戴文佳
- 作品数：13 被引量：31H指数：3
- 供职机构：复旦大学附属眼耳鼻喉科医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项上海市科学技术委员会科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肺炎球菌溶血素基因的克隆
- 2006年
- 目的应用基因工程技术克隆肺炎球菌溶血素(pneumolysin,Pn)基因,为研制中耳炎蛋白多糖结合疫苗奠定基础。方法根据Walker等肺炎球菌溶血素基因序列(GenBankaccessionno.X52474),设计一对各带有一个限制性酶切位点的引物,运用PCR从肺炎球菌的染色体DNA扩增出肺炎球菌溶血素基因。对该PCR产物进行酶切、回收,并将其克隆入表达载体pET-28a,然后转化至大肠杆菌JM109(DE3)宿主细胞中。结果通过常规基因克隆方法和PCR技术,成功构建重组体,酶切鉴定和基因测序证实构建正确。结论利用基因工程技术成功克隆了肺炎球菌溶血素基因。
- 陈兵戴文佳王正敏李忠明
- 关键词：疫苗中耳炎溶血素类
- 肺炎球菌溶血素核酸疫苗的制备及其免疫原性研究
- 肺炎链球菌是引起肺炎、脑膜炎、中耳炎的主要致病菌,是引起世界范围婴幼儿、老年人、免疫缺陷个体感染的主要原因之一。由于新型抗生素研发的相对滞后及临床上常出现抗生素运用的不当,该菌耐药性菌株日益增多,因此疫苗对防治感染的作用...
- 戴文佳
- 关键词：肺炎球菌溶血素核酸疫苗电转染DNA免疫应答
- 文献传递
- 肺炎球菌溶血素核酸疫苗的制备及共免疫原性研究
- 肺炎链球菌是引起肺炎、脑膜炎、中耳炎的主要致病菌，是引起世界范围婴幼儿、老年人、免疫缺陷个体感染的主要原因之一。由于新型抗生素研发的相对滞后及临床上常出现抗生素运用的不当，该菌耐药性菌株日益增多，因此疫苗对防治感染的作用...
- 戴文佳
- 关键词：肺炎链球菌溶血素核酸疫苗免疫原性DNA扩增抗原表位
- 文献传递
- 基因工程技术制备中耳炎肺炎球菌疫苗新型蛋白载体被引量：1
- 2006年
- 目的应用基因工程技术制备中耳炎肺炎球菌疫苗新型载体——肺炎球菌溶血素(pneumolysin,Pn)。方法根据报道的Pn基因序列,设计一对各带有一个限制性内切酶位点的引物,采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术从肺炎球菌基因组DNA中扩增出Pn基因,对该基因片段进行酶切、回收后克隆入表达载体pET-28a,并转化至大肠杆菌JM109(DE3)宿主细胞中。在培养基中加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropy-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导Pn基因的表达,用超声波破菌后,经固化镍树脂亲和吸附和纯化在羧基端带有6个组氨酸的重组Pn蛋白。结果通过常规克隆方法和PCR技术,成功构建Pn基因,DNA测序证实基因构建正确,表达产物相对分子质量约52 000,表达量约占总菌体蛋白的8％。结论利用基因工程技术可以克隆Pn基因,并获得该基因在宿主菌中的表达。采用固化镍树脂亲和纯化技术制备出重组Pn蛋白,为进一步研制肺炎球菌多糖和其自身蛋白结合的新型中耳炎疫苗提供参考。
- 陈兵戴文佳王正敏陈泽宇迟放鲁李忠明
- 关键词：中耳炎肺炎球菌疫苗抗链球菌溶血素
- 肺炎链球菌自溶素核酸疫苗的制备及其免疫原性研究被引量：2
- 2009年
- 目的构建肺炎链球菌自溶素(pneumococcal autolysin,LytA)核酸疫苗,并研究其免疫原性。方法采用聚合酶链反应方法从肺炎链球菌基因组中克隆肺炎链球菌自溶素基因,然后将该基因插入到pVAX1真核表达载体中,构建表达LytA的重组质粒,制备成超螺旋比例大于90%的核酸疫苗。实验组:BALB/c小鼠5只,对其分3次肌内注射核酸疫苗(100μg);对照组:BALB/c小鼠5只,肌内注射pVAX1空载体(100μg)3次。分别采集小鼠血清,采用间接酶联免疫吸附方法测定血清LytA特异性抗体水平。结果扩增出的LytA基因(957 bp)与基因库中LytA的编码序列(957 bp)一致。成功构建了LytA核酸疫苗。实验组小鼠的血清Ly-tA抗体水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论成功克隆了LytA基因,制备了LytA核酸疫苗,后者可在小鼠体内诱导较强的特异性体液免疫反应。
