徐义刚 作品数:143 被引量:291 H指数:9 供职机构: 东北农业大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家质检总局科技计划项目 重庆市科技计划项目 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 医药卫生 轻工技术与工程 更多>>
乳酸杆菌pPG质粒表达系统理想表达条件的探索 被引量:2 2007年 对乳酸杆菌pPG质粒表达系统理想表达条件进行了探索。以干酪乳杆菌Lactobacillus casei 393为宿主菌,β-葡萄糖苷酸酶(gusA)基因作为表达的报告基因,根据干酪乳杆菌的生长特性对细胞表面表达载体pPG表达过程中各个关键因素的影响进行了探索。得出最佳表达条件:将其培养于质量浓度为1%乳糖,初始pH值在6.0~6.5之间的MRS培养基中,30~32℃,静止培养至A590OD达0.5,培养时间约8 h,表达效率最高,外源蛋白的表达量可占菌体总蛋白的14%。 夏春丽 马广鹏 陈忠广 秦玉敏 徐义刚 乔薪瑗 姜雪 李一经关键词:乳酸杆菌 干酪乳杆菌 宿主细胞蛋白HSPA2与TGEV Nsp2的相互作用及其对病毒复制的影响 被引量:2 2020年 为了探究猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)非结构蛋白2(Nsp2)与宿主细胞热休克蛋白70-2(HSPA2)的相互作用,以及HSPA2表达对TGEV复制的影响,试验利用RT-PCR方法获得猪源HSPA2基因并构建其真核表达载体pCMV-Myc-HSPA2,通过Western-blot和间接免疫荧光试验检测真核表达载体pCMV-Myc-HSPA2在IPEC-J2细胞中的表达情况。利用免疫共沉淀(Co-IP)和共定位试验进一步验证TGEV Nsp2和宿主细胞蛋白HSPA2之间是否存在相互作用,利用基因过表达技术在IPEC-J2细胞中过表达HSPA2后接种TGEV,分别测定接种后36,48小时时病毒TCID50。结果表明:真核表达载体pCMV-Myc-HSPA2能够在IPEC-J2细胞中成功表达,HSPA2与Nsp2之间存在相互作用,并且HSPA2表达量升高后TGEV的TCID50略有升高。说明宿主细胞蛋白HSPA2与TGEV Nsp2之间存在相互作用,且HSPA2的表达对TGEV复制具有一定促进作用。 王亚楠 韩露露 孙傲颖 姜艳平 崔文 崔文 唐丽杰 乔薪瑗 李一经 唐丽杰关键词:病毒复制 真核表达 4型蓝舌病病毒VP2蛋白中和性B细胞抗原表位多肽及其应用 本发明公开了一种4型蓝舌病病毒VP2蛋白中和性B细胞抗原表位多肽及其应用。本发明采用噬菌体展示技术对BTV VP2蛋白抗原表位氨基酸进行筛选。经过3轮淘选后进行测序,测序结果经分析比对后获得共同的短肽序列为<Sup>16... 唐丽杰 李一经 徐义刚 王丽 乔薪瑗 姜艳平 崔文 李佳璇一种猫干扰素ω及其制备方法和在抗病毒中的应用 本发明公开了一种猫干扰素ω及其制备方法和在抗病毒中的应用。所述的猫干扰素ω的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。优选的,编码所述的猫干扰素ω的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。此外,本发明还公开了一种制备所述的... 徐义刚 王紫微 王丽 范文禄 朱妍文献传递 表达牛乳铁蛋白肽的胸腺嘧啶核苷酸合成酶基因缺陷型重组干酪乳杆菌及其构建方法和应用 本发明公开了一种表达牛乳铁蛋白肽的胸腺嘧啶核苷酸合成酶基因缺陷型重组干酪乳杆菌及其构建方法和应用,所述的重组干酪乳杆菌是通过以胸腺嘧啶核苷酸合成酶基因(thyA)为插入替换位点,插入牛乳铁蛋白肽的表达盒后得到。本发明构建... 