陈小凤
- 作品数：5 被引量：17H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：重庆市渝中区科技计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 水甘油通道蛋白7与原发性肝细胞癌的相关性研究
- 2014年
- 目的:检测水甘油通道蛋白7(aquaglyceroporin,AQP7)是否在肝组织中有表达,并观察其在原发性肝细胞癌(human hepatocellular carcinoma,HCC)组织及其配对癌旁肝脏(non-tumourigenic liver,NTL)组织,以及正常肝脏(normal liver,NL)组织中的表达差异,并结合临床病理探讨AQP7与HCC发生发展的相关性。方法:收集34例HCC患者的HCC组织及其配对NTL组织和4例NL组织,分别应用real-time PCR法、蛋白免疫印迹(Western blot)法、免疫组织化学技术,在基因与蛋白、定性及定位层面检测HCC及NTL、NL组织中AQP7的表达情况。收集临床病理资料,分析AQP7的差异表达与患者临床病理参数的相关性。结果:(1)AQP7在所有HCC及NTL、NL组织中均有表达,免疫组化结果显示其主要表达于肝细胞胞膜及胞浆。(2)在HCC组织中AQP7的表达量无论在基因还是蛋白水平明显低于NTL与NL组织,NTL与NL组织中AQP7的表达量无明显差异:m RNA水平,NL组表达量与NTL组相比,无统计学差异(P=0.072),HCC组表达量明显低于NTL组(t=3.841,P=0.000)及NL组(P=0.001);蛋白水平,NL组与NTL组无明显统计学差异(t=0.264,P=0.798),HCC组表达量明显低于NTL组(t=7.333,P=0.000)及NL组(t=5.648,P=0.011)。(3)应用多元线性回归分析法分析患者HCC组织中AQP7降低的差值与临床参数的相关性分析,发现有淋巴结转移的患者降低幅度更大(t=-2.837,P=0.008)。回归方程为:Y=1.612-0.472 X7(F=8.048,P=0.008)。结论:AQP7在人肝脏组织上有大量表达,主要表达于肝细胞胞膜及胞浆,且在HCC组织上表达较其配对NTL组织及NL组织表达明显降低,有淋巴结转移的患者降低幅度更大。
- 陈小凤李传飞刘天宇郑茜白幸吕琳梅浙川
- 关键词：原发性肝细胞癌淋巴结转移
- AQP9过表达抑制肝癌SMMC-7721细胞裸鼠皮下移植瘤的生长及其作用机制的研究被引量：6
- 2015年
- 目的 ：观察水通道蛋白9（aquaporin 9,AQP9）对人肝癌SMMC-7721细胞裸鼠皮下移植瘤生长的影响,并初步探讨其可能的机制。方法 ：将重组慢病毒LV-AQP9（以空载体LV-GFP作为阴性对照）导入SMMC-7721细胞中,构建SMMC-7721/LV-AQP9重组细胞。激光共聚焦显微镜下观察重组慢病毒LV-AQP9在SMMC-7721细胞中的感染效率,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测AQP9 m RNA和蛋白在SMMC-7721细胞中表达的改变。采用FCM法和DAPI染色检测细胞的凋亡情况。CCK-8法检测SMMC-7721细胞增殖能力的变化。将重组肝癌SMMC-7721/LV-AQP9细胞和SMMC-7721/LV-GFP细胞分别接种于裸鼠皮下,观察2组小鼠中移植瘤生长的情况,并采用HE染色观察移植瘤及肺组织病理学的情况,免疫组织化学法检测移植瘤中增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）的表达水平。结果：激光共聚焦显微镜下观察发现,重组慢病毒LV-AQP9在SMMC-7721细胞中的感染效率为90%左右,且AQP9 m RNA以及蛋白在SMMC-7721细胞中的表达水平显著增加（P值均〈0.01）。与空白对照组和阴性对照组（GFP组）相比,AQP9过表达组（AQP9组）细胞的总凋亡率显著增加（P〈0.01）;而AQP9组细胞在48-96 h各时间点的细胞增殖能力均受到抑制（P值均〈0.05）。重复测量方差分析比较2组移植瘤体积的结果提示,AQP9组移植瘤体积显著小于GFP组（F分组=79.161,P分组=0.000）,AQP9组皮下移植瘤生长速度明显小于GFP组（F分组×时间=18.481,P分组×时间=0.002）。AQP9组移植瘤中PCNA蛋白表达水平较GFP组下调。结论 ：AQP9过表达抑制人肝癌SMMC-7721细胞在裸鼠皮下生长,并可能通过促进凋亡及抑制增殖两种途径参与调控,为深入研究分子机制奠定基础,且有望成为肿瘤治疗的新靶点。
- 张文广李传飞刘敏陈小凤吕琳梅浙川
- 油酸通过磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶和p38丝裂原活化蛋白激酶途径调节水通道蛋白3和9的表达被引量：10
