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彭琬昕: 作品数：18 被引量：34H指数：4; 供职机构：江苏大学医学院基础医学系更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家重点实验室开放基金江苏省高校自然科学研究项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>

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低氧应激下Egr-1对人肝癌细胞迁移、增殖以及药物敏感性的影响: 低氧是实体肿瘤的重要特征,可以激活细胞内多条信号通路,是肿瘤血管生成的重要促进因素。低氧还可以通过选择素(selectin)和整合素(integrin)介导的通路调节肿瘤细胞与内皮细胞的粘附,并且低氧调节的这种粘附过程与...; 彭琬昕; 关键词：低氧应激人肝癌细胞细胞迁移药物敏感性; 文献传递

重组腺病毒载体介导人LASS2基因在肝癌细胞转移中的抑制作用被引量：6: 2012年; 目的:探讨人源性长寿保障基因(homo-sapiens longevity assurance homologue 2 of yeast LAG1,LASS2)对人肝癌HCCLM3细胞体外转移的影响及可能的作用机制。方法:构建含人LASS2基因的重组腺病毒并转染入HCCLM3细胞;采用蛋白质印迹法检测HCCLM3细胞中LASS2蛋白的表达水平;划痕实验及体外侵袭实验检测LASS2基因过表达对HCCLM3细胞在迁移和侵袭等转移能力上的改变;免疫共沉淀法验证LASS2蛋白与V-ATPase(vacuolarH+-ATPase)质子泵中的c亚基(ATP6L)在细胞内相互结合的情况;通过对细胞内外H+浓度的测定,探讨LASS2过表达对V-ATPase功能抑制的情况。结果:成功构建了含人LASS2基因的重组腺病毒,LASS2基因在HCCLM3细胞中能有效表达;LASS2过表达可使HCCLM3细胞的侵袭和迁移能力均明显下降(P<0.01),其中侵袭能力下降达(48.3±7.6)%,穿过划痕的细胞个数从对照组的(59.00±6.87)个下降至(10.83±3.75)个;LASS2蛋白与ATP6L蛋白在HCCLM3细胞内特异性结合;LASS2过表达后,细胞内外H+浓度发生明显变化,表明V-ATPase质子泵功能受到抑制。结论:LASS2基因在HCCLM3细胞中过表达可抑制肝癌细胞的迁移和侵袭能力,其机制可能与LASS2蛋白结合ATP6L,抑制其分泌H+功能相关。; 游海燕金洁唐宁邵根宝彭琬昕龚爱华覃文新; 关键词：肿瘤转移

Tet-off诱导表达Egr-1HEK293稳定细胞株的建立和鉴定被引量：1: 2014年; 目的:利用大肠埃希菌Tet-off诱导表达调控系统构建多西环素调控的稳定细胞株。方法:以pEGFPEgr-1质粒为模板,扩增含早期生长反应蛋白(early growth response-1,Egr-1)完整开放阅读框的DNA序列,经酶切后插入含四环素反应元件(tetracycline responsive element,TRE)序列的表达载体pTRE2hyg,获得重组质粒pTRE2hyg-Egr-1,将其转染293Tet-off细胞株,并用G418和多西环素筛选稳定表达Egr-1的细胞株。蛋白质印迹法检测多西环素诱导表达Egr-1情况;流式细胞术检测细胞增殖能力。结果:蛋白质印迹结果显示,外源性Egr-1蛋白表达受细胞培养液中多西环素调控,当从细胞培养液中去除多西环素后,Egr-1表达量明显升高。流式细胞检测结果显示Egr-1高表达细胞的增殖能力明显高于Egr-1低表达细胞。结论:利用Tet-off体系成功构建Egr-1诱导表达的细胞株,细胞的增殖能力受Egr-1表达水平的影响。; 彭琬昕孟凡力金洁龚爱华; 关键词：多西环素

pDsRED-LC3真核表达载体的构建及其在肝癌细胞系HepG2中的表达和定位: 2012年; 本实验根据已知的人MAP-LC3序列,以人脑胶质瘤U251细胞cDNA为模板扩增出去除终止密码子的MAP-LC3片段,定向克隆至红色荧光融合蛋白载体pDsRed-N1质粒中,构建了重组质粒pDsRed-LC3.将pDsRed-LC3转染HepG2细胞,48 h后用Western Blot、激光共聚焦显微镜检测融合蛋白在细胞内的表达和分布情况,并观察血清饥饿时细胞发生自噬的情况.结果表明:(1)成功构建pDsRFP-LC3真核表达载体,该载体能在人肝癌细胞中表达;(2)血清饥饿应激实验证明,该载体可以良好地指示自噬泡的形成过程,为研究肿瘤细胞的自噬发生情况提供了一个重要而方便的工具.; 彭琬昕孙瑶湘陈琛金洁邵根宝王嫘; 关键词：红色荧光蛋白自噬肝癌

