严飞
- 作品数：7 被引量：18H指数：3
- 供职机构：四川大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小鼠凋亡相关新基因PNAS-4真核表达载体的构建、表达及体外抗肿瘤作用被引量：3
- 2007年
- 目的:对小鼠凋亡相关新基因PNAS-4(mPNAS-4)进行克隆,构建其真核表达载体,并在小鼠Lewis肺癌细胞系LL2中转染表达;探讨mPNAS-4基因转染LL2细胞过表达所诱导的体外肿瘤细胞凋亡情况。方法:用RT-PCR从小鼠肝脏组织中克隆mPNAS-4编码区cDNA,构建重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-mPNAS-4;用脂质体将pcDNA3.1(+)-mPNAS-4转染小鼠Lewis肺癌LL2细胞;用RT-PCR检测转染细胞中mPNAS-4的过表达情况;通过MTT、流式细胞术(FCM)及DNALadder分别检测转染细胞的增殖与凋亡情况。结果:从小鼠肝脏组织中克隆到mPNAS-4全长cDNA并成功构建其真核表达载体pcDNA3.1(+)-mPNAS-4,转染小鼠Lewis肺癌LL2细胞可使其mRNA表达明显上调。mPNAS-4过表达能抑制LL2细胞增殖并诱导其凋亡。结论:mPNAS-4过表达对小鼠Lewis肺癌LL2细胞的生长有明显的抑制和诱导凋亡作用。
- 袁铸严飞赵新宇邓洪新李炯
- 关键词：基因转染真核表达凋亡
- 一种新的双元表达质粒pCMV-Myc-IRES-EGFP的构建及其表达被引量：10
- 2007年
- 为了研究基因的特征、理化特性及其功能机制,通常需要构建多个真核表达载体,涉及到多次的引物设计、酶切、连接和鉴定等繁琐的亚克隆过程。构建携带易于多种实验研究的多用或通用载体是基因工程载体的发展方向。为此,利用pIRES载体为骨架质粒,在A和B多克隆位点上分别插入c-Myc标签蛋白序列和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)序列,从而构建了一个包含c-Myc标签蛋白序列并携带有核糖体结合位点(IRES)介导的增强型绿色荧光蛋白的真核表达载体pCMV-Myc-IRES-EGFP。通过荧光检测和免疫印迹实验证实该载体能在哺乳细胞中表达。该载体可用于监测细胞的转染效率、分选稳定表达的阳性细胞群体、体外转录和翻译、检测或纯化目的蛋白以及捕获相关作用蛋白等多种实验研究,为基因功能研究提供了便利。
- 严飞赵新宇邓洪新魏于全
- 关键词：绿色荧光蛋白
- 应用蛋白质组学技术研究反义Cyclin B1的抗肿瘤作用机制被引量：3
- 2007年
- 背景与目的:先前研究发现采用反义技术下调cyclin B1基因表达水平,可产生抗肿瘤的作用,但其抗肿瘤机制有待进一步研究。本研究旨在利用比较蛋白质组学的方法来探讨反义cyclin B1抗肿瘤作用的分子机制。方法:首先用含有小鼠cyclin B1反义全长cDNA的重组质粒转染小鼠CT26结肠癌细胞,经双向凝胶电泳(2-DE)分离转染组和未转染组的总蛋白,再用PDQuest图像分析识别2-DE胶图像,然后对差异表达的蛋白质点进行基质辅助激光解吸电离飞行时间(MALDI-TOF-MS)质谱分析,再经Mascot软件搜索数据库鉴定这些差异蛋白。最后根据被鉴定肽段的可信度,从这些蛋白质中选出肽段可信度最高的2个,用Western blot对其丰度差异进行了验证。结果:初步鉴定出7个差异表达蛋白,其中Axin2、CCTθ、DR5和HPCM27蛋白质在实验组上调,RFP17、mKIAA1195及LOC77035蛋白在实验组下调,而可信度最高的Axin2和DR5的蛋白质表达丰度差异为Western blot所证实。结论:多种蛋白质在反义cyclin B1后表达有明显差异,这些差异蛋白质参与细胞的增殖、分化、迁移、凋亡及转录调控等多条信号通路,提示反义cyclin B1的抗肿瘤机制可能与上述蛋白质的作用有关。