- 2013年
- 目的 研究油酸在非酒精性脂肪变性肝细胞模型中诱导水通道蛋白3 （AQP3）和AQP9表达改变的相关信号转导机制.方法 采用油酸干预人肝癌HepG2细胞构建非酒精性脂肪变性肝细胞模型,油红O染色及吸光度值测定分析其脂肪变性程度,通过实时定量聚合酶链反应与Western blot检测AQP3和AQP9表达改变情况；以常规培养的细胞为对照组,联合油酸及不同信号通路抑制剂诱导HepG2细胞,实时定量聚合酶链反应和Western blot方法检测AQP3和AQP9在非酒精性脂肪变性肝细胞模型中表达改变的相关信号分子机制.多组间数据比较采用单因素方差分析,两组间数据比较采用独立样本t检验. 结果 随着油酸刺激浓度的升高（0、250、500μmol/L）,肝细胞内脂肪变性程度增加,AQP3 mRNA表达逐渐下降,而AQP9 mRNA水平逐渐升高,油酸500μmol/L刺激下二者变化均最为明显,分别为0.47±0.18和1.57±0.21,与0 μmol/L组比较,差异均有统计学意义（t值分别为4.5450和3.0306,P值均＜0.05）；蛋白质水平检测结果与之一致.油酸联合磷脂酰肌醇-3激酶抑制剂LY294002处理后,AQP9 mRNA水平升高到4.55±0.62,与对照组的1.00±0.10、油酸单独干预组的2.43±0.53和LY294002单独干预组的1.90±0.16相比,差异均有统计学意义（t值分别为9.7909、4.5018和7.1683,P＜0.01或P＜ 0.05）.p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）抑制剂SB203580干预可使被油酸抑制的AQP3 mRNA水平恢复到与对照组相近水平（1.27±0.11）,AQP9 mRNA则从油酸明显上调的水平下降到0.38±0.09,与干预前相比,差异均有统计学意义（t值分别为5.7455和6.5727,P值均＜0.01）.细胞外信号调节激酶抑制剂PD98059和c-Jun N端激酶抑制SP600125干预对AQP3和AQP9的蛋白和基因水平均无明显作用.油酸诱导后,磷酸化丝/苏氨酸蛋白激酶蛋白相对表达水平从0.21±0.02下降到0.13±0.03,磷酸化p38蛋白相对表达水平从0.58±0.06升高到1.02±0.10
- 顾陆昀邱烈旺陈小凤吕琳梅浙川
- 关键词：P38丝裂原活化蛋白激酶类非酒精性
- 水通道蛋白9对人肝癌细胞系HepG2增殖、凋亡和侵袭迁移的影响被引量：2
- 2015年
- 目的 探讨水通道蛋白9（AQP9）对人肝癌细胞系HepG2增殖、凋亡和侵袭迁移的影响.方法 构建靶向AQP9基因的慢病毒过表达载体,转染HepG2细胞并用嘌呤霉素筛选出稳定细胞株,用激光共聚焦验证转染效率,用qRT-PCR及Western blot检测AQP9表达情况.实验分组：“CC组”为无慢病毒转染的HepG2细胞、“PWPI组”为空载体慢病毒转染的HepG2细胞,“过表达AQP9组”为含过表达AQP9基因慢病毒载体转染的HepG2细胞.利用平板克隆、划痕愈合实验、Transwell小室侵袭实验以及流式细胞仪分别检测AQP9对HepG2增殖、迁移、侵袭、凋亡以及周期的影响.多组间数据比较采用单因素方差分析,两组间数据比较采用独立样本t检验. 结果 激光共聚焦结果显示,HepG2转染AQP9后细胞膜高表达绿色荧光蛋白,qRT-PCR及Western blot检测AQP9的mRNA和蛋白质表达较其他2组均上升,差异均有统计学意义（P值均＜0.01）.平板克隆结果显示,CC组、PWPI组和过表达AQP9组克隆形成率分别为23.53％±2.10％、23.00％±2.022％、16.93％±3.19％,组间比较,差异有统计学意义（F=6.46,P=0.032）.流式测凋亡结果显示,CC组、PWPI组和过表达AQP9组总凋亡率分别为19.70％±2.49％、24.37％±2.38％、44.96％±3.53％,组间比较,差异有统计学意义（F=66.88,P＜0.01）,与PWPI组和CC组比较,差异均有统计学意义（P值均＜0.01）;流式测周期结果显示,CC组、PWPI组和过表达AQP9组细胞停留在S期和G1期的细胞百分比分别为34.39％±4.33％和54.58％±0.89％;35.65％±1.39％和53.08％±2.06％;15.25％±1.81％和66.58％±0.99％,组间比较,差异均有统计学意义（F值分别为49.25和82.09,P值均＜0.01）.划痕愈合实验结果显示,过表达AQP9组细胞24h的迁移率为6.38％±1.70％,与PWPI组16.74％±1.40％比较,差异有统计学意义（t=8.133,P=0.01）.Transwell实验结果显示,过表达AQP9组24h穿过细胞数为（17±8）个,与PWPI组（95�
- 李传飞陈小凤张文广刘佳吕琳梅浙川
- 关键词：慢病毒属细胞增殖
