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南文龙: 作品数：102 被引量：289H指数：9; 供职机构：中国动物卫生与流行病学中心更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技支撑计划江苏省博士后科研资助计划项目更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生生物学哲学宗教更多>>

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布鲁氏菌荧光微球免疫层析试纸条的研制: 2024年; 本研究以量子点荧光微球为标记物,制备免疫层析试纸条,用于快速检测牛血清布鲁氏菌抗体。采用布鲁氏菌脂多糖(LPS)和兔抗重组链球菌蛋白G多克隆抗体分别作为检测线和质控线喷涂硝酸纤维素膜,以荧光微球标记的重组链球菌蛋白G喷涂玻璃纤维素膜作为量子点结合垫,经组装、切割制备免疫层析试纸条。使用布鲁氏菌病阳性血清国家标准品测定所建立方法的灵敏度和稳定性,使用牛鼻气管炎阳性血清等常见牛病血清及牛布鲁氏菌病阴性血清国家标准品评价该方法的特异性;使用建立的方法与间接ELISA(iELISA)同步检测100份临床血清样品,比较两者的符合率。结果显示:量子点荧光微球免疫层析试纸条的最低检出限为0.3 IU/mL,常温保存18个月其检测灵敏度不变;与牛鼻气管炎、牛流行性腹泻、牛结节性皮肤病等临床疫病的血清抗体无交叉反应;与iELISA方法的阳性符合率为94.2%,阴性符合率为100%,总符合率为97.0%。结果表明,本研究建立的布鲁氏菌荧光微球免疫层析试纸条敏感、特异、稳定,操作时不需要借助仪器,适用于临床快速检测和初筛,可为我国布鲁氏菌病防控提供技术支持。; 杨若松马增彬龚雅云蔡云虹南文龙李知新; 关键词：布鲁氏菌免疫层析技术脂多糖

基于不同抗原的犬布鲁氏菌病免疫层析胶体金抗体试纸条的制备和比较: 2024年; 为建立针对犬布鲁氏菌病的免疫层析胶体金快速检测方法,利用从犬种布鲁氏菌菌株提纯的膜蛋白和可溶性蛋白,原核表达纯化的外膜蛋白Omp31和BP26以及基于B细胞抗原肽的融合蛋白F14,分别制备了试纸条,然后采用犬布鲁氏菌病阳性和阴性血清,分别对上述试纸条进行敏感性和特异性比较。结果显示:Omp31抗原的敏感性最高,其次是F14和BP26,而全菌膜蛋白和全菌可溶性蛋白的敏感性较差;特异性上,使用由5种抗原制备的胶体金试纸条检测30份犬布鲁氏菌病阴性血清,结果均为阴性;5种试纸条与沙门氏菌、大肠杆菌(O157)、大肠杆菌(H7)、霍乱弧菌、副溶血弧菌、军团菌阳性血清均不发生交叉反应。另外,由F14和BP26制备的试纸条可识别羊布鲁氏菌病阳性血清,而由Omp31、全菌膜蛋白和全菌可溶性蛋白制备的试纸条均不能识别牛、羊布鲁氏菌病阳性血清。综上所述,Omp31、F14和BP26可作为制备犬布鲁氏菌病免疫层析胶体金检测卡的备选抗原。本研究为粗糙型布鲁氏菌引起的布鲁氏菌病的诊断提供了技术支撑。; 郭晓涵焉鑫邵卫星殷德辉闫昊南文龙樊晓旭孙世雄张培培孙翔翔刘蒙达张皓博孙淑芳孙明军; 关键词：犬种布鲁氏菌外膜蛋白

