黄家强
- 作品数：18 被引量：79H指数：5
- 供职机构：同济医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 可溶性TRAIL分子的同源性模建
- 1999年
- 目的:为进一步研究其结构与功能的关系.方法:利用MSI公司的Insight Ⅱ分子模拟软件,参照TNF-α的三级结构信息文件,对TRAIL分子胞外区的R117到G281共165个氨基酸残基进行了同源性模建;并利用Profile-3D程序中的Inverse Fold-ing方法对模建结果进行可靠性分析.结果:模建出的TRAIL分子共含10个β-片层结构,且这些β-片层均对应于TNF-α中相应的β-片层区.这与同一家族的分子在结构保守区,特别是形成二级结构的保守区中序列组成变化不大的理论相吻合.而且验证模建结果的结果可靠性积分值为55.80.结论:模建结果基本正确,为TRALL的结构与功能研究提供了基础.
- 饶严黄家强顾维丰马大龙
- 关键词：TRAIL肿瘤坏死因子
- 4α－PDD、PMA对去甲肾上腺素促进大鼠腹腔巨噬细胞Ⅰa抗原表达的影响
- 1994年
- 本文采用Ｃａ~２＋指示剂的分光光谱法测定巨噬细胞（Ｍφ）内Ｃａ~２＋浓度（［Ｃａ~２＋］ｉ）、ＡＰＡＡＰ桥联酶标法检测Ｍφ膜上Ⅰａ抗原的表达，研究肌醇磷脂代谢中第二信使分子甘油二酯（ＤＧ）在去甲肾上腺素（ＮＥ）促进ＭφⅠａ表达效应中的作用，以进一步探讨ＮＥ效应的跨膜信息传递机制。结果表明：蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂４αＰＤＤ（２５μｇ／ｍｌ）虽不影响ＮＥ（１０￣－８ｍｏｌ／Ｌ）升高Ｍφ［Ｃａ￣２＋］ｉ的效应，却显著减弱了ＮＥ促进ＭφⅠａ抗原表达的效应；而ＰＫＣ激动剂ＰＭＡ（１０ｎｍｏｌ／Ｌ）本身促进ＭφⅠａ抗原表达的作用不明显，也不能进一步增强ＮＥ促进ＭφⅠａ抗原表达的效应。结果提示：ＤＧ激活的ＰＫＣ系统也参与了ＮＥ促进ＭφⅠａ抗原表达的信息传递过程，并与另一第二信使分子肌醇－１，４，５－三磷酸（ＩＰ＿３）介导的Ｃａ￣２＋途径协同发挥作用。
- 黄家强龚非力熊平冯新为
- 关键词：巨噬细胞去甲肾上腺素PKCPMA
- 全文增补中
- 一种快速简便的缺失突变方法被引量：4
- 1998年
- 为了构建能表达稳定的、不易降解的ＴＭ－ＴＮＦ突变体（ＴＭ－ＴＮＦｍ）的基因，本文用改良的Ｓ－ＰＣＲ和ＯＥ－ＰＣＲ两种定位突变技术，成功地构建了缺失３６个碱基的ｐＢＳＫ－ＴＭ－ＴＮＦ突变重组体。与ＯＥ－ＰＣＲ技术（用两对引物进行两次ＰＣＲ反应）相比较，Ｓ－ＰＣＲ技术（用一对引物做一次ＰＣＲ反应）具有快速、经济、简便等优点，但其突变率较ＯＥ－ＰＣＲ低。
- 曾劲杨黄家强李卓娅龚非力
- 关键词：TM-TNF-Α聚合酶链反应
- 新一代治疗用抗体——改型抗体被引量：3
- 1997年
- 改型抗体是在嵌合抗体基础上构建的新一代人源化抗体,因其免疫原性进一步降低而适用于临床治疗。本文较为详细地介绍了改型抗体有关研究进展,包括改型抗体的产生与发展、设计和构建、优点及应用等。
- 黄家强
- 关键词：免疫原性抗体亲和力
- 人TNFα分泌型、跨膜型和跨膜稳定型重组体的构建表达及杀瘤效应
- TNF-α的分泌型与跨膜型在生物学效应等方面各具特征。为研究比较二型TNF的生物学活性及其作用机制,本文用IL-2信号肽编码序列置换TNF的前导肽编码序列,构建出一种在真核细胞仅产生分泌型的TNF重组体;通过缺失二型TN...
