何方
- 作品数：7 被引量：8H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学检验医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金重庆市教育委员会科学技术研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 趋化因子受体CX3CR1对肝癌细胞的作用及机制
- 目的: 本文探讨趋化因子CX3C受体1（chemokine CX3C receptor1,CX3CR1），对肝癌细胞的作用及其机制研究，为临床肝癌的治疗奠定理论基础。 方法: 体外，将靶向沉默CX3CR1表达的重组...
- 何方
- 关键词：肝癌重组腺病毒HUH7细胞HEPG2细胞
- 骨髓基质细胞介导的微环境对人肝癌细胞株SMMC-7721的作用以及机制研究
- 2013年
- 目的:探讨肿瘤微环境中人骨髓基质细胞HS-5对人肝癌细胞SMMC-7721的作用及机制。方法:采用HS-5细胞条件培养基(HS-5 cell-conditioned medium,HS-5-CM)处理肝癌细胞SMMC-7721,分别通过MTT、划痕和Transwell实验分析对SMMC-7721细胞增殖、迁移和侵袭的影响;采用Transwell小室间接共培养SMMC-7721细胞与HS-5细胞,应用实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)、ELISA或Western blotting分别测定SMMC-7721细胞中趋化因子CCL5及其受体CCR5的mRNA和蛋白表达;此外加入PI3K抑制剂LY294002后,通过Western blotting检测SMMC-7721细胞中PI3K-Akt通路的相关蛋白Akt及其磷酸化水平的变化,以及qRT-PCR和ELISA检测SMMC-7721细胞中CCL5的变化。结果:HS-5-CM可以促进SMMC-7721细胞增殖、迁移和侵袭;间接共培养后,SMMC-7721细胞中CCL5及CCR5 mRNA和蛋白表达均有增高;PI3K抑制剂LY294002可有效抑制共培养后SMMC-7721细胞中PI3K-Akt通路的激活,并减少其CCL5的分泌。结论:HS-5细胞可以促进SMMC-7721细胞的增殖、迁移和侵袭能力;与HS-5细胞间接共培养,激活了肝癌细胞SMMC-7721的PI3K-Akt通路,从而增加SMMC-7721细胞的CCL5分泌。
- 白慧丽李宝林何方张汝益严树涓刘晨杨丹丹施琼
- 关键词：骨髓基质细胞SMMC-7721细胞微环境
- miR-30a抑制BMP9诱导间充质干细胞C3H10T1/2的成骨分化被引量：2
- 2013年
- 目的:确认miR-30a在BMP9诱导间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化中的作用。方法:首先用Ad-BMP9处理间充质干细胞C3H10T1/2,通过碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒检测早期成骨指标ALP、Western blot和PCR检测晚期成骨指标OPN,茜素红S染色检测钙盐沉积了解BMP9对C3H10T1/2细胞的成骨分化作用,同时用Real-time PCR检测miR-30a在该成骨分化中的变化。然后用BMP9条件培养基分别作用Ad-mmu-miR-30a和Ad-RFP预处理10h的C3H10T1/2细胞,检测早期成骨指标ALP、晚期成骨指标钙盐沉积和骨钙素OPN的表达。最后探讨miR-30a在BMP9诱导C3H10T1/2细胞成骨分化中的可能作用机制。结果:Ad-BMP9处理C3H10T1/2细胞5d,7d后,ALP的活性的表达增高;第9d后,OPN的表达增加;第14d后,钙盐的沉积明显增多。而miR-30a过表达后,抑制了这一现象。同时发现过表达miR-30a后,Runx2蛋白水平较对照组下降而mRNA水平基本没有变化。结论:miR-30a可以抑制BMP9诱导C3H10T1/2细胞的成骨分化,其作用机理可能和Runx2相关。
- 李宝林白慧丽张汝益严树涓何方杨丹丹刘晨施琼
- 关键词：成骨分化
- miR-30a抑制人骨肉瘤细胞143B的迁移、侵袭和活力被引量：2
- 2015年
