曹唯希
- 作品数：40 被引量：102H指数：5
- 供职机构：重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金重庆市科委基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- bcr-abl逆转录病毒介导的小鼠慢性粒细胞白血病样模型的建立被引量：4
- 2008年
- 目的：构建bcr-abl逆转录病毒介导的小鼠慢性粒细胞白血病（CML）样模型,为深入研究CML发病机制和治疗奠定基础.方法：bcr-abl逆转录病毒Mig210载体经Phoenix-Ampo细胞包装后,取上清液感染5-FU处理后的BALB/c雄性小鼠骨髓细胞,再经尾静脉移植入经致死剂量γ射线（900cGy）照射的同种雌性受体鼠中.用形态学、RT-PCR和Western Blot鉴定小鼠成模情况.结果：小鼠移植8-9 wk后,外周血白细胞达2×10^10-3×10^10/L（为对照鼠的5-8倍）,外周血涂片幼稚细胞达到0.10-0.20;骨髓粒系细胞显著增高,易见幼稚细胞,肝脾也可见白血病细胞浸润;移植4-5 wk后在受体鼠骨髓和脾脏检出bcr-abl融合基因,8-9 wk后在肝脏亦检测出bcr-abl融合基因,同时在骨髓和脾脏也检测到bcr-abl融合蛋白.建模成功的小鼠3-5 mo后相继死亡.结论：成功建立bcr-abl逆转录病毒介导的小鼠CML模型,可用于后续CML信号通路和治疗机制的研究.
- 张文萍冯文莉黄世峰史梦王雅珍曾建明李惠温健萍陈新敏曹唯希黄宗干
- 关键词：慢性粒细胞白血病逆转录病毒载体动物模型
- 人参总皂甙对K562细胞Fas及其可溶性受体的影响被引量：2
- 2004年
- 目的 :研究人参总皂甙 (TSPG)诱导K5 6 2细胞凋亡的机理。方法 :采用形态学观察、原位末端标记法 (TUNEL)观察不同浓度人参总皂甙对K5 6 2白血病细胞凋亡的影响 ;用免疫组化法检测TSPG诱导K5 6 2细胞凋亡中Fas表达情况 ,并采用酶联免疫吸附法 (ELISA)检测可溶性Fas(sFas)。结果 :5 0、10 0 μg/mlTSPG可诱导K5 6 2细胞凋亡 ;同时实验组Fas表达明显增高 (P <0 .0 1) ,而sfas无明显变化。结论 :TSPG诱导K5 6 2细胞凋亡与其诱导细胞Fas高表达有关。
- 曹唯希陈婷梅刘琼王亚平姜蓉
- 关键词：人参总皂甙K562FASSFAS
- 过表达Apg-2对H_2O_2诱导的BaF3-BCR/ABL细胞损伤的保护作用被引量：1
- 2010年
- 目的观察过表达Apg-2对H2O2所致BaF3-BCR/ABL细胞损伤的保护作用。方法以H2O2作用于逆转录病毒空载体MIGR1感染细胞株BaF3-MIGR1和稳定表达BCR/ABL的BaF3-BCR/ABL细胞为氧化应激损伤模型,RT-PCR检测H2O2作用前后Apg-2基因表达水平;用紫外分光光度法测定乳酸脱氢酶(LDH)释放率,观察细胞的损伤程度;硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法测定过氧化物歧化酶(SOD)活性;Am-blue法检测细胞存活率。结果过表达Apg-2能明显改善H2O2导致的BaF3-BCR/ABL细胞损伤,与BaF3-MIGR1细胞处理组相比,过表达Apg-2可使BaF3-BCR/ABL细胞存活率升高,LDH释放率明显降低,降低MDA含量,提高SOD活性。结论过表达Apg-2对H2O2诱导的BaF3-BCR/ABL细胞损伤具有明显的保护作用。
- 李春莉刘钉宾袁颖彭智陶崑史梦曹唯希冯文莉
- 关键词：过氧化氢细胞损伤BCR/ABL
- 重组腺病毒Ad5F35-SD-EGFP的构建及其对K562细胞增殖的影响被引量：3
- 2011年
