张洁
- 作品数：15 被引量：23H指数：4
- 供职机构：川北医学院基础医学院免疫学与分子生物学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金四川省教育厅科学研究项目四川省应用基础研究计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 杜氏利什曼原虫无鞭毛体表达抗原的Westernblot和MALDI-TOF／TOF分析被引量：2
- 2014年
- 目的鉴定体氏利什曼原虫无鞭毛体特异表达抗原。方法培养杜氏利什曼原虫前鞭毛体并体外转化无鞭毛体，其总蛋白经2-DE电泳后以小鼠抗杜氏利什曼原虫无鞭毛体血清进行Western blot，对前鞭毛体与无鞭毛体特砰表达抗原蛋白进行MALDI-TOF／TOE串联质谱鉴定。重组表达无鞭毛体特异表达抗原编码基因，以Westernblot法对重组蛋白进行鉴定。结果等量的杜氏利什曼原虫前鞭毛体与无鞭毛体蛋白经2-DE电泳均可呈现680～742个蛋门点，Westernblot及MALDI-TOF／TOFMS分析甘油醛3-磷酸脱氢酶与延伸因子2为杜氏利什曼原虫前鞭毛体特异表达抗原，核甘二磷酸激酶为无鞭毛体特异表达抗原。重组核苷二磷酸激酶编码基因表达产物经Westernblot证实为朴氏利什曼原虫无鞭毛体特异表达强抗原。结论杜氏利什曼原虫前鞭毛体与无鞭毛体抗原表达存存差异，核甘二磷酸激酶为杜氏利什曼原虫无鞭毛体特异表达强抗原。
- 王健关望张仁刚张洁敬保迁
- 关键词：杜氏利什曼原虫感染免疫
- 原核表达载体pKpL5的构建及应用研究
- 2008年
- 目的构建基因工程生产用高效原核融合表达质粒载体。方法在原核表达质粒pKpL4起始密码下游嵌入人工合成的六聚组氨酸编码区、16s RNA3端互补区、凝血酶识别位点编码区接头,构建成原核表达质粒pKpL5,并将人生存素单体、双体及利什曼原虫LACK抗原基因编码区分别克隆入pQE32、pKpL4和pKpL5进行表达,SDS-PAGE电泳分析各目的蛋白的表达量。结果人生存素单体、双体及利什曼原虫LACK抗原基因读码框在pQE32和pKpL4质粒载体内均不表达,而在pKpL5内,其目的蛋白表达量分别占细菌总蛋白量的5.1%,19%和35%。结论pKpL5可用作通用原核高效表达质粒载体表达各种目的基因。
- 张仁刚敬保迁张洁
- 关键词：原核表达质粒
- 不同种株利什曼原虫前鞭毛体体外向无鞭毛体转化的研究被引量：2
- 2009年
- 目的观察不同种株利什曼原虫前鞭毛体在不同体外培养条件下向无鞭毛体的转化。方法将6个对数生长期的不同种株利什曼原虫前鞭毛体接种于含M199和RPMI1640复合培养液的24孔板内,在不同温度、pH值、血清、CO2下培养,第3天和第6天分类计数不同形态的原虫。结果当培养温度为26℃,而其他培养条件发生变化时,利什曼原虫的增殖速度发生变化,大多数原虫保持前鞭毛体典型性形态,运动活跃。当培养温度上升至37℃,不论其他培养条件如何变化,原虫均沉积于培养孔底,停止增殖,运动减缓,显著地向中间体和无鞭毛体转化,酸性pH值和5%CO2可促进前鞭毛体转化为无鞭毛体,新生小牛血清可延长无鞭毛体的成活。但相同的培养条件下,杜氏利什曼原虫转化效率低于其他种株利什曼原虫。结论温度是影响利什曼原虫前鞭毛体转化为无鞭毛体的基本因素,酸性pH值与CO2可协同温度促进转化,不同种株利什曼原虫的遗传异质性可影响转化效率。
- 张仁刚敬保迁张洁杨健
- 关键词：利什曼原虫无鞭毛体体外培养
- 不同种株利什曼原虫抗原的多样性研究被引量：2
- 2013年
- 目的观察不同种株利什曼原虫抗原的异质性。方法培养杜氏利什曼原虫、热带利什曼原虫及婴儿利什曼原虫前鞭毛体及体外转化无鞭毛体,提取总蛋白,经SDS-PAGE电泳后,分别以抗杜氏利什曼原虫及热带利什曼原虫前鞭毛体血清进行Western blot,分析抗原的多样性。结果经SDS-PAGE电泳和考马斯亮蓝染色,杜氏利什曼原虫、热带利什曼原虫及婴儿利什曼原虫前鞭毛体及体外转化无鞭毛体总蛋白呈现出分子质量单位为12～150ku的相似蛋白带型;Western blot显示,抗杜氏利什曼原虫前鞭毛体多克隆血清识别的抗原组分与抗热带利什曼原虫前鞭毛体多克隆血清识别的抗原相似;3种利什曼原虫前鞭毛体和无鞭毛体存在48、65及35ku共同抗原,杜氏利什原虫和婴儿利什曼原虫的无鞭毛体存在38ku期特异抗原,热带利什曼原虫的前鞭毛体和无鞭毛体存在45、24ku种特异抗原。结论杜氏利什曼原虫、热带利什曼原虫及婴儿利什曼原虫间存在抗原多样性,为认识利什曼病感染免疫提供了新的视角。
- 王健张仁刚张洁敬保迁
- 关键词：利什曼原虫感染免疫
- 基因工程生产用原核表达质粒载体——pKpL5及其构建方法
- 本发明公开了一种基因工程生产用原核表达质粒载体——pKpL5及其构建方法，其特征在于：在含有双启动子、双SD区、rrnb转录终止子的pKpL4原核质粒载体的起始码下游嵌入人工合成的六聚组氨酸编码区、16s rRNA3’端...