- 目的探讨miR-30a对人骨肉瘤细胞143B侵袭、迁移和细胞活力的影响。方法过表达或抑制miR-30a分别处理人骨肉瘤细胞143B。划痕实验观察细胞划痕愈合能力;Transwell实验检测143B细胞迁移和侵袭能力;MTT实验检测细胞活力;定量PCR实验确认过表达miR-30a腺病毒有效性并且检测RUNX2 mRNA表达;Western blot检测细胞中RUNX2总蛋白表达。结果过表达miR-30a抑制了骨肉瘤细胞143B迁移和侵袭(P<0.05),在72 h时,miR-30a明显抑制细胞活力(P<0.01);抑制miR-30a的内源性表达后,143B细胞的迁移和侵袭能力增加(P<0.05),细胞活力也表现出上升水平(P<0.01);同时过表达miR-30a可以抑制RUNX2的蛋白表达,抑制内源性miR-30a后RUNX2蛋白水平表达增加(P<0.05)。荧光素酶活性检测,miR-30a可以靶向于RUNX2(P<0.01)。结论 miR-30a抑制骨肉瘤细胞143B的迁移、侵袭和活力,其作用可以能是通过抑制RUNX2的表达来实现。
- 张汝益何方王静邓芳李琪英施琼
- 关键词：人骨肉瘤细胞RUNX2
- 腺病毒介导的BMP9过表达抑制人骨肉瘤细胞系143B的增殖与迁移被引量：1
- 2013年
- 目的探讨骨形态发生蛋白9(BMP9)过表达对人骨肉瘤细胞系143B的生物学行为的影响。方法用RT-PCR和Western blot检测骨肉瘤细胞系中BMP9的内源性表达,用表达BMP9的腺病毒重组体(adBMP9)感染内源性表达BMP9相对较低的骨肉瘤细胞系,Transwell法检测细胞侵袭,划痕愈合实验检测细胞迁移,MTT法和结晶紫染色法检测细胞的增殖,Hoechst 33258染色法检测凋亡,平板集落形成实验检测集落形成能力。结果 adBMP9可以明显减弱骨肉瘤细胞系143B的增殖、迁移、侵袭及集落形成能力(P<0.05),并促进细胞凋亡。结论 adBMP9能抑制人骨肉瘤细胞系143B的增殖和迁移,促进细胞凋亡。
- 杨丹丹刘晨白慧丽李宝林何方张汝益施琼
- 关键词：骨肉瘤生物学效应
- SDF-1/CXCR4在BMP9介导C2C12细胞成骨分化过程中的作用研究被引量：2
- 2013年
- 为了观察SDF-1/CXCR4信号轴在BMP9促C2C12细胞成骨分化过程中的作用,通过重组腺病毒过表达BMP9,检测对C2C12细胞中SDF-1及受体CXCR4 mRNA和蛋白表达水平的影响;同时利用重组腺病毒或中和抗体干扰SDF-1/CXCR4,与BMP9先后作用于C2C12细胞,通过定量测定碱性磷酸酶(ALP)、染色测定ALP表达、免疫细胞化学测定骨钙蛋白(OCN)表达、茜素红S染色测定钙盐沉积、Real-time PCR检测成骨相关转录因子Runx2和Osx的表达、Western blot检测成骨分化信号通路MAPK和Smad的变化。结果显示,BMP9能明显抑制C2C12细胞中SDF-1、CXCR4的表达(P<0.01),且具有剂量和时间依赖性;预先干扰SDF-1/CXCR4能明显影响由BMP9介导的早、中期成骨标志物ALP、OCN及早期转录因子Runx2、Osx的表达(P<0.01)和MAPK、Smad信号通路相关蛋白的变化(P<0.05);外源性SDF-1并不能影响晚期成骨标志物钙盐沉积。提示SDF-1/CXCR4信号轴在由BMP9介导的C2C12细胞成骨分化早、中期过程中发挥重要作用。
- 刘晨杨丹丹白慧丽李宝林何方张汝益严树涓施琼
- 关键词：CXCR4成骨分化C2C12细胞
- 趋化因子受体CX3CR1表达沉默对人肝细胞癌Huh7细胞的作用及机制研究被引量：1
- 2015年
- 目的:探讨趋化因子CX3C受体1(chemokine CX3C receptor 1,CX3CR1)对人肝细胞癌Huh7细胞的作用及其机制。方法:将靶向沉默CX3CR1表达的重组腺病毒Ad-si CX3CR1感染至人肝细胞癌Huh7细胞,然后应用RT-PCR和蛋白质印迹法检测Huh7细胞中CX3CR1的表达水平,采用MTT、FCM、划痕愈合实验和Transwell小室法分别分析CX3CR1表达沉默对Huh7细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响,再通过蛋白质印迹法检测磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)-Akt信号通路相关蛋白Akt及其磷酸化水平的变化。同时,用不同浓度的PI3K抑制剂LY294002作用感染了Ad-si CX3CR1的Huh7细胞后,分别采用蛋白质印迹法和Transwell侵袭实验检测LY294002对CX3CR1介导的Akt表达和细胞侵袭能力的影响。结果:感染Ad-si CX3CR1后,肝细胞癌Huh7细胞中CX3CR1表达被明显抑制(P<0.001),细胞的增殖、迁移和侵袭能力均明显增强(均P<0.001),凋亡能力则明显降低(P<0.01)。沉默CX3CR1表达后,Huh7细胞中Akt的磷酸化水平升高(P<0.001),且PI3K抑制剂LY294002能有效逆转CX3CR1介导的Akt磷酸化和细胞侵袭(均P<0.001)。结论:沉默趋化因子受体CX3CR1表达可以促进人肝细胞癌Huh7细胞的增殖、迁移和侵袭,并抑制细胞凋亡,其机制可能与活化PI3K-Akt信号通路有关。
- 何方张汝益王静邓芳范梦恬李亚郭杨柳施琼
- 关键词：基因沉默细胞增殖