ADAM17调控Hippo信号转导通路对人脑胶质瘤细胞增殖和迁移的影响: 2016年; 为探讨去整合素-金属蛋白酶17(disintegrin and metalloproteinase 17,ADAM17)对人胶质瘤细胞增殖和迁移的影响及其调控机制,该研究用ADAM17 sh RNA质粒转染ADAM17高表达的胶质瘤细胞U87MG、U251MG,用过表达ADAM17载体转染ADAM17低表达细胞SW1783,q-PCR和Western blot检测ADAM17表达水平的变化,同时检测ADAM17和Hippo信号通路中相关蛋白质表达水平,CCK-8法分析细胞增殖能力并绘制生长曲线,划痕实验检测细胞迁移率。结果表明,下调ADAM17后,U87MG、U251MG细胞增殖和迁移能力减弱,而Hippo信号通路中MST2、p-MOB1、p-YAP蛋白表达水平升高;上调ADAM17后,SW1783细胞增殖和迁移能力增强,而MST2、p-MOB1、p-YAP蛋白表达水平降低。结果说明,ADAM17在脑胶质瘤细胞的增殖和迁移中发挥了重要作用,这可能是通过抑制Hippo信号通路来实现的,MST2被抑制,p-MOB1水平降低,从而YAP的磷酸化水平也降低,促进了胶质瘤细胞的增殖和迁移。; 张春利韩秀熊二梦彭琬昕杜凤仪周海浪龚爱华; 关键词：ADAM17 胶质瘤细胞增殖细胞迁移

腺病毒介导的RNA干扰降低VEGF转录抑制血管形成的研究: 2007年; 用细菌内同源重组的方法构建了针对VEGF的siRNA表达重组腺病毒AdH1-siRNA/VEGF,感染HUVEC细胞,观察该病毒对HUVEC细胞体外增殖和形成微血管的干扰作用.通过Real-timeRT-PCR实验表明,AdH1-siRNA/VEGF可特异性地下调血管内皮细胞(HUVEC)中的VEGFmRNA水平.与对照组相比,VEGF的mRNA水平下降为50%,AdH1-siRNA/VEGF对HUVEC细胞增殖有干扰作用.加入病毒9d后,对照组的细胞平均计数为31.5×104/μL,干扰病毒对照组为28×104/μL,AdH1-siRNA/VEGF干扰组为21.5×104/μL.AdH1-siRNA/VEGF对HUVEC细胞在Matrigel上形成微血管有干扰作用,对照组每HPF形成微血管数量为10.75条,干扰病毒对照组为10.25条,实验组AdH1-siRNA/VEGF每HPF形成微血管数量为7条.证明AdH1-siRNA/VEGF可以干扰血管形成.; 许剑锋沈维干彭琬昕李朝军; 关键词：血管生成 RNA干扰

腺病毒介导的RNA干扰降低VEGF受体FLT-1,KDR转录抑制血管形成: 2014年; 本研究用细菌内同源重组的方法构建了针对VEGF受体FLT-1,KDR的siRNA表达重组腺病毒Ad H1-siRNA/FLT-1和Ad H1-siRNA/KDR,感染HUVEC细胞,观察两种病毒对HUVEC细胞体外增殖和形成微血管的干扰作用.通过RT-PCR实验表明,Ad H1-siRNA/FLT-1和Ad H1-siRNA/KDR均可特异性地下调血管内皮细胞(HUVEC)中的FLT-1mRNA和KDR mRNA水平.与对照组相比,FLT-1的mRNA水平下降为40%,KDR的mRNA水平下降为52%.Ad H1-siRNA/FLT-1和Ad H1-siRNA/KDR对HUVEC细胞增殖均有干扰作用,加入病毒9 d后,对照组的细胞平均计数为31.5×104/μL,Ad H1-siRNA/FLT-1干扰病毒对照组为28×104/μL,Ad H1-siRNA/KDR干扰组为21.5×104/μL.Ad H1-siRNA/FLT-1和Ad H1-siRNA/KDR对HUVEC细胞在Matrigel上形成微血管均有干扰作用,对照组每HPF形成微血管数量为10.75条,Ad H1-siRNA/FLT-1干扰病毒对照组为10.25条,实验组Ad H1-siRNA/KDR每HPF形成微血管数量为7条.证明Ad H1-siRNA/FLT-1,Ad H1-siRNA/KDR均可干扰血管形成.; 许剑锋沈维干彭琬昕; 关键词：血管生成血管内皮生长因子受体 RNA干扰

