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刘春蓉: 作品数：50 被引量：214H指数：7; 供职机构：武警医学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金天津市自然科学基金天津市科技发展战略研究计划项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>

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含双顺反子绿色荧光蛋白人骨形态发生蛋白2表达载体的构建: 2008年; 目的:骨形态发生蛋白2是目前研究最为广泛、诱导成骨活性最强的骨形态发生蛋白之一。实验拟构建绿色荧光蛋白标记的人骨形态发生蛋白2(human Bone Morphogenetic Protein-2,hBMP2)真核表达载体,为在真核细胞的高效表达和基因治疗打下基础。方法:实验于2006-03/2007-03在天津医科大学卫生部激素与发育重点实验室完成。①实验材料:含完整人骨形态发生蛋白2基因片段的pcDNA3.1/CT-hBMP2质粒由李曦铭博士惠赠;双顺反子真核表达载体pSELECT-GFPzeo-MCS(Invivogen公司),Zeo(Invivogen公司);pTA2?-T Easy(鼎国生物技术有限公司)。②实验过程及评估:以重组质粒pcDNA3.1/CT-hBMP2为模板,结合已设计好的特异性引物,采用聚合酶链反应方法亚克隆出人骨形态发生蛋白2目的片段,将该片段分别与克隆载体pTA2-T-easy和双顺反子真核表达载体pSELECT-GFPzeo-MCS连接,转化入感受态DH5α细胞中,通过筛选得到含有绿色荧光蛋白的重组表达载体pSELECT-GFPzeo-hBMP2,并进行测序鉴定。结果:①聚合酶链反应获得长度约1216bp的目的片段,与预期片段相符。②经与克隆载体pTA2-T-easy和真核表达载体pSELECT-GFPzeo-MCS连接,筛选及序列分析后,证实所插入目的片段与GenBank检索的骨形态发生蛋白2cDNA序列(NM-001200)100%匹配。结论:成功构建含双顺反子绿色荧光蛋白人骨形态发生蛋白2真核表达载体。; 苗军刘春蓉黄鸿超夏群石可松; 关键词：骨形态发生蛋白质类基因表达绿色荧光蛋白质类

先天性甲状腺功能减退症大脑蛋白质双向电泳分析: 2010年; 目的:比较新生正常大鼠和先天性甲状腺功能减退症(CH)大鼠大脑蛋白质表达的差异,为探讨CH致脑发育障碍发病机制提供线索。方法:制作CH仔鼠动物模型,于出生时称体质量后处死仔鼠,取大脑皮质,应用双向电泳(2-DE)技术分析正常仔鼠与CH仔鼠大脑蛋白质表达的差异情况。放射免疫分析法检测2组大鼠血清游离三碘甲腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)水平。结果:CH组仔鼠体质量、FT3、FT4水平均低于正常组仔鼠。建立了稳定的正常仔鼠与CH仔鼠大脑皮质2-DE图谱,发现2组共有8个蛋白质点存在差异。与正常仔鼠相比,CH仔鼠大脑有3个蛋白质点量上调,2个蛋白质点量下调,有3个蛋白质点仅出现于CH仔鼠组。结论:CH仔鼠大脑差异蛋白表达可能与CH致脑发育障碍的发生、发展密切相关。; 刘春蓉于保国杨术旺刘燕青刘亚敏张永亮; 关键词：先天性甲状腺功能减退症甲状腺素大脑皮质蛋白质组学

低压低氧环境对大鼠心肌肌球蛋白重链表达的影响被引量：2: 2009年; 【目的】研究模拟高原低压低氧环境对小鼠心肌肌球蛋白重链α、β亚型表达的影响。【方法】取清洁级SD大鼠20只,随机分成2组:常氧组和模拟高原6000m低压低氧组。记录各组大鼠心脏指数。制作各组心肌组织切片,常规HE染色观察心肌细胞形态改变。免疫荧光法检测各组心肌肌球蛋白重链α-MHC和β-MHC两种亚型蛋白的表达变化。【结果】常氧组和低压低氧组大鼠心脏指数差异不具有统计学意义(P>0.05)。HE染色可见低压低氧组大鼠心肌细胞水肿,心肌间质内小血管及毛细血管明显扩张充血。低压低氧组大鼠心肌中MHC蛋白质表达水平异常改变,即α-MHC蛋白表达量增高而α-MHC蛋白表达量下降。【结论】模拟高原6000m高原低压低氧可致大鼠心肌细胞形态异常改变同时可刺激心肌MHC亚型表达出现"由快到慢"的趋势,提示MHC表达异常参与了心脏重塑,可能是高原低压低氧致心力衰竭发生、发展的基础。; 刘亚敏刘燕青刘春蓉王正晖杨术旺刘静; 关键词：低压低氧心脏肌球蛋白重链