- 黄家强卜夏李卓娅龚非力
- 关键词：杀瘤效应
- 文献传递
- 人TRAIL cDNA的真核表达和体外肿瘤细胞的凋亡诱导作用被引量：14
- 2001年
- 目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（ TRAIL）全长 cDNA及其胞外区真核表达产物体外诱导肿瘤细胞的凋亡作用，为 TRAIL基因治疗提供实验依据。方法 从胎心 cDNA文库中经 PCR扩增获得两种形式 cDNAs，构建相应的真核表达载体后进行基因转染，并筛选得到稳定表达细胞株；收集表达上清进行肿瘤细胞的体外凋亡诱导，同时观察凋亡相关蛋白 TFAR19与表达上清共同存在时对肿瘤细胞的作用。结果 成功获得表达两种目的蛋白的真核细胞系，其表达上清均能诱导肿瘤细胞 HeLa和 Hec-1a的凋亡，而且 TFAR19能增强表达上清的凋亡诱导作用。结论 证明 TRAIL基因的真核表达产物同样能诱导肿瘤细胞凋亡，如有 TFAR19存在则效果更佳。
- 史须黄家强张颖妹宋泉声马大龙
- 关键词：CDNA真核表达细胞凋亡TFAR19
- 癫痫患者脑组织TNF-αmRNA、IL-6mRNA以及HLA-Ⅱ抗原表达的改变被引量：34
- 2000年
- 为探讨肿瘤坏死因子 (TNF-α)、白细胞介素 6 (1L - 6 )以及 HL A- 抗原表达在癫痫免疫学发病机制中的作用 ,采用地高辛标记 c DNA探针技术组织原位杂交方法研究癫痫患者 TNF- α m RNA和 IL- 6 m RNA在脑组织中的表达与分布 ;同时借助免疫组织化学技术检测癫痫患者脑组织中 HL A- 抗原的表达水平。结果发现 :癫痫患者脑组织中星形胶质细胞异常高表达 TNF- α m RNA和 IL- 6 m RNA;星形胶质细胞和小胶质细胞异常高表达 HL A- 类抗原。结果提示 :脑组织局部自分泌或旁分泌的细胞因子 (TNF-α和 IL - 6 )水平以及胶质细胞表面 HL A-
- 杜静方敏龚非力李卓娅黄家强徐勇熊平李龄
- 关键词：癫痫白细胞介素6
- 单纯分泌型TNF-α真核表达质粒的构建及表达细胞株的建立被引量：1
- 2000年
- 目的揭示膜结合的TNF α前体(mTNF α)与分泌型TNF α(sTNF α)生物学活性的不同。方法在克隆出mTNF α基因的基础上,我们采用IL 2信号肽编码序列置换m TNF α前导肽编码序列,构建出只产生分泌型TNF α的真核表达质粒pBK sTNFm,并转染至NIH3T3细胞中。结果筛选出的阳性克隆细胞经Westernblot分析及活性测定显示,pBK sTNFm转染细胞裂解液及培养上清 ,均可检出相对分子质量 (Mr)17000的TNF α,且上清具有sTNF α活性,但细胞固定后其活性丧失。结论成功地构建了在真核细胞中只产生sTNF α的表达质粒,并建立相应的表达细胞株。为比较两种类型的TNF α的生物学活性及其作用机制奠定了基础。
- 黄家强卜夏史须李卓娅龚非力
- 关键词：真核表达质粒构建细胞株分泌型TNF-Α
- 膜稳定型TNF突变体的构建、表达及活性研究被引量：3
- 2000年
- 目的 :TNF α可以分泌型 (S TNF)及其前体膜型 (M TNF)两种活性形式同时存在于体内。为膜型TNF的转基因应用 ,构建一种可表达于胞膜而不被酶解的膜稳定型TNF重组体 (mTNFm)。方法 :在克隆M TNFcDNA的基础上 ,删除两型TNF转换酶酶解部位的编码序列 ,构建出mTNFm并测序验证 ;建立只表达膜型TNF的真核细胞株。结果 :Westernblot分析及活性测定结果表明 ,mTNFm不再发生酶切转换且只通过效 靶细胞间直接接触发挥胞毒效应。通过基因直接注射方式 ,使mTNFm稳定表达于小鼠体内。结论
- 黄家强卜夏李卓娅龚非力
- 关键词：基因突变真核表达基因治疗
- NF-κB结合位点在LPS诱导人TNF-α基因转录中的调节作用被引量：6
- 2001年
- 为探讨人TNF α基因启动子区域NF κB结合位点对LPS诱导性基因表达的调节作用 ,将构建的含人TNF α基因启动子区域及其不同缺失片段的pGL2萤光素酶报道基因重组体 ,体外转染HL 60细胞 ,观察LPS刺激对TNF基因启动子指导萤光素酶表达的影响 .发现TNF α基因启动子区域的 3个NF κB结合位点的存在是该基因最大组成性表达和LPS诱导性表达所必需 ;将这 3个位点缺失可完全阻断报道基因的LPS诱导性表达 ,并使其组成性表达明显受到抑制 (P <0 .0 0 1) .缺失κB1和κB2位点 ,使基因组成性表达与LPS诱导性表达均减少约 50 % (P <0 .0 1) ,但诱导倍数则与非突变体相近 ;反之 ,用κB3反义寡核苷酸封闭κB3位点 ,保留κB1和κB2功能 ,使LPS诱导性基因表达抑制 70 % (P <0 .0 0 1) ,诱导倍数明显降低 .保留原有κB3位点 ,再将κB3位点取代κB1和κB2位点 ,可使基因组成性和诱导性表达几乎完全恢复 ;将κB3位点向TSS移近 (- 98→ - 52 ) ,取代Sp1位点 ,虽然κB1和κB2位点仍然缺失 ,但仅一个κB3位点即可使基因组成性和LPS诱导性表达恢复到 80 % .用反义寡核苷酸封闭这个κB3位点 ,不但可使TNF α启动子完全丧失对LPS的反应性 ,还可完全阻断所控基因的组成性表达 .结果表明 ,人TNF α启动子区域 3个NF κB位点均参与该?
- 史须卜夏黄家强熊平徐勇李卓娅龚非力
- 关键词：核因子ΚB结合位点转录基因调控
