刘飞
- 作品数：5 被引量：13H指数：2
- 供职机构：华东理工大学生物工程学院生物反应器工程国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学理学更多>>
- 雄激素可调节的肾脏近端肾小管上皮细胞靶向杂合启动子的优化被引量：1
- 2014年
- 为研究肾脏雄激素调节蛋白杂合启动子Kap147／HAGT-Kpn的细胞特异性，将HAGT-Kpn片段克隆到pGL3-Kap147载体质粒上，通过细胞转染和荧光素酶活性测定，证实Kap147／HAGT-Kpn杂合启动子只在肾小管上皮细胞来源的OK、LLC-MK2细胞中具有活性，经20nmol／LDHT处理后其活性增加了7～8倍。依据雄激素应答原件的保守性，将不同长度的HAGT-Kpn亚片段克隆到pGL3-Kap147载体质粒上，经20nmol／LDHT处理后，KpnI-StuI和MscI-KpnI两个片段能够使Kap147活性增强1～2倍，由此表明Kap147／HAGT-Kpn杂合启动子依然具有组织细胞特异性且受雄激素调控，KpnI-StuI和MscI-KpnI两个片段承担了雄激素的调控作用。
- 孟军刘飞范立强朱庆庆吴宝杰左丽君
- 关键词：肾脏
- Kap147/Kpn杂合启动子引导Cre重组酶在转基因小鼠睾丸组织中特异性表达
- 2019年
- 为了验证杂合启动子Kap147/Kpn的体内、外功能,构建了Kap147/Kpn引导的Cre重组酶转基因鼠。体外细胞转染和激素诱导证实Kap147/Kpn启动子具有细胞特异性,且受雄激素诱导。通过RT-PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)和荧光定量PCR(Polymerase Chain Reaction)证实Kap147/Kpn启动子引导Cre重组酶在转基因鼠(Cre-F0-2)睾丸组织中特异表达。荧光定量PCR检测发现,Cre mRNA在转基因鼠睾丸中的表达量与小鼠年龄相关,经15 mg/(kg·d)二氢睾酮(DHT)处理后睾丸中Cre mRNA表达量增加1.7倍,经100 mg/(kg·d)醋酸环丙孕酮(CAP)处理后Cre mRNA表达量降低约50%,证实Kap147/Kpn启动子在转基因鼠体内受雄激素调控。荧光组化显示,转基因鼠Cre-F0-2与双荧光Cre重组酶报告鼠杂交后,能成功介导子代鼠睾丸组织特异性的基因敲除。杂合启动子Kap147/Kpn引导的Cre重组酶转基因鼠(Cre-F0-2)具有雄激素调节性和睾丸靶向性,是一个潜在的研究睾丸基因功能的有力工具。
- 刘飞孟军范立强
- 关键词：基因打靶睾丸
- 疏水性胍类离子液体萃取水溶液中的重金属离子被引量：4
- 2016年
- 合成了疏水性胍类离子液体,考察室温下离子液体对水溶液中金属离子(Fe^(3+)、Cu^(2+)、Co^(2+)、Ni^(2+)、Zn^(2+))的萃取能力。实验结果表明该离子液体对Fe^(3+)萃取具有高选择性,萃取率为90%;对其他金属离子萃取率仅为40%左右。为了进一步研究离子液体对Fe3+的萃取性能,分别从两相体积比、萃取时间、金属离子起始浓度及溶液pH等因素研究了其对Fe^(3+)的捕集效果。结果表明:室温下,0.2mL离子液体与5mL的FeCl_3溶液超声混合5min后,溶液中Fe^(3+)萃取率为90%;且溶液中金属离子的起始浓度对萃取效果影响较小,但溶液pH对其影响较大。通过实验与理论计算发现,离子液体对Fe^(3+)的萃取过程存在阳离子交换与离子对的共同作用机制,但离子对作用占主导地位。
- 车佳宁刘飞彭昌军刘洪来杨强汪华林
- 关键词：疏水性萃取金属离子
- 人乳头瘤病毒18型E6的点突变体对宫颈癌Hela细胞生长和凋亡的影响被引量：2
- 2014年
- 目的构建并鉴定pcDNA 3.1(+)/HPV 18 E6及其突变体pcDNA 3.1(+)/E6 F49R、pcDNA 3.1(+)/E6 F1 27R真核重组表达质粒,并在转染Hela细胞后,检测其对宫颈癌Hela细胞生长增殖的影响。方法用RT-PCR法从HeLa细胞中扩增HPV 18 E6基因及其突变体HPV 18 E6 F49R、HPV 18 E6 F1 27R、HPV 1 8 E6 F49R-F127R基因片段,构建重组表达载体pcDNA 3.1(+)/HPV 1 8 E 6、pcDNA 3.1(+)/E6 F49R、pcDNA 3.1(+)/E6 F1 27R,在HeLa细胞中进行转染,48 h后进行MTT试验,利用吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)双染法在荧光显微镜下进行细胞形态学的观察。结果成功构建了3种重组表达载体;重组质粒成功转染到Hela细胞中,pcDNA 3.1(+)/HPV 18 E6能促进细胞增殖;pcDNA 3.1(+)/E6 F 49 R和pcDNA 3.1(+)/E6 F127R在一定程度上可抑制表达有E6全长的HPV阳性细胞系Hela的增殖;荧光显微镜下观察到转染了突变体重组质粒的细胞均呈现细胞核皱缩,表现为早起凋亡现象。结论HPV 18 E6及其突变体的真核表达为研究其表达作用机制及为研究预防和治疗子宫癌奠定基础。
- 左丽君吴宝杰刘飞吴燕雯范立强
- 关键词：真核表达HELA细胞
- 氨基酸离子液体的理论研究：结构、分子间相互作用及碱性被引量：6
- 2016年
- 利用密度泛函理论,对6种氨基酸阴离子和不同链长咪唑阳离子形成的离子液体的结构、阴阳离子间相互作用以及碱性进行理论研究。优化得到5种稳定构型,并且阴阳离子间存在2种氢键。利用分子中的原子理论(AIM)、非共价键相互作用理论(NCI)及自然键轨道理论(NBO)进行分析,结果显示阴离子羰基中的O与H(C2)能形成更强的氢键且具有一定的共价性质。利用最负表面静电势(V_(s.ming))和平均局部离域化能(I_(s.ming)),在微观水平上对氨基酸离子液体的碱性进行分析,发现当引入氨基或羟基到阴离子中时,离子液体的碱性变强。
- 刘飞吴蔚闳卢运祥彭昌军刘洪来
- 关键词：氢键碱性静电