促甲状腺激素β基因剪接变体在BALB C小鼠不同组织中的表达被引量：3: 2011年; 目的：研究促甲状腺激素（TSH）β基因剪接变体在BALBC小鼠垂体、甲状腺、骨髓、脾、外周血和淋巴结中的表达情况。方法：选取雄性6~8周龄BALBC小鼠6只,提取小鼠垂体、甲状腺、骨髓、脾、外周血和淋巴结的总RNA,用DNA酶处理后,应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测TSHβ剪接变体的表达情况。结果：垂体、甲状腺、骨髓、脾、外周血和淋巴结中均可见TSHβ剪接变体的特异性表达,且在垂体和外周血中的表达量较高。测序证实该剪接体含有部分第4内含子和整个第5外显子的编码区,没有第4外显子。结论：TSHβ剪接变体在BALBC鼠的垂体、甲状腺、骨髓、脾、外周血和淋巴结中均有表达。; 刘浩臧晓怡刘春蓉孙云李兰英; 关键词：剪接体

可注射性磷酸钙骨水泥生物相容性评价被引量：9: 2007年; 目的:磷酸钙骨水泥是一种新型骨移植替代材料,对它的改性研究是近年来的研究热点之一,通过改变磷酸钙骨水泥的流变学,制备可注射性磷酸钙骨水泥更适于微创应用,但应用于临床要对其生物相容性进行评价。方法:实验于2006-10/2007-01在天津医院骨科研究所完成。①实验材料:可注射性磷酸钙骨水泥(由固相与液相两部分组成,固相为碳酸钙、磷酸氢钙等,液相为磷酸钠盐溶液)。②实验动物:新西兰兔14只,体质量2.0～3.5kg,雌雄各半。实验过程中对动物处置符合动物伦理学要求。③实验方法和评估:通过采用可注射性磷酸钙骨水泥浸提液和试件与骨髓基质细胞分别共培养,MTT法测定细胞相对增殖率,进行细胞毒性反应分级,光镜和扫描电镜观察细胞生长形态和生长活性。可注射性磷酸钙骨水泥浸提液进行溶血和热原试验观察。将可注射性磷酸钙骨水泥试件植入兔肌肉内,观察炎症反应和纤维包膜形成情况。结果:14只新西兰兔均进入结果分析。可注射性磷酸钙骨水泥浸提液和试件与骨髓基质细胞共培养,细胞生长形态良好,数量逐渐增加,细胞毒性反应为0～Ⅰ级,基本无毒性。浸提液的溶血率<0.05%,注入兔耳缘静脉后未引起发热反应。可注射性磷酸钙骨水泥试件植入兔肌肉中观察24周,早期有淋巴细胞浸润,包膜形成,晚期淋巴减少或消失,包膜稳定,无增厚趋势,未见有白细胞浸润。结论:可注射性磷酸钙骨水泥具有良好的生物相容性,符合植入人体生物材料的细胞毒性要求,对机体不会造成不良影响,因而临床可以安全使用。; 苗军刘春蓉夏群; 关键词：生物相容性生物材料

炎症反应与人外周血白细胞中TSHβ剪接变体表达相关性研究: 目的:促甲状腺激素(thyroid-stimulating hormone,TSH)是调控甲状腺功能的关键蛋白,TSH由a亚基和b亚基通过非共价键连接组成,b亚基具有激素特异性。2009年Vincent等报道了第一个功能...; 刘春蓉李兰英应凡臧晓怡; 文献传递

PDGF对人神经干细胞分化和甲状腺激素受体表达的影响(英文): 2006年; [目的]探讨血小板衍生生长因子(Platelet-derived Growth Factor,PDGF)在人神经干细胞(Human Neural Stem Cells,hNSCs)定向分化中的作用,以及在hNSCs分化过程中PDGF对甲状腺激素受体(Thyroid Hormonereceptors,TRs)的表达调控。[方法]用免疫细胞化学方法鉴定分化后的细胞类型,分别用半定量RTPCR法、 ELISA法检测不同诱导条件下hNSCs分化前后TRα1、TRα2、TRβ1在转录与翻译水平上的表达变化。 [结果]PDGF诱导hNSCs分化后NF阳性细胞约占80％;TRα1、α2、β1mRNA表达水平分别比10％胎牛血清诱导分化组上调约40％、30％、10％(P<0．05)。TRα、β蛋白质表达趋势为hNSCs>PDGF诱导分化组>血清诱导分化组(P<0．05)。[结论]PDGF能引发hNSCs向神经元分化,同时在转录与翻译水平上调hNSCs分化后TR各亚型的表达,增强甲状腺激素对中枢神经系统发育的重要调控作用。; 刘春蓉李兰英刘奔臧晓怡陈祖培; 关键词：血小板衍生生长因子神经干细胞甲状腺激素受体