- 敬保迁马大龙张洁
- 文献传递
- 基因工程生产用原核表达质粒载体——pKpL5及其构建方法
- 本发明公开了一种基因工程生产用原核表达质粒载体——pKpL5及其构建方法，其特征在于：在含有双启动子、双SD区、rrnb转录终止子的pKpL4原核质粒载体的起始码下游嵌入人工合成的六聚组氨酸编码区、16s rRNA3’端...
- 敬保迁马大龙张洁
- 文献传递
- 利什曼原虫无鞭毛体体外转化的初步研究
- 利什曼原虫可引起严重危害人类健康及生命的疾病,其生活史包括在媒介昆虫白蛉体内的前鞭毛体期和哺乳动物体内的无鞭毛体期。各种利什曼原虫无鞭毛体的体外转化近年才相继研究,我们将经NNN培养基培养后的杜氏利什曼原虫四川人株(SC...
- 杨健张仁刚敬保迁张洁
- 文献传递
- 杜氏利什曼原虫表达位点相关基因样蛋白的分子克隆及表达定位被引量：1
- 2014年
- 目的克隆杜氏利什曼原虫(Leishmania donovani)无鞭毛体特异表达新基因,观察其编码蛋白的亚细胞定位。方法制备杜氏利什曼原虫前鞭毛体和无鞭毛体m RNA,以消减抑制杂交技术筛选无鞭毛体新的表达序列标签,扩增含有新表达序列标签的基因全长c DNA,Northen杂交和RT-PCR检测新基因在前鞭毛体和无鞭毛体中的表达,共表达方法观察杜氏利什曼原虫内新基因编码蛋白的亚细胞定位。结果构建了杜氏利什曼原虫无鞭毛体表达序列标签消减文库,克隆到一个新基因,命名为表达位点相关基因样蛋白(ESAGLP)基因,其c DNA全长为2 258 bp,编码620 aa。ESAGLP基因仅在无鞭毛体内表达,其编码蛋白定位于线粒体。结论 ESAGLP鉴定为杜氏利什曼原虫无鞭毛体新基因,其编码蛋白定位于无鞭毛体的线粒体。
- 刘鹏张仁刚张洁敬保迁
- 关键词：杜氏利什曼原虫
- 杜氏利什曼原虫前鞭毛体和无鞭毛体的比较蛋白质组学分析被引量：8
- 2009年
- 目的应用蛋白质组学技术分析杜氏利什曼原虫前鞭毛体和无鞭毛体蛋白质表达状况。方法分别提取和纯化杜氏利什曼原虫四川SC6株前鞭毛体与纯培养无鞭毛体的总蛋白,分别经pH3～10的预制胶条进行双向电泳分离,凝胶用考马斯亮蓝染色,凝胶图像以PDQuest1.0软件分析,并对主要差异表达蛋白点用电喷雾质谱法进行鉴定。结果等量的前鞭毛体与纯培养的无鞭毛体总蛋白经双向电泳分离后均可获近700个蛋白点,其中超过90%的蛋白点的分布和相对强度基本一致。与前鞭毛体比较,6个蛋白点在无鞭毛体蛋白中明显高表达,3个蛋白点低表达。6个明显高表达的蛋白点中有5个为已知功能蛋白,分别为Reiske铁硫蛋白前体、α微管蛋白、过氧化物酶1、二氢硫辛酰胺乙酰转移酶前体和甘露糖-1-磷酸瓜氨酸转移酶;3个低表达的蛋白点中有2个为已知功能蛋白,分别为热休克蛋白70和β微管蛋白。这些差异调节表达蛋白与碳水化合物/能量代谢,应激反应,细胞膜和细胞骨架形成相关。结论前鞭毛体与无鞭毛体蛋白质的表达存在差异。
- 敬保迁邓世山张仁刚张洁
- 关键词：杜氏利什曼原虫前鞭毛体无鞭毛体比较蛋白质组学
- 不同种株利什曼原虫的比较蛋白质组学分析被引量：4
- 2009年
- 目的观察不同种株利什曼原虫前鞭毛体蛋白质表达状况。方法制备杜氏利什曼原虫四川SC6株、杜氏利什曼原虫四川SC10株和硕大利什曼原虫5ASKH株前鞭毛体总蛋白,以pH范围3-10的预制胶条进行双向电泳(2-D),考马斯亮蓝染色,PDQust软件分析凝胶,主要差异蛋白点用电喷雾质谱法进行鉴定。结果等量的杜氏利什曼原虫四川SC6株、杜氏利什曼原虫四川SC10株和硕大利什曼原虫5ASKH株前鞭毛体总蛋白均获近700个蛋白点,不同种株利什曼原虫前鞭毛体蛋白质2-D图谱中,14蛋白点呈恒定差异表达,从中鉴定出10个功能明确的蛋白质,分别具有下列生物功能:糖代谢与磷脂合成(烯醇酶、变旋酶、NADP依耐乙醇脱氢酶、乙醇胺磷酸胞苷酸转移酶),压力反应(细胞内过氧化物酶、锥虫还原蛋白过氧化物酶),细胞膜/细胞骨架(α-微管蛋白、β-微管蛋白),核酸代谢(琥珀酰辅酶A连接酶(GDP形成)、内源性RNA酶L-PSP(pb5)),细胞周期与增殖(延伸因子2)。结论不同种株利什曼原虫前鞭毛体蛋白质的表达存在不同,为理解不同种株利什曼原虫的毒力、免疫原性和代谢特征提供了新的视角。
- 沈成义邓世山张仁刚张洁敬保迁
- 关键词：利什曼原虫比较蛋白质组学
