徐建华
- 作品数：39 被引量：83H指数：5
- 供职机构：沈阳军区总医院更多>>
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- KAI1基因转染的胰腺癌细胞系的建立被引量：2
- 2004年
- 目的转染pCMV-KAI1重组质粒人人胰腺癌细胞株MiaPacaⅡ和Panc1,观察KAI1基因的表达,为进行KAI1基因在胰腺癌中抗转移作用的有关研究提供实验用靶细胞,并为今后利用KAI1基因治疗胰腺癌提供实验和理论依据。方法采用Westernblot方法从7种胰腺癌细胞中筛选出无KAI1表达的MiaPacaⅡ和Panc1细胞株,通过脂质体转染法将pCMV-KAI1重组质粒转染到MiaPacaⅡ和Panc1中,经G418筛选4周,获得单克隆细胞系,应用Westernblot、免疫荧光及免疫细胞化学方法检测转染细胞系KAI1蛋白的表达。结果获得了稳定表达KAI1基因的MiaPacaⅡ和Panc1胰腺癌细胞克隆;经Westernblot分析显示转染后的胰腺癌细胞株MiaPacaⅡ与Panc1有明确的分子质量为29100KAI1蛋白表达,而未转染细胞无KAI1蛋白表达;免疫荧光显示,转染的胰腺癌细胞质中可见明显的荧光,而无转染的母细胞无荧光;免疫细胞化学检测显示,无转染的细胞呈阴性反应,转染的细胞呈中到强度的阳性反应。结论pCMV-KAI1重组质粒经转染入人胰腺癌细胞株MiaPacaⅡ和Panc1后可表达KAI1蛋白,从而建立了KAI1蛋白表达的MiaPacaⅡ和Panc1细胞系。
- 徐建华郭晓钟刘民培任丽楠李宏宇吴春燕
- 关键词：KAI1基因转染胰腺癌蛋白表达
- Bcl—xL mRNA在正常肝及肝癌组织中的表达
- 2002年
- 郭晓钟邵晓冬徐建华赵佳钧吴春燕
- 关键词：MRNA免疫组织化学肝细胞癌
- DPC4基因对人胰腺癌JF305细胞系生长抑制的初步研究
- 2007年
- 目的研究DPC4基因对人胰腺癌细胞系JF305的生长抑制作用,及DPC4基因与P21d的关系。方法采用脂质体介导法将pBK-CMV-DPC4质粒导入JF305中,经G418筛选培养获得稳定表达细胞株,采用流式细胞仪法,免疫印迹法检测上述3种细胞中DPC4的表达;同时检测P21在DPC4转染前后蛋白表达水平的变化,通过测定细胞生长曲线检测JF305转染DPC4前后生长、增殖等生物学行为的改变。结果转染pBK-CMV-DPC4的JF305细胞DPC4基因表达较前增加,而未转染及转染空质粒的细胞DPC4表达无明显改变。通过MTT法测定发现转染pBK-CMV-DPC4的JF305细胞增殖能力同未转染及转染空质粒的JF305细胞相比明显受到抑制。与未转染及转染空质粒的JF305细胞相比,转染pBK-CMV-DPC4的JF305细胞中的周期蛋白激酶抑制物P21表达明显增加。结论重组DPC4基因转染人胰腺癌细胞系JF305后,可明显的抑制其生长、增殖能力,进而使其恶性程度下降。DPC4基因可能是通过上调周期蛋白依赖性激酶抑制P21蛋白表达而抑制细胞周期,抑制胰腺癌细胞的生长。
- 邵丽春邓国伟郭晓钟徐建华
- 关键词：DPC4胰腺癌基因治疗
- KAI1基因抑制胰腺癌细胞转移机制的探讨被引量：28
- 2004年
- 目的 将pCMV KAI1重组质粒转染人高转移胰腺癌细胞株MiaPaCaⅡ中 ,观察转染前后KAI1基因对胰腺癌细胞侵袭转移能力和运动能力的影响 ,从基因水平探讨KAI1基因抗胰腺癌转移机制。方法 通过脂质体转染法成功将重组质粒转染到MiaPaCaⅡ中 ,利用Transwell小室测定细胞穿膜侵袭运动能力 ,采用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳检测明胶酶活性。结果 pCMV KAI1重组质粒转染后 ,显微镜下细胞计数示转染后胰腺癌细胞穿透基底膜的数量较转染前明显减少 (P <0 0 5 ) ,细胞运动能力明显减弱。聚丙烯酰胺凝胶电泳显示负染带宽度比转染前变窄 ,亮度减弱 ,降解基质膜和细胞外基质的能力和侵袭转移能力下降。结论 KAI1基因控制胰腺癌细胞转移可能是通过抑制癌细胞侵袭及运动功能来实现的。
- 郭晓钟徐建华刘民培任丽楠王迪李宏宇吴春燕
- 关键词：KAI1基因胰腺癌细胞胰腺肿瘤基因转染
- KAI1基因抑制人胰腺癌细胞转移的体内实验被引量：2
- 2006年