- 目的构建表达SH2-DED融合基因的新型重组腺病毒Ad5F35-SD-EGFP,观察其对K562细胞增殖的抑制作用。方法重叠PCR扩增SH2-DED融合基因并克隆至腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建成穿梭质粒pAdT-SD-EGFP并进行酶切和测序鉴定。穿梭质粒经Pme I酶切后转化pAd5F35-GFP的BJ5183感受态,通过细菌内同源重组产生重组腺病毒质粒pAd5F35-SD-EGFP及其突变体,Pac I酶切后转染AD293细胞进行包装。重组腺病毒Ad5F35-SD-EGFP经PCR和western blot鉴定后进行病毒扩增和滴度测定。体外感染K562细胞,通过MTT和流式周期检测实验观察Ad5F35-SD-EGFP对K562细胞增殖的影响。结果 PCR、酶切和测序结果均表明pAdT-SD-EGFP和pAd5F35-SD-EGFP构建成功;PCR、EGFP检测结果证明重组腺病毒Ad5F35-SD-EGFP包装扩增成功,滴度可达1.4×1012 pfu/ml。转染K562细胞后,Western blot可检测到目的蛋白的表达,MTT实验和流式周期检测结果证明其对K562细胞的增殖有明显的抑制作用。结论成功构建并鉴定了携带SH2-DED融合基因的重组腺病毒Ad5F35-SD-EGFP,其对BCR-ABL阳性K562细胞的增殖有明显的抑制作用。
- 史静胡晶肖青彭智曹唯希罗秋平王方冯文莉
- 关键词：SH2重组腺病毒
- 稳定表达BCR／ABL的小鼠BaF3-P210细胞株的建立及其生物学特性的研究被引量：12
- 2008年
- 目的构建能稳定表达BCR/ABL的小鼠转化细胞株BaF3-P210,并初步探讨BCR/ABL对BaF3细胞生物学特性的影响。方法将含有bcr/abl基因的逆转录病毒载体转染到包装细胞,收集病毒感染BaF3细胞,经筛选和亚克隆,获得稳定表达BCR/ABL的转基因BaF3-P210细胞。用PCR、DNA测序、RT-PCR和Westernblot检测bcr/abl基因在靶细胞中的整合和表达;用台盼蓝细胞计数法、流式细胞仪(FCM)和MTT法研究BCR/ABL对BaF3细胞生物学特性的影响。结果bcr/abl基因整合在BaF3细胞基因组中,BaF3-P210细胞能稳定表达bcr/abl基因及其蛋白。与对照组相比,BaF3-P210细胞增殖速度增快(P<0.05);G0/G1期细胞比例下降,S期和G2/M期细胞比例增高(P<0.05);经STI571处理后的细胞增殖抑制率为(54.08±1.90)%(P<0.05),早期凋亡率为(12.35±2.04)%(P<0.05)。结论成功构建的能稳定表达BCR/ABL的小鼠BaF3-P210转化细胞株具有增殖能力增强、细胞周期进程加速和对STI571敏感的恶性表型特征。
- 史梦冯文莉张文萍王小中黄世锋曾建明温健萍陶昆陈新敏曹唯希黄宗干
- 关键词：慢性粒细胞白血病BCR/ABL融合基因逆转录病毒载体
- STAT 5诱杀寡脱氧核苷酸对K 562细胞裸鼠致瘤能力的影响被引量：3
- 2007年
- 目的:通过动物实验,研究裸鼠信号转导及转录活化蛋白5(signal transducer and activator of transcription5,STAT5)诱杀寡脱氧核苷酸(decoy oligodeoxynucleotide,Decoy ODN)的抑瘤作用。方法:采用皮下注射的方法建立K562细胞裸鼠移植瘤模型,瘤体内注射脂质体-ODN混合物,观察裸鼠生长状况、瘤体大小等。分别采用反转录-聚合酶链反应(reverse tran-scription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和Western印迹法检测瘤组织中bcl-xL、cyclin D1和c-myc的mRNA和蛋白表达水平的改变情况。结果:经Decoy ODN处理抑制了K562细胞对裸鼠的致瘤能力,瘤体积和质量明显小于突变ODN组[MutantODN组瘤重(0.93±0.22)gvsDecoy ODN组瘤重(0.485±0.178)g,P<0.05],肿瘤生长抑制率达47.7%。RT-PCR、Western印迹检测结果显示bcl-xL、cyclin D1和c-myc的mRNA和蛋白表达水平下调。结论:转录因子诱杀策略可以有效地在移植瘤裸鼠模型体内阻断STAT5靶基因的表达。
- 王小中冯文莉曾建明史梅白卫君赵世巧曹唯希涂植光黄宗干
- 手指全血微量ELISA法检测乙型肝炎病毒六项标志物的方法学评价
- 1993年
- 本文建立了手指全血微量ELISA法检测乙型肝炎病毒六项标记物的改良方法,并按照卫生部对乙肝标志物检测质控的要求对该方法作了系统的方法学评价,用该法和静脉血清常规法同时检测了240例乙肝六项标志物,两方法检测结果经配对资料显著性检验无显著性差异(P>0.05)。该方法突出的优点是用血量甚微,直接用全血加样,实验所用试剂。
- 刘国卿罗云萍曹唯希康红张玉洪赖利华
- 关键词：标志物乙型肝炎病毒ELISA
- Skp2反义寡核苷酸对K562细胞生长和增殖的影响被引量：11
