孙长坡
- 作品数：79 被引量：310H指数：12
- 供职机构：国家粮食局科学研究院更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家重点基础研究发展计划公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程医药卫生更多>>
- 利用PCR-RFLP方法鉴别黄曲霉毒素产毒菌株被引量：12
- 2014年
- 【目的】开发一种精准度高、灵敏性好、简便快捷的鉴别黄曲霉毒素产毒菌株的方法,为粮食储藏中黄曲霉毒素污染提供早期预警,为食品工业的质量安全控制提供技术保障,为黄曲霉毒素污染的生物防治提供无毒微生物来源。【方法】利用生物信息学方法分别以黄曲霉(Aspergillus flavus)、寄生曲霉(Aspergillus parasitieus)、米曲霉(Aspergillus oryzae)、酱油曲霉(Aspergillus sojae)的黄曲霉毒素合成基因簇中的关键调控基因aflR及其启动子序列为研究对象,采用PCR-RFLP方法对黄曲霉毒素可能产生菌株进行鉴别分析研究;为进一步验证PCR-RFLP方法对产毒菌株区分结果,利用大豆培养基对上述菌株进行发酵培养,并利用HPLC方法测定了菌株产毒能力。【结果】生物信息学分析结果表明黄曲霉毒素可能产生菌株的aflR高度同源,但启动子和结构基因的部分碱基出现了规律性变异,并导致了限制性酶切图谱中的NheⅠ、PvuⅡ和HincⅡ等限制性酶切位点的改变;通过提取各菌株基因组DNA,PCR扩增得到aflR和启动子序列片段,测序得知片段长度分别为798 bp和515bp;PCR-RFLP鉴定结果表明产生黄曲霉毒素菌株的aflR启动子片段经NheⅠ酶切后得到176 bp和339 bp 2个片段,不产毒菌株无该限制性酶切位点;试验进一步对黄曲霉菌和寄生曲霉菌aflR结构基因的分析发现,利用HincⅡ分别处理黄曲霉和寄生曲霉的aflR的结构基因,可以分别得到3个片段(387、250和161 bp)和2个片段(548、250 bp);利用PvuⅡ分别处理黄曲霉和寄生曲霉的aflR结构基因,可以分别得到2个片段(652、146 bp)和3个片段(413、239和146 bp);产毒试验表明,米曲霉菌和酱油曲霉菌不产生黄曲霉毒素,PCR-RFLP分析表明不产毒的黄曲霉菌的确丧失了产生黄曲霉毒素的能力;产生黄曲霉毒素各曲霉菌株之间产毒能力差异显著,不但产生的黄曲霉毒素总量高低相差几十倍,其产生
- 孙长坡常晓娇伍松陵沈晗
- 关键词：黄曲霉毒素PCR-RFLP
- 苏云金芽胞杆菌HD-73菌株sigE基因敲除突变株的构建与特点被引量：4
- 2008年
- SigE因子是芽胞杆菌芽胞形成过程中起重要作用的sigma因子,它控制着众多芽胞形成相关基因的表达。在苏云金芽胞杆菌中,Cry1等杀虫晶体蛋白的表达也受SigE因子的控制。本研究利用同源重组技术构建了苏云金芽胞杆菌库斯塔克亚种标准菌株HD-73sigE缺失突变株。研究表明:突变株衰亡期提前,丧失了形成芽胞和晶体的能力;cry1Aa指导的β-半乳糖苷酶活性分析表明sigE基因对cry1Aa基因的转录有较大影响。利用载体pHT315携带sigE所在操纵子spoIIG及其启动子序列在突变株中表达,使突变株恢复了产生芽胞和形成杀虫晶体的能力,生长基本恢复正常,这些结果表明SigE因子是Bt库斯塔克亚种菌株产生芽胞和形成晶体所必需的。
- 魏娟孙长坡宋福平张杰高继国黄大昉
- 关键词：苏云金芽胞杆菌CRY基因突变
- 一种光催化降解真菌毒素的杂化材料graphene/ZnO及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种光催化降解真菌毒素的杂化材料graphene/ZnO，它是由氧化石墨烯和纳米光催化剂ZnO按照质量比为0.1‑10:100的比例经过水热合成法制得的杂化材料graphene/ZnO；另外，本发明通过石墨烯...