- 目的研究体内直接注射KAI1基因抗胰腺癌转移作用。方法MiaPaCa胰腺癌细胞裸鼠皮下接种后,随机分为2个大组(接种后第10天和第21天治疗组),每组再分别瘤内注射pCMV-KAI1重组质粒100μg,pCMV-KAI1-脂质体(50μg∶50μg)和生理盐水,每7d注射1次,共注射3次。于第50天观察KAI1对胰腺癌生长转移影响。结果接种后10d进行基因注射组中,KAI1治疗组和脂质复合物治疗组肿瘤体积、瘤重、肺重、肝重和肺表面转移结节数均小于对照组(P<0.05),体积抑瘤率分别为63.79%和73.51%,瘤重抑瘤率分别为77.12%和83.26%,肺重分别为(0.33±0.09)g和(0.30±0.09)g,肝重分别为(1.01±0.27)g和(0.99±0.21)g,对照组肺肝重分别为(0.45±0.09)g和(1.62±0.39)g,对照组肺表面转移结节数平均为(2.33±1.63)个,治疗组结节数仅为(0.5±0.83)个。pCMV-KAI1治疗组与脂质复合物治疗组相比差异无显著性(P>0.05);接种后21d进行基因注射组中,治疗组肿瘤体积、瘤重、肺重、肺转移灶和肝重与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。结论KAI1基因瘤内注射具有抑制MiaPaCa胰腺癌生长及转移作用,KAI1基因对已成瘤的胰腺癌生长的抑制作用与瘤内给药时间密切相关。
- 徐建华任丽楠邵丽春郭晓钟刘民培
- 关键词：胰腺肿瘤KAI1基因
- 人类生长抑素受体亚型在胰腺癌细胞系的表达及意义
- 目的生长抑素具有强大的生物学效应,其作用是通过应答细胞膜上的特异性生长抑素受体 (SSTR)介导的。生长抑素类似物(SSA)可以抑制肿瘤细胞增殖和诱导肿瘤细胞凋亡,并具有受体亚型的选择性。明确生长抑素的生物学作用,生长抑...
- 李宏宇郭晓钟徐建华赵佳钧吴春燕
- 关键词：胰腺癌细胞系生长抑素受体亚型
- 文献传递
- KAI1 RNA探针的制备及其在胰腺癌中的应用被引量：2
- 2002年
- 目的 制备DIG标记KAIl RNA探针和分析KAIl基因在胰腺癌中的表达。方法 以线性KAIl基因DNA质粒为模板,采用体外转录法掺入DIG-11-UTP制备RNA探针,并通过化学发光法检测。应用该探针通过Northern blot对12例正常胰腺组织和30例原发性胰腺癌组织中的KAIl基因mRNA进行分析。结果 该方法标记的KAIl RNA探针浓度为1 ug/μl时即可检测。Northern bolt分析发现25例无转移的胰腺癌中KAIl基因在2.4kb处存在明显的杂交信号,5例发生转移的晚期胰腺癌杂交信号较弱,正常胰腺组织中该基因的表达水平呈阴性或弱阳性。结论 本法标记的KAIl RNA探针灵敏度高,KAIl基因低表达与胰腺癌的转移有关。
- 徐建华郭晓钟刘民培邵晓冬任丽楠安天义沈阳军区总医院消化内科王迪李宏宇赵佳钧
- 关键词：胰腺癌KAI1基因RNA探针
- DPC4基因对人胰腺癌细胞JF305生长和增殖的影响
- 目的本文通过研究肿瘤抑制基因 DPC4对人胰腺癌细胞系 JF305生物学行为的影响,探讨 DPC4基因抑制胰腺癌生长的机制,为此癌的基因治疗提供理论及实验依据。方法选择无 DPC4表达的人胰腺癌细胞系 JF305为实验细...
- 吴春燕徐建华邵丽春郭晓钟
- 关键词：人胰腺癌细胞胰腺癌细胞系JF305
- 文献传递
- 体内抑制胰腺癌生长和转移作用的实验治疗研究
- 目的研究体内直接注射 KAⅡ基因抗胰腺癌转移作用,为临床胰腺癌治疗提供依据。方法首先建立胰腺癌荷瘤裸鼠模型,将人胰腺癌细胞株 MiaPacaⅡ在体外常规传代培养,当细胞处于对数生长期时,用胰酶消化、洗涤离心并计数,将(1...
- 田宏徐建华郭晓钟
- 关键词：胰腺癌
- 文献传递
- KAI1基因在胰腺癌中的突变分析被引量：2
- 2001年
- 目的 探讨KAI1基因在胰腺癌中的突变情况。方法 对17例伴有淋巴结转移的原发性胰腺癌（Ⅲ期）,7例无淋巴结转移的原发性胰腺癌（2例Ⅰ期,5例Ⅱ期）和9例正常胰腺组织标本进行KAI1基因突变分析。结果 24例胰腺癌标本中,7例证实有KAI1点突变。这种突变出现在886位核苷酸上,导致从A到G的转变,缬氨酸置换异亮氨酸,且有突变的癌标本均属于晚期有转移的胰腺癌（Ⅲ期）。结论 上述结果提示KAI1基因突变使KAI1 mRNA水平降低可能是胰腺癌转移的主要因素之一。
- 郭晓钟徐建华李爱娟邵晓冬FriessHBechlerMW
- 关键词：KAI1基因胰腺癌基因突变聚合酶链反应