- 2003年
- 背景与目的:泛素-蛋白酶体途径是真核细胞中选择性降解短寿命蛋白的重要途径。S期激酶相关蛋白2(S-phasekinase-associatedprotein2,Skp2)是此途径中的一个重要组件,它是决定细胞周期素依赖性激酶抑制因子p27降解的关键蛋白。近年来,在实体瘤的研究中发现Skp2是癌蛋白,能促进癌细胞的细胞周期进展,但在白血病细胞恶性增殖中所起的作用还未见报道。本实验旨在研究Skp2反义寡核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotides,ASODN)对白血病细胞系K562细胞生长和增殖的影响及其可能的机制。方法:Skp2反义寡核苷酸和K562细胞共同培养,通过显微镜下观察、四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验观察K562细胞生长和增殖,流式细胞术分析细胞周期,逆转录聚合酶链反应(reversetranscription-polymerasechainreaction,RT-PCR)和细胞免疫化学测定Skp2mRNA、蛋白及p27mRNA、蛋白的表达。结果:Skp2反义寡核苷酸处理后,K562细胞增殖受抑,细胞周期阻滞于G0/G1期犤Skp2ASODN组(39.7±9.1)%,对照组(31.5±7.3)%,P<0.05犦。Skp2mRNA及Skp2蛋白水平降低;尽管p27mRNA未见改变,但其蛋白水平明显升高。结论:Skp2反义寡核苷酸能抑制K562细胞增殖,这种抑制作用主要是通过调控泛素-蛋白酶体途径,进而影响细胞周期进展而实现的。
- 王小中冯文莉刘兴曹唯希黄宗干
- 关键词：SKP2反义寡核苷酸K562细胞生长S期激酶相关蛋白2慢性粒细胞白血病
- 新鲜羊膜致I型超敏反应的变应原性研究被引量：2
- 2006年
- 研究新鲜人羊膜的变应原性及其致敏后发生I型超敏反应的可能性。建立豚鼠全身主动过敏实验模型。分新鲜羊膜组、新鲜蛋清组(阳性对照)和PBS液组(阴性对照),每组10只豚鼠。观察豚鼠在致敏期和激发后的反应,采用化学荧光法检测外周血组胺含量,血液流变分析系统检测4项血液流变学指标(全血高切变率黏度、全血低切变率黏度、血浆黏度、红细胞聚集指数)。致敏期间各组豚鼠的体重变化无明显差别(P>0.05);激发后羊膜组豚鼠与阴性组表现一致,无异常反应;羊膜组外周血组胺含量及4项血液流变学指标均与阴性对照无明显差别(P>0.05),与阳性对照有显著性差异(P<0.01)。经规范化无菌处理后的新鲜羊膜,一般不具有变应原性,不会引起I型超敏反应。
- 赵敏张琪曹唯希滕永真张晓萍胡柯鲁静秦应祥
- 关键词：人羊膜变应原
- 携SH2-Caspase8融合基因重组腺病毒的构建及对K562细胞增殖的影响被引量：2
- 2011年
- 目的构建并鉴定携SH2-Caspase8融合基因的重组腺病毒AdE-SC-EGFP及其突变体,观察其对K562细胞增殖的抑制作用。方法采用RT-PCR、重叠PCR扩增SH2-Caspase8融合基因,克隆至腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建穿梭质粒pAdT-SC-EGFP,进行酶切和测序鉴定。将PmeⅠ酶切后的穿梭质粒转化pAdEasy-BJ5183感受态,通过细菌内同源重组产生复制缺陷型重组腺病毒质粒pAdE-SC-EGFP及其突变体,PacⅠ酶切后将其转染AD293细胞进行包装,PCR和Western blot鉴定重组腺病毒AdE-SC-EGFP,验证后扩增病毒并测定滴度。结果 PCR检测、酶切和测序结果均表明腺病毒穿梭质粒pAdT-SC-EGFP和重组腺病毒质粒pAdE-SC-EGFP构建成功;PCR检测、EGFP表达检测结果证明重组腺病毒AdE-SC-EGFP包装成功,扩增后,滴度可达1.5×1012pfu/ml。感染K562细胞后,Western blot检测目的蛋白的表达,MTT和半固体集落形成实验检测其对K562细胞生长增殖的影响。结论成功构建并鉴定了携带SH2-Caspase8融合基因的重组腺病毒AdE-SC-EGFP及其突变体;MTT和克隆形成实验证明重组腺病毒AdE-SC-EGFP对BCR-ABL阳性的K562细胞有明显的增殖抑制作用。
- 刘双凤胡晶曹唯希史静彭智王海霞李亚娟冯文莉
- 关键词：细胞增殖SH2CASPASE8重组腺病毒K562细胞BCR-ABL