羊种布鲁氏菌Tat系统底物蛋白ErfK的抗原性和免疫原性研究: 2024年; 为分析羊种布鲁氏菌双精氨酸转运系统(twin-arginine translocation system,Tat system)毒力相关底物蛋白L,D-转肽酶ErfK诱导宿主产生的免疫应答情况,首先对布鲁氏菌M28毒株ErfK基因序列(WP_002963714.1)进行生物信息学分析,参考序列设计引物,构建表达载体pET-30a(+)-ErfK,经IPTG诱导表达、亲和层析和镍柱纯化获得目的蛋白;利用SDS-PAGE和Western blot对重组ErfK(rErfK)蛋白进行抗原性鉴定;将rErfK蛋白免疫小鼠,分别在免疫后15、30和45 d收集血清和脾脏,检测蛋白免疫后小鼠的细胞免疫应答和体液免疫应答情况。生物信息学预测结果显示,ErfK蛋白无跨膜结构,为亲水性蛋白,有多个T细胞和B细胞抗原表位;SDS-PAGE和Western blot均可获得25 kDa的蛋白条带,重组蛋白可与布鲁氏菌阳性血清发生反应,证明rErfK有良好的抗原性;小鼠免疫试验结果显示,rErfK组小鼠脾脏CD8^(+)T细胞含量相比PBS组显著上升(P<0.05),且脾脏Th1型细胞因子IL-2、TNF-α、IFN-γ和Th2型细胞因子IL-4转录水平均显著上升(P<0.05),此外,rErfK免疫也能极显著诱导小鼠血清中总IgG和特异性IgG的产生(P<0.01)。上述结果表明,经大肠杆菌表达的布鲁氏菌rErfK蛋白可诱导小鼠产生良好的体液免疫和细胞免疫应答。本研究为基于ErfK蛋白的布鲁氏菌病诊断试剂和亚单位疫苗研发提供了参考依据。; 吴瑶焉鑫孙明军屈海龙郭晓涵闫昊张培培孙世雄李嘉琪孙翔翔刘蒙达张皓博南文龙南文龙邵卫星王方昆樊晓旭; 关键词：布鲁氏菌抗原性免疫原性

中国山羊痘弱毒疫苗AV41株基因组分子标记的比较分析被引量：2: 2021年; 为鉴别我国山羊痘病毒(GTPV)弱毒疫苗AV41株与牛结节性皮肤病病毒(LSDV)野毒株,运用生物信息学方法将AV41株基因组全序列与GenBank中已发表的LSDV、GTPV和绵羊痘病毒(SPPV)基因组进行比较,筛选AV41株基因组分子标记。采用我国不同厂家来源的AV41株疫苗测序验证分子标记相关序列,并与我国LSDV野毒株相应位置序列比较。结果显示,通过基因组比较分析共筛选获得分子标记19个,经测序确认其中7个为AV41株基因组独特分子标记,包括DNA ligase基因2433A2434、Kelch-like protein基因1831A1832、GTPV_gp020基因G203A、GTPV_gp021基因C681T、DNA-binding viron core protein基因C47T、RNA polymerase subunit基因T64C和Myristylated protein基因C746A,而我国LSDV野毒株相应位置序列未见上述变化。本研究揭示了AV41株基因组独特分子标记分布情况,可用于我国牛结节性皮肤病疫情防控中与LSDV野毒株的分子鉴别。; 陆游南文龙巩明霞李林邹艳丽吴晓东彭大新陈义平; 关键词：分子标记

猪细小病毒病血清抗体VP2-ELISA检测方法的建立: 2016年; 利用纯化的猪细小病毒VP2蛋白为抗原,建立检测猪细小病毒血清抗体的间接VP2-ELISA。最佳反应条件为:抗原包被浓度300 ng/孔,4℃过夜,待检测血清1:50稀释。与猪细小病毒病阳性血清呈阳性反应,与猪瘟、猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征、猪日本脑炎和猪圆环病毒病等5种疾病的阳性血清均无交叉反应。批间、批内试验变异系数均小于10%。用该方法与Ceditest PPV猪细小病毒抗体检测试剂盒对102份血清进行平行检测和比较,间接VP2-ELISA的敏感性为93.8%,特异性为81.1%,符合率为89.2%。结果表明,猪细小病毒血清抗体间接VP2-ELISA检测方法具有较高的敏感性和特异性,且重复性好,可用于猪细小病毒感染的血清抗体检测。; 周洁周洁南文龙何远清殷黎静任倩陈义平; 关键词：猪细小病毒抗体