- 徐江红王正敏陈兵章德广戴文佳朱美美徐晨媚
- 关键词：中耳炎链球菌肺炎疫苗
- 小鼠肺炎链球菌psaA核酸疫苗的制备及其初免-蛋白加强免疫策略的研究被引量：1
- 2009年
- 目的制备肺炎链球菌核酸疫苗，初步探讨初免一蛋白加强免疫策略能否增强疫苗在动物体内的免疫原性。方法从肺炎链球菌基因组中克隆出肺炎球菌表面黏附素A（pneumococcalsurfaceadhesinA，PsaA）基因，将其分别插入到真核表达载体pVAX1和原核表达载体pET28a中，分别构建出表达PsaA的核酸疫苗及其基因工程表达菌株。pVAX1-psaA核酸疫苗体外转染293T细胞，并通过反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）加以鉴定。实验组5只BALB／c小鼠经核酸疫苗免疫3次后，PsaA纯化蛋白加强免疫1次，对照组5只小鼠经pVAXl空载体免疫3次后，生理盐水加强免疫1次，分别采集血清测定两组抗PsaA抗体水平。结果成功克隆出psaA基因并实现其亚克隆；所构建的psaA核酸疫苗序列正确，同时实现了PsaA蛋白的一步亲和纯化；psaA核酸疫苗可在293T真核细胞中成功表达；核酸疫苗初免后蛋白加强组的抗PsaA抗体滴度高于对照组（t=87．518，P〈0．05）。结论成功构建出psaA核酸疫苗，采用核酸疫苗初免一蛋白加强免疫策略能增强肺炎链球菌psaA核酸疫苗的免疫原性。
- 章德广王正敏徐江红陈兵戴文佳范小勇
- 关键词：中耳炎链球菌疫苗
- IL-17A在肺炎链球菌急性中耳炎黏膜免疫保护中的作用
- 目的 探讨IL-17A在肺炎链球菌急性中耳炎黏膜免疫保护中的作用。方法 6～8周龄SPF级BALB/c小鼠在感染前24h腹腔注射200 μgIL-17A抗体中和体内的IL-17A,注射相同剂量的Ig2a抗体作为对照组(I...
- 徐江红戴文佳刘向梁琼李雯
- 关键词：肺炎球菌急性中耳炎黏膜免疫
- 面神经周围微血管丛分布的临床研究被引量：12
- 2006年
- 目的为尽可能避免医源性面神经麻痹，评估面神经水平段周围微血管丛是否可以作为耳显微或耳神经外科术中面神经的定位标志。方法从2002年7月至2005年7月，共311例因慢性中耳炎、周围性面神经麻痹以及外耳道闭锁合并中耳畸形者，分别行开放式鼓室成形术（291例）、面神经减压术（10例）和先天性耳道闭锁和中耳畸形手术（10例）。观察和评估水平段面神经周围的微血管丛作为术中定位面神经的手术标志的有效性。结果在全部病例中，有95．8％的病例（298例）手术中可满意地观察到水平段面神经周围微血管丛，位于面神经鼓室段表面，仅4．2％的病例（13例）难以在水平段面神经周围发现该微血管丛。用面神经微血管判断水平段面神经管阳性率的95％可信区间为93．6％～98．0％。结论围绕在水平段面神经周围或表面的微血管丛，可作为术中及早且直接定位面神经的手术标志，用它来迅速确定面神经水平段是可靠的。
- 陈兵戴文佳迟放鲁李华伟王正敏
- 关键词：显微外科手术面神经立体定位技术
- 中耳炎免疫研究进展被引量：7
- 2010年
- 中耳炎病理过程受到多种因素的影响,其中免疫因素在这一过程中扮演了重要角色。近年来,随着分子生物学及免疫学研究进展,中耳作为独立免疫防御系统的理论逐渐被接受,本文就中耳炎发病机制、病理、预防接种及治疗与免疫的关系进行综述。
- 戴文佳王正敏
- 关键词：免疫因素中耳炎病理过程预防接种免疫学
- 肺炎链球菌核酸疫苗在恒河猴体内的免疫原性研究
- 2008年
- 目的研究肺炎链球菌溶血素（pneumolysin，PN）核酸疫苗在恒河猴体内的免疫原性。方法将肺炎链球菌溶血素全长基因和切去羧基端33个核苷酸的基因分别插入到质粒pVAX1载体中，构建成Ppn和Ppnd两种核酸疫苗。采用体内电转染初免结合相应蛋白质抗原加强的策略免疫恒河猴。结果切去肺炎链球菌溶血素基因羧基端33个核苷酸，表达的重组截短溶血素蛋白保留了抗原性但去除了溶血活性，从而保证了疫苗的安全性。给恒河猴肌肉内注射500μg核酸疫苗加电转染能诱导出特异性抗体免疫应答，用相应蛋白质加强免疫后血清抗体几何平均滴度提高了约4倍。结论采用电转染技术结合蛋白质加强免疫的策略，能增强肺炎链球菌溶血素核酸疫苗在恒河猴体内的特异性抗体水平。
- 戴文佳陈兵王正敏
- 关键词：肺炎链球菌肺炎链球菌溶血素核酸疫苗免疫应答
