王建峰 作品数:23 被引量:87 H指数:6 供职机构: 宁波出入境检验检疫局 更多>> 发文基金: 国家质检总局科技计划项目 宁波市自然科学基金 浙江省自然科学基金 更多>> 相关领域: 农业科学 医药卫生 轻工技术与工程 生物学 更多>>
大鼠脂肪因子Vaspin基因的克隆与原核表达 被引量:1 2014年 目的构建大鼠脂肪因子Vaspin高效原核表达载体,并获得纯化的Vaspin蛋白。方法以大鼠睾丸脂肪细胞总RNA为模板,RT-PCR扩增Vaspin基因,亚克隆到原核表达载体pET-30a(+)获得重组质粒pET-30a-Vaspin,转化至E.coli BL21(DE3)菌株中进行诱导表达,SDS-PAGE电泳检测表达产物,用Ni柱进行纯化重组蛋白,Western blot鉴定其特异性。结果测序结果表明克隆的Vaspin基因序列正确,构建的原核表达载体可以成功表达分子量为50 kDa的重组蛋白,Western blot结果证实该蛋白为大鼠脂肪因子Vaspin。结论完成了大鼠脂肪因子Vaspin基因的克隆,成功构建了原核表达载体,并在BL21(DE3)菌株中高表达,为进一步研究Vaspin在胰岛素抵抗及肥胖中的作用机制奠定了基础。 于纪棉 王建峰 张玉琳 孟香红 倪晶晶 陶冬英关键词:脂肪因子 原核表达 赤羽病病毒RT-LAMP检测方法的建立 被引量:8 2013年 为建立一种赤羽病病毒(AKAV)的快速检测方法,本研究根据环介导等温扩增技术(LAMP)原理,设计了针对AKAV S基因的特异性引物,并对反应条件和反应体系进行优化,建立了AKAV的RT-LAMP方法。特异性和灵敏度试验结果显示,所建立的RT-LAMP检测方法具有良好的特异性,与蓝舌病、牛病毒性腹泻及传染性牛鼻气管炎等病毒无交叉反应,敏感度可达11.5拷贝/μL,采用SYBR Green I染色,肉眼即可判定检测结果。该方法能够简便、快速、灵敏、特异地检测AKAV。 张吉红 潘登 黄素文 黄绍棠 李如松 王建峰 倪健波关键词:赤羽病病毒 外来船舶压舱水中雷氏普罗威登菌的分离鉴定 被引量:5 2012年 船舶压舱水有携带的致病微生物、有害水生动植物及其他有害物质,一旦在港口随意排放,将破坏当地的生态环境。目前人们对压舱水的研究侧重于藻类,致病微生物的研究较少,只有对大肠菌群以及致病性弧菌的报道。本文首次报道在入境的外轮压舱水中分离出雷氏普罗威登菌。 王建峰 劳华均 孙萍 李如松 王春 倪健波 黄素文 杨志关键词:船舶压舱水 致病微生物 水生动植物 致病性弧菌 有害物质 生态环境 赤羽病病毒Real-time RT-PCR检测方法的建立与初步应用 被引量:7 2010年 为了研究赤羽病病毒的检测方法,试验根据GenBank中已发表的赤羽病病毒(Akabanevirus,AKAV)的s基因序列建立了检测AKAV的Real-timeRT—PCR方法。结果表明:该方法对AKAV的检测有高度的特异性,与牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、传染性牛鼻气管炎病毒(IBRV)等13种病毒均无交叉反应;Real—timeRT—PCR能够扩增稀释度为1×10^-5的病毒RNA(核酸含量约1.18ng/μL),比普通RT—PCR高出1000倍;用此方法检测130份奶牛血清样品与1份流产胎儿病料,均未检测到阳性样本;AKAV在血清模拟样品中可被有效检出。 张吉红 闻伟刚 李如松 黄素文 倪健波 王建峰关键词:核酸检测 猪捷申病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用 猪捷申病(porcine Teschen disease,PTD)是由微RNA病毒科捷申病毒属的猪捷申病毒(porcine teschovirus,PTV)引起的以猪脑脊髓灰质炎、母猪繁殖障碍、腹泻、皮肤损伤及无症状等为... 