- 杨涛张伶严飞仝爱平刘新宇刘涣义黄灿华
- 关键词：抑瘤机制双向电泳激光解吸电离飞行时间质谱
- hPNAS-4腺病毒载体的构建及其体外抗肿瘤作用
- 2009年
- 用RT-PCR从A293细胞中克隆hPNAS-4编码区cDNA,将其酶切后连接至pEN-TRll载体上,再通过同源重组作用将hPNAS-4基因片段重组至腺病毒骨架载体上,构建腺病毒重组质粒,最后经293细胞的包装扩增后得到携带hPNAS-4基因的重组腺病毒;将重组腺病毒体外感染人肺癌A549细胞;RT-PCR测得感染细胞中hPNAs-4表达明显上调,MTT测得细胞增殖受到明显抑制,流式细胞仪测得细胞凋亡率明显升高,琼脂糖凝胶电泳显示其基因组DNA有明显的梯状条带.以上结果表明hPNAS-4过表达对A549肿瘤细胞的生长有明显的抑制和诱导凋亡作用.
- 倪睿严飞袁铸李炯文艳君
- 关键词：基因治疗腺病毒肿瘤凋亡
- 新基因PCIA1真核表达载体的构建及HeLa细胞稳定转染株的建立与鉴定*被引量：1
- 2006年
- 目的构建人的新基因(PCIA1)的真核表达载体,并将其载体稳定转染到HeLa细胞株中。方法以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)总RNA为模板,通过RT-PCR扩增PCIA1基因编码区cDNA,并将扩增的cDNA片段插入pcDNA3.1(+)真核表达质粒,构建重组质粒pcDNA-PCIA1,重组子经酶切分析及测序鉴定后,用脂质体转染技术将该表达载体导入到HeLa细胞中,经G418筛选并建立稳定的转染细胞株,用RT-PCR和Westernblot检测PCIA1基因在HeLa细胞中的表达。结果经RT-PCR及Westernblot检测,证实真核表达重组质粒pcDNA-PCIA1构建成功,PCIA1基因已经稳定转染到了HeLa细胞中并表达PCIA1蛋白。结论成功建立了人新基因PCIA1的稳定转染细胞株,为进一步研究PCIA1的功能奠定了基础。
- 王瑞邓洪新王国庆严飞彭枫
- 关键词：转染HELA细胞
- PNAS-4基因的克隆，功能及其抗肿瘤作用的研究
- 恶性肿瘤对人类的健康和生命威胁极大。随着二十一世纪的到来，肿瘤已经成为人类疾病的第一位死亡原因。虽然包括放疗、化疗和手术治疗等传统的肿瘤治疗方法取得了一定的成效，但其日益显现的局限性促使人们寻找新的肿瘤治疗方法。随着分子...
- 严飞
- 关键词：基因克隆恶性肿瘤细胞凋亡胚胎发育基因治疗
- 抗人PCIA1单克隆抗体的制备及其生物特征的研究被引量：1
- 2006年
- 目的:筛选制备抗人PCIA1的单克隆抗体,鉴定其生物学特征。方法:采用原核表达并纯化的PCIA1蛋白作为抗原,采用杂交瘤技术制备抗人PCIA1单克隆抗体的杂交瘤,用ELISA进行筛选和鉴定其亚类,并用细胞扒片免疫化学方法检测其反应性。结果:获得了32株分泌抗人PCIA1的McAb杂交瘤细胞,McAb-1A4的染色体呈双亲特点,该McAb与多种人肿瘤细胞株和正常肝细胞株有反应。结论:McAb-1A4可用于PCIA1的细胞内定位研究。
- 阚兵严飞杨金亮邓洪新王瑞魏于全
- 关键词：单克隆抗体杂交瘤生物特征