七类消毒剂对非洲猪瘟病毒荧光定量PCR检测结果的影响被引量：8: 2021年; 为评价戊二醛、酚、含碘类等常用消毒剂消毒后对非洲猪瘟病毒荧光定量PCR检测结果的影响,基于畜禽栏舍、运载工具、器具消毒及皮肤黏膜消毒目的,按消毒剂说明书推荐选择不同工作浓度,分别与不同滴度的非洲猪瘟病毒培养物于20℃条件下作用30 min后,采用荧光定量PCR方法检测作用后产物。结果显示,与对应的阳性对照组相比,含氯类(二氯异氰尿酸钠)、过硫酸氢钾类、二氧化氯类消毒剂,消毒后对荧光定量PCR检测结果影响最显著,检测Ct值显著上升或检测不到;戊二醛类、含碘类(主要成分聚维酮碘)消毒剂,核酸降解能力相对较弱,检测Ct值稍有上升;酚类、季铵盐类、含碘类(主要成分碘、磷酸、硫酸)类消毒剂,检测Ct值基本无变化。本研究评价了7类常用消毒剂消毒对非洲猪瘟病毒荧光定量PCR检测结果的影响,可为防控实践中科学、客观评价分析消毒效果提供技术参考。; 南文龙巩明霞陆游李林王清华吴晓东陈义平; 关键词：非洲猪瘟消毒剂荧光定量PCR 消毒效果

鹌鹑禽流感免疫防制程序的研究被引量：1: 2010年; 禽流感是由A型流感病毒引起的、主要流行于禽类的一种传染快、死亡率高的疾病，广泛发生于世界各地，严重地威胁着养禽业发展。在1997年香港禽流感事件中，H5N1 AIV首次突破种间障碍直接感染人并引起人死亡，引起了全世界的关注。近年来，世界许多国家和地区暴发猪流感疫情，严重地威胁着畜牧业大发展。据WHO公布，截止到2009年，世界各地暴发了虎、鸭、猫、鹌鹑、; 金明兰侯继波南文龙鲁会军金宁一; 关键词：禽流感免疫防制鹌鹑 A型流感病毒 H5N1

一种牛种布氏菌快速检测方法: 本发明提供一种牛种布氏菌的RPA快速鉴别检测方法，其中所使用的引物组的序列为SEQ ID NO:1‑4。本发明引物组及方法的优点如下：1)高效灵敏：30min即可完成扩增，扩增模板的最低检出限为1.0×10<Sup>‑2...; 陈义平秦立得南文龙谭鹏飞巩明霞张凤霞; 文献传递

Asia 1 FMDV重组鸡痘病毒在豚鼠体内免疫原性和体内分布被引量：1: 2018年; 为检测Asia1口蹄疫（Foot and mouth disease，FMD）重组病毒免疫原性和安全性，将构建表达Asia1型口蹄疫病毒（Foot and mouth disease virus，FMDV）3C基因、P1—2A基因和猪白细胞介素18（Interleukin 18，IL-18）基因的重组鸡痘病毒rFPV-P1—2A-3C和rFPV-3C—P1—2A-IL-18间隔2周免疫豚鼠3次，进行特异性抗体、中和抗体、淋巴细胞增殖、淋巴细胞亚类数量、IFN—γ、攻毒保护以及体内分布研究。重组鸡痘病毒可有效刺激豚鼠产生特异性抗体、中和抗体、T淋巴细胞亚类数量、IFN-γ分泌均显著高于对照组；重组鸡疽病毒rFPV-3C-P1—2A—IL-18的T淋巴细胞亚类数量、T淋巴细胞转化和IFN-γ分泌高于重组病毒rFPV-P1—2A-3C免疫组；2个重组病毒的攻毒保护率分别为4／5、3／5。2个重组病毒在接种最早12h可检测到重组病毒的基因，最晚7d可检测到重组病毒的基因。结果表明重组鸡痘病毒rFPV—P1—2A-3C和rFPV-3C-P1—2A—IL-18具有良好的免疫原性，可以有效抵御病毒的攻击，体内残留时间短，对免疫动物安全，为开发、应用新型FMDV疫苗奠定了基础。; 金明兰霍晓伟鲁会军朱战波刘存霞南文龙马鸣潇金宁一; 关键词：免疫原性攻毒保护

人用布氏菌弱毒疫苗株104M的快速检测方法: 本发明的目的是提供一种人用布氏菌弱毒疫苗株104M的Taqman-MGB荧光定量PCR快速检测方法。本发明用于检测人用布氏菌弱毒疫苗株104M的引物组，其序列为SEQ ID NO：1-3。本发明引物组的高效灵敏：在1.5...; 陈义平南文龙王勇巩明霞张风霞张悦勇; 文献传递

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