王建峰 倪健波 李如松 张强 杨德全 黄素文 熊炜 李健关键词:荧光定量 聚合酶链反应 柯赫法则在橘子罐头商业无菌检验中的应用 被引量:1 2011年 参照国家标准对一批出现胖听和泄漏的橘子罐头进行商业无菌检验,接种酸性肉汤和麦芽浸膏汤均未见微生物生长,无法判断是否为非商业无菌。根据柯赫法则的原理,将胖听罐的汤汁接种到正常的糖水橘子汤汁中,汤汁产气变浑浊,经分离鉴定为酿酒酵母。研究表明,柯赫法则可以成功应用于罐头商业无菌检验,解决现行标准不能检测的难题。 黄素文 杨文潮 倪健波 胡桃燕 王建峰关键词:橘子罐头 商业无菌 酿酒酵母 牛副结核分枝杆菌LAMP快速检测方法的建立 被引量:11 2012年 为建立牛副结核分枝杆菌(MAP)的快速检测方法,本研究采用环介导等温扩增(LAMP)技术,以MAP的IS900基因序列为靶基因设计特异性引物,建立了MAP特异性的LAMP快速检测方法。经反应条件优化,检测结果显示,建立的LAMP检测方法具有良好的特异性,最低见测量为0.53 pg;与其他病原菌无任何交叉反应。临床样品检测与行业标准的符合率为100%。该LAMP检测方法可以用于MAP的常规检疫。 王建峰 黄素文 刘思国 倪建波 王春 张吉红 于纪棉 朱堂明 黄绍棠关键词:环介导等温扩增 淡水小龙虾主要过敏原原肌球蛋白基因的克隆、表达及其免疫活性鉴定 被引量:18 2011年 目的:克隆、表达淡水小龙虾肌肉中主要过敏原原肌球蛋白(tropomyosin),并对其免疫活性进行鉴定。方法:根据甲壳类的泛过敏原tropomyosin基因的高度保守性设计简并引物,通过RT-PCR克隆出淡水小龙虾虾肉中过敏原tropomyosin的全长基因。将该基因与pET-28a载体连接并转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经诱导异丙基-B-D-硫代乳糖苷(IPTG)诱导表达,Ni2+亲和层析柱纯化后,用Western blot检测该重组蛋白的免疫活性。结果:序列分析显示该基因包括一个编码284个氨基酸的开放阅读框,与已知虾、蟹、龙虾等的过敏原tropomyosin基因有较高同源性(>80%)。根据过敏原的命名规则,将其命名为Proc 1,并提交GenBank数据库,登录号为FJ769183。重组小龙虾tropomyosin在大肠杆菌中能高效的表达,Western blot检测结果显示该重组蛋白具有良好的免疫活性。结论:研究成功表达了具有免疫活性的淡水小龙虾原肌球蛋白,为虾过敏性疾病的诊断和治疗奠定了基础。 黄素文 杨文潮 朱海 王建峰 倪健波 吕志平 冼静雯 刘志刚关键词:淡水小龙虾 原肌球蛋白 免疫活性 马动脉炎病毒RT-LAMP检测方法的建立 被引量:1 2011年 为建立一种快速、简便、特异性高的马动脉炎病毒反转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法,针对马动脉炎病毒膜基质蛋白M基因的保守序列设计特异性引物,优化反应条件,建立了马动脉炎病毒的RT-LAMP检测方法并对其特异性和灵敏性进行了检测。结果显示,建立的RT-LAMP检测方法具有良好的特异性,灵敏度为0.12pg,是普通RT-PCR的100倍,检测时间仅需1h,肉眼即可观察检测结果。表明建立的RT-LAMP检测方法可用于进出口马动脉炎病毒的检疫。 黄素文 于纪棉 倪健波 王建峰 杨文潮 张超 张吉红 相文华关键词:马动脉炎病毒 检疫 赤羽病病毒real-time RT-PCR检测方法的建立与初步应用 根据GenBank中已发表的赤羽病病毒(Akabanevirus,AKAV)的S基因序列,建立了检测AKAV的real-timeRT-PCR方法。特异性试验表明,该方法对AKAV的检测有高度的特异性,与牛病毒性腹泻病毒(... 张吉红 闻伟刚 李如松 黄素文 倪健波 王建峰关键词:赤羽病病毒 核酸检测 文献传递