- 白小娟孙长坡罗晓宏伍松陵王峻柴成梁
- 文献传递
- 玉米赤霉烯酮生物合成和降解的研究进展被引量：9
- 2011年
- 介绍了玉米赤霉烯酮及其6个衍生物的分子结构,以及玉米赤霉烯酮的生物合成途径。阐述了玉米赤霉烯酮生物合成的基因序列群以及基因簇的表达方式。论述了玉米赤霉烯酮钝化和降解过程,探讨了玉米赤霉烯酮水解酶在基因工程中的应用研究,并为今后玉米赤霉烯酮生物工程降解研究提出了建议。
- 路子显伍松陵孙长坡
- 关键词：玉米赤霉烯酮衍生物基因工程去毒
- 苏云金芽孢杆菌HD-73菌株芽孢萌发条件的优化及质粒pHT73对芽孢萌发的影响被引量：9
- 2007年
- 芽孢的萌发是芽孢杆菌从芽孢成长为营养体的第一步。在芽孢菌属中,有些菌株对人畜具有致病性。研究芽孢萌发过程对解析其致病性和生理功能至关重要。本文优化了苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)芽孢的萌发条件,确定芽孢萌发的适宜条件为:缓冲液为NaH2PO4(10mmol.L-1)与NaCl(100mmol.L-1)的混合物、pH值为7.2、萌发温度为37℃,萌发剂为肌苷或L-丙氨酸(1mmol.L-1)与其它单一氨基酸(100mmol.L-1,除酪氨酸和色氨酸为1mmol.L-1)组成的混合物;利用该萌发条件,检测了苏云金芽孢杆菌菌株HD-73及其无晶体突变株HD-73-在利用不同氨基酸途径中的芽孢萌发率差异,发现缺失质粒pHT73的无晶体突变株HD-73-在肌苷与天冬氨酸和肌苷与谷氨酸为营养萌发剂的条件下,萌发率明显高于菌株HD-73,说明在质粒pHT73上可能存在对这两种途径起负调控作用的相关基因。
- 吴艳艳孙长坡高继国张杰黄大昉宋福平
- 关键词：苏云金芽孢杆菌萌发条件
- 两种强启动子在枯草芽孢杆菌中调控表达研究被引量：1
- 2015年
- 通过玉米赤霉烯酮(ZEN)降解酶基因ZLHY6的表达水平及降解酶的活性评价,比较了两种组成型强启动子P43与Plap S调控异源基因表达的效果。结果表明,在枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)Bs 168中,Plap S调控的降解酶基因得到了高效表达,在发酵12 h时降解酶活性达到最高值,酶活为219.02 U/m L。由启动子Plap S介导的ZEN降解酶基因表达载体p WBZ7可以在Bs 168中稳定遗传,为降解酶的高效分泌表达奠定了基础。
- 周艳敬常晓娇吴子丹伍松陵孙长坡
- 关键词：玉米赤霉烯酮枯草芽孢杆菌启动子
- 一种粮食和/或其副产物中真菌毒素的生物降解方法
- 本发明公开了一种粮食和/或其副产物中真菌毒素的生物降解方法。该方法以被真菌毒素污染的粮食和/或其副产物为原料，利用含有真菌毒素降解酶基因的工程菌进行发酵生产乙醇，并进一步将乙醇生产工艺中的副产物制成酒糟蛋白，该酒糟蛋白中...
- 吴子丹孙长坡任保中
- 文献传递
- 新型登蔟剂DC-1的应用试验初报被引量：3
- 2002年
- 孙长坡刘训理尤兰兰赵敬东
- 关键词：蚕儿蜕皮激素甾体激素熟蚕养蚕成绩
- 一种光催化降解真菌毒素的杂化材料graphene/C<sub>3</sub>N<sub>4</sub>及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种光催化降解真菌毒素的杂化材料graphene/C<Sub>3</Sub>N<Sub>4</Sub>，它是由氧化石墨烯和纳米光催化剂g‑C<Sub>3</Sub>N<Sub>4</Sub>按照质量比为0.1...
- 白小娟孙长坡罗晓宏伍松陵王峻柴成梁
- 文献传递
- 一种工业化去除小麦籽粒中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的方法
- 本发明公开了一种工业化去除小麦籽粒中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的方法。该方法以被脱氧雪腐镰刀菌烯醇污染的小麦籽粒为原料，通过加工制成面粉，然后采用面糊法生产淀粉和谷朊粉，即得到脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量在1000ug/kg以下的淀粉...
- 伍松陵孙长坡任保中吴子丹常晓娇沈晗
- 文献传递
