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家蝇幼虫抗菌肽defensin基因的克隆、表达、纯化及抑菌、抑肿瘤活性研究: 实验目的　　1.在实验研究过程中我们对家蝇抗菌肽防御素(defensin)基因进行生物信息学的分析;并应用分子生物学方法从家蝇幼虫体内提取抗菌肽防御素(defensin)基因，并对该基因进行克隆、表达与纯化。　　2.鉴定...; 焦莉萍; 关键词：家蝇幼虫基因克隆; 文献传递

家蝇抗菌肽defensin基因的克隆、原核表达纯化及抑菌、抑肿瘤活性鉴定被引量：1: 2012年; 为研究家蝇防御素融合蛋白对肿瘤细胞K562有抑制作用，在GenBank中检索家蝇defensin基因，设计特异引物，在家蝇幼虫组织中提取RNA，并通过PCR扩增defensin基因成熟肽部分（Maturedefensin，MD），将该基因与原核质粒表达载体pGEX．6P-1进行重组，构建家蝇抗菌肽重组蛋白pGEX-6P-1／MD。通过双酶切鉴定证明目的片段已稳定融合到载体pGEX-6P-1中并将其转化至BL21（DE3）感受态细胞中，经25℃IPTG诱导在大肠杆菌E．coliDH5u中表达。用GST—Sefinose亲和层析纯化蛋白，15％SDS—PAGE分析鉴定，可见相对分子量为约30kDa的特异性目的条带。运用琼脂孔穴平板扩散法测定表达产物的活性，得知纯化后的重组融合蛋白pGEX-6P-1／MD对大肠杆菌生长有一定的抑制作用，并首次证明家蝇防御素融合蛋白pGEX．6P．1／MD对肿瘤细胞K562有抑制作用。家蝇抗菌肽融合蛋白pGEX-6P-1／MD被成功克隆和表达，证明纯化融合蛋白pGEX-6P-1／MD对肿瘤细胞K562有抑制和损伤作用，这为以后研发蝇防御素抗菌肽药物提供了依据。; 焦莉萍杨敏侯养全赵瑞君原发家杜斌王文建; 关键词：DEFENSIN 抗菌肽原核表达

家蝇抗菌肽defensin对人肝癌细胞HepG2的增殖、凋亡和周期的影响被引量：4: 2014年; 采用四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）比色法，分析家蝇抗菌肽defensin对人肝癌细胞HepG2体外生长增殖与凋亡的影响，用倒置光学显微镜检测defensin对人肝癌细胞HepG2和人正常心肌细胞H9C2生长增殖情况的影响，并采用流式细胞术检测defensin对人肝癌细胞HepG2细胞凋亡及细胞周期的影响。结果显示，家蝇抗菌肽defensin对人肝癌细胞HepG2的生长有抑制作用，对人正常心肌细胞H9C2无抑制作用。通过显微镜观察HepG2细胞凋亡的形态变化，MTT检测发现defensin对肿瘤细胞的增殖抑制率呈剂量反应关系和时间反应关系。defensin能诱导人肝癌细胞HepG2发生凋亡，并且影响人肝癌细胞HepG2的细胞周期。家蝇抗菌肽defensin对人肝癌细胞HepG2具有增殖抑制作用及凋亡作用，对正常人心肌细胞H9C2基本无抑制作用。; 程璟侠焦莉萍赵瑞君原发家杜斌王文建; 关键词：家蝇抗菌肽 DEFENSIN 增殖凋亡

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焦莉萍