三碘甲状腺原氨酸对人神经干细胞分化过程中甲状腺激素受体表达的干预效应(英文): 2007年; 背景:三碘甲状腺原氨酸是脑发育临界期的重要调控因素,在中枢神经系统发育过程中可能决定着神经干细胞的世系分化命运。目的:观察三碘甲状腺原氨酸诱导人神经干细胞分化情况以及分化过程中甲状腺激素受体mRNA的表达变化。设计:开放性实验。单位:天津市武警医学院病理教研室,天津医科大学内分泌研究所。材料:实验于2003-01/2005-03在天津医科大学完成。由天津医科大学总医院提供孕10～12周流产胎儿,产妇及家属均签署知情同意书,实验经医学伦理委员会批准。方法:①无菌条件下取人胚胎两侧大脑半球,剥除脑膜,剪碎脑组织,过滤制备细胞悬液。以20μg/L碱性成纤维细胞生长因子+30nmol/L三碘甲状腺原氨酸联合诱导神经干细胞增殖,按1×109L-1密度分别接种于涂有多聚左旋赖氨酸的24孔板和25mL培养瓶中常规培养,培养液为含N2添加剂的DMEM/F12无血清培养基。48h后半量换液,7d后撤除碱性成纤维细胞生长因子,单独用三碘甲状腺原氨酸诱导分化。②培养1,2,3周时取细胞,RT-PCR半定量检测神经干细胞诱导分化不同阶段甲状腺激素受体mRNA表达的变化,免疫细胞化学鉴定分化后的细胞类型。主要观察指标:①三碘甲状腺原氨酸诱导神经干细胞分化前后细胞形态观察及类型鉴定。②神经干细胞分化过程中甲状腺激素受体mRNA表达的变化。结果:①诱导前细胞呈圆形,表面光滑,并逐渐聚集成神经细胞球,Nestin单染及Nestin+BrdU双染均呈免疫细胞化学反应阳性。三碘甲状腺原氨酸诱导分化1周时,细胞大多呈单极或双极,有细长突起,神经丝蛋白、胶质纤维酸蛋白、半乳糖脑苷免疫细胞化学染色呈阳性;诱导3周后可见细胞核呈圆形,突起多且粗,细胞整体呈蜘蛛状,髓鞘碱性蛋白阳性率达80%。②甲状腺激素受体α1mRNA在诱导前神经干细胞状态时表达量最高,三碘甲状腺原氨酸诱导后; 刘春蓉李兰英刘奔臧晓怡陈祖培; 关键词：三碘甲状腺原氨酸甲状腺激素受体神经干细胞

血小板活化因子及相关因子在机械性颅脑损伤中的表达和意义被引量：6: 2008年; 【目的】研究机械性颅脑损伤后PAFR、COX-2和GluR2之间的相互关系以及与脑损伤时序性变化的相关性。【方法】采用SD大鼠复制Marmarou’s闭合性颅脑损伤模型,于损伤后4、8、12、24和48 h用RT-PCR检测大鼠大脑海马中PAFR、COX-2和GluR2的基因表达情况。【结果】脑损伤后,PAFR和GluR2表达减弱,12 h达最低,损伤后各组与对照组相比差别均有显著性(P<0.01);COX-2表达增强,8 h达最高值,损伤后4、8、12和24 h组与对照组相比差别有显著性(P<0.01)。【结论】PAFR、COX-2和GluR2三者在闭合性颅脑损伤中表达的时序性变化特点基本一致,关系密切,共同参与脑损伤病理生理过程。; 于媛媛杨术旺白皛刘春蓉张永亮; 关键词：脑损伤 COX-2 GLUR2

甲状腺机能减退对仔鼠中枢神经系统Ⅱ型脱碘酶mRNA表达的影响: 2008年; 目的观察甲状腺激素机能减退(甲减)时仔鼠中枢神经系统Ⅱ型脱碘酶mRNA(D2-mRNA)的表达,研究甲状腺激素对脑发育调控的机制。方法怀孕Wistar雌鼠随机分为甲减组和对照组,从怀孕15d开始甲减组每日经胃灌注1%丙基硫氧嘧啶2.5ml,所生鼠即为甲减仔鼠。对照组每日经胃灌注生理盐水2.5ml。分别于出生时、出生后14、21和45d处死仔鼠,利用荧光定量PCR的方法,分析各组动物大脑皮质、小脑、脑干、海马及脊髓中D2的表达。结果甲减仔鼠大脑、脑干及脊髓中D2mRNA在出生时及出生后14d时表达量高于对照组,在21d和45d时与对照组无显著性差异;在小脑和海马中D2mRNA的表达量在出生时及出生后14、21d时都高于对照组,只有在45d时与对照组接近。结论甲减时仔鼠中枢神经系统D2表达增加,通过调节甲状腺激素水平对其生长发育起着重要作用。; 石峰李兰英刘春蓉臧晓怡孙云陈祖培; 关键词：脱碘酶中枢神经系统甲状腺功能减退

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