应用体外DNA同源重组技术构建pcDNA3.1-NGF和pcDNA3.1-TrkA: 2011年; 目的:利用体外DNA同源重组的方法分别构建含神经生长因子(NGF)和神经生长因子受体(TrkA)基因的真核表达载体。方法:在引物5'加上一段与载体克隆位点两端碱基序列相同的序列,PCR扩增目的基因NGF和TrkA,线性载体片段和目的基因片段经T4 DNA聚合酶的外切产生互补的单链DNA,然后37℃退火实现体外同源重组,转化并鉴定;将重组质粒转染293A细胞,免疫印迹鉴定目的基因的表达情况。结果:成功构建真核载体pcDNA3.1-NGF和pcDNA3.1-TrkA,转染细胞后的表达产物相对分子质量分别是31×103和140×103。结论:与常规重组技术相比,体外DNA同源重组技术是一种高效的DNA重组方法,且不需考虑目的片段的限制性酶切位点。; 张严龚爱华金洁邵根宝彭琬昕; 关键词：TRKA 神经生长因子

SAHA诱导的p21表达致U251MG细胞抗凋亡效应被引量：4: 2013年; 目的探讨SAHA诱导的p21在脑胶质瘤细胞U251MG中的生物学作用。方法采用免疫印迹技术、RAN干扰技术和流式细胞技术分析了p21的表达水平与SAHA引起的U251MG细胞周期阻滞和细胞死亡的相关性。结果与对照组相比较,p21-ShRNA组明显提高了U251MG细胞凋亡的比例,达到45%左右,活化的凋亡相关蛋白Caspase-3,-8,-9表达水平明显增加;p21-ShRNA组细胞周期调控蛋白cdc25c、cdc2的磷酸化水平和总蛋白质水平也明显上调,clycinB1和磷酸化的H3水平明显提高。结论在SAHA处理条件下,p21下调使U251MG细胞阻滞于细胞周期G2/M期,促进了细胞凋亡。; 龚爱华熊二梦张严杜凤移彭琬昕邵根宝金洁程建军; 关键词：SAHA 胶质瘤细胞 P21 组蛋白去乙酰化酶

腺病毒介导的IL-24基因抑制人脑胶质瘤细胞增殖的机制研究: 2010年; 目的:探讨IL-24抑制人脑胶质瘤细胞增殖的可能机制。方法:用腺病毒介导的IL-24(Ad.IL-24)及腺病毒空载体感染人脑胶质瘤细胞U251,通过荧光显微镜观察腺病毒的感染效率,RT-PCR法检测IL-24的转录水平;用MTT法、流式细胞仪检测IL-24对U251细胞增殖的影响;用蛋白质印迹方法检测神经生长因子(NGF)、酪氨酸激酶受体A(tyrosine kinase A,TrkA)的表达水平,并分析其相关性。结果:Ad.IL-24及腺病毒空载体转染U251后,RT-PCR结果显示Ad.IL-24组出现高表达电泳条带,而腺病毒空载体组则未出现电泳条带;MTT结果显示Ad.IL-24明显抑制了U251细胞的增殖,且流式细胞仪细胞周期检测发现Ad.IL-24处理组较对照组G2/M期明显延长,蛋白质印迹结果显示过表达IL-24的U251细胞中NGF及TrkA表达降低。结论:IL-24可能通过减少细胞中TrkA和NGF的表达来抑制肿瘤细胞的增殖。; 张铁军袁志诚张严赵婷婷王青叶思思李巧玉湛利平杨勇金洁邵根宝彭琬昕龚爱华; 关键词：白细胞介素24 神经生长因子胶质瘤细胞

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