唐丽杰 周晗 王丽 乔薪瑗 徐义刚 姜艳平 崔文 李一经 王宗莹文献传递 用于猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒以及猪轮状病毒检测的DPO引物组及其应用 本发明公开了一种用于猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒以及猪轮状病毒检测的DPO引物组及其应用。本发明针对TGEV‑N基因、PEDV‑N基因和PRoV‑VP7基因分别设计了一对DPO引物,建立了猪传染性胃肠炎病毒、猪流... 徐义刚 王紫微 王丽 姜艳平 唐丽杰 李一经文献传递 4型蓝舌病病毒VP2单克隆抗体抗原表位的鉴定 2017年 为鉴定蓝舌病病毒(BTV)的单克隆抗体(MAb)所识别的VP2蛋白竞争抑制型特异性抗原表位,本研究采用噬菌体展示技术对BTV VP2蛋白抗原表位氨基酸进行筛选。经过3轮淘选后进行测序,测序结果经分析比对后获得共同的短肽序列为^(160)NH^(161)。^(160)NH^(161)与已有的单抗杂交瘤细胞4A-1G7上清、腹水均发生特异性反应,并且^(160)NH^(161)与4型BTV阳性标准血清反应良好。本研究结果为4型BTV检测方法的建立及VP2蛋白结构和功能的研究奠定了基础。 李佳璇 臧明鑫 谢双羽 徐义刚 姜艳平 崔文 李一经 唐丽杰关键词:蓝舌病病毒 VP2 抗原表位 表达乳铁蛋白肽的猪源罗伊氏乳酸杆菌对断乳仔猪抗霍乱沙门菌感染的效果分析 被引量:4 2021年 旨在分析表达牛乳铁蛋白肽的重组猪源罗伊氏乳酸杆菌pPG-LFCA-E/LR-CO21作为饲用微生态制剂对仔猪促生长与抵抗猪霍乱沙门菌感染的作用。将该重组菌连续饲喂28日龄断乳仔猪21 d,并设立空菌组、对照组以及抗生素组。第21天时对断乳仔猪连续口服感染猪霍乱沙门菌3 d,并设置7 d的观察期;仔猪感染后采集试验组与对照组血清、肠黏液及肠组织。检测结果显示重组菌组仔猪平均日增重与免疫器官指数均显著提高(P<0.05),料重比极显著降低(P<0.01)。感染猪霍乱沙门菌后,相对于对照组,重组菌组仔猪日增重提高,腹泻率降低;重组菌组仔猪血液中IgG以及肠黏液中IL-4、sIgA的量极显著提高(P<0.01),IL-2、IL^(-1)2、IL-6的量显著降低(P<0.05);重组菌组仔猪肠道紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-1的基因转录水平和TLR4、Myd88和MLCK的基因转录水平极显著提高(P<0.01),仔猪肠道内猪霍乱沙门菌的数量极显著降低(P<0.01);重组菌组与抗生素组无明显差异(P>0.05)。以上结果表明,表达牛乳铁蛋白肽的重组猪源罗伊氏乳酸杆菌pPG-LFCA-E/LR-CO21可以提高断乳仔猪的生长性能、促进肠道形态发育、增强肠道屏障功能,并且在一定程度上可以保护仔猪免受猪霍乱沙门菌的感染,表明重组菌作为微生态制剂替代断乳仔猪的饲用抗生素具有一定的应用前景。 王雪莹 高亢 蔡吉垚 张森豪 解伟纯 王晓娜 崔文 姜艳平 姜艳平 王丽 周晗 徐义刚 王丽 唐丽杰关键词:乳铁蛋白肽 猪霍乱沙门菌 断乳仔猪 一种同时表达产气荚膜梭菌α、β2、ε、β1外毒素的重组乳酸杆菌及其构建方法和应用 本发明公开了一种同时表达产气荚膜梭菌α、β2、ε、β1外毒素的重组乳酸杆菌及其构建方法和应用。本发明以从基因水平去毒性化改造的产气荚膜梭菌α、β1、β2和ε外毒素为免疫原,改造后的外毒素完全失去致病性,但仍保留其免疫原性... 徐义刚 王丽 李一经 唐丽杰 乔薪瑗文献传递 中国林蛙皮肤抗菌活性肽的分离提取 被引量:11 2005年 将中国林蛙毁双髓,置冰浴中迅速剥皮,冲洗血污后粉碎,经 80%甲醇抽提 2次;再经sephadexG-100、sephadexG-25和聚丙烯酰胺凝胶电泳分离等,从林蛙皮肤中分离获得 5种小分子多肽。抗菌活性试验表明:经sephadexG-25凝胶过滤获得的小分子多肽洗脱峰第 6峰,对革兰氏阴性菌及革兰氏阳性菌具有较强的抗菌活性;SDS-PAGE电泳表明为单一区带,此抗菌活性多肽的相对分子量为 4. 31ku。 肖向红 徐义刚 柴龙会关键词:中国林蛙 皮肤