蛋白 ,MTT法检测活性。结果 :测序证实所克隆的hHGFα基因序列正确 ,筛选出高效表达菌株E .coliBY ,SDS PAGE显示在相对分子量 5 2 0 0 0处出现特异的目的蛋白表达带 ,表达量约占全菌蛋白的 2 5 %。表达产物以不溶性的包涵体 (IB)形式存在 ,复性后具有刺激原代培养成年大鼠肝细胞生长的作用。结论 :以大肠杆菌为宿主 ,成功表达了hHGFα蛋白 ,为进行hHGFα结构与功能研究及中试生产奠定了基础。
- 杨涛杨利军牛勃程牛亮王惠珍赵建滨
- 关键词：肝细胞生长因子基因工程纯化大肠杆菌蛋白质
- 一种发育阶段特异性生精细胞玻片的制备方法
- 一种发育阶段特异性生精细胞玻片的制备方法，是将取自动物的睾丸组织去除包膜，分散曲精小管，在解剖显微镜下，根据曲精小管的透光差异确定该部位所在生精上皮波模式对应的分期，选择感兴趣的部位区段制备玻片，于液氮中冷冻后，1wt％...
- 郭睿于保锋王惠珍张悦红李颖司海东
- 纤溶酶原饼环区5蛋白重组大肠杆菌高效表达体系的建立被引量：3
- 2004年
- 目的 建立纤溶酶原饼环区 5 (Humanplasminogenkringle 5 ,hPK 5 )蛋白重组大肠杆菌高效表达体系 ,为高密度发酵创造条件。方法 观察一级、二级种子的生长状态 ,比较表达hPK 5蛋白的 4种重组工程菌株在相同条件下的表达情况 ,选出首选发酵种子 ;对其培养时间、诱导时间、培养基种类、pH等条件进行优化 ;并用凝胶成像分析系统对SDS PAGE结果进行分析。结果 经过筛选 ,JM10 9 pBV2 2 0 hPK 5 (简称JP5 )是获取hPK 5蛋白的首选工程菌株 ,其最佳表达条件是LB培养基 (pH 7.4、溶解氧充足 )、30℃培养 3h、4 2℃诱导 6h。在此条件下 ,JP5表达目的蛋白占菌体总蛋白的 38%左右。结论 为高密度发酵获取hPK
- 陈显久王惠珍于保锋程牛亮解军胥显民张悦红郝一彬牛勃
- 关键词：纤溶酶原蛋白大肠杆菌克隆
