陈云霞
- 作品数：6 被引量：7H指数：2
- 供职机构：长治医学院更多>>
- 发文基金：山西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学理学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 高效液相色谱法测定琥珀酰亚胺及其酶解产物被引量：2
- 2006年
- 采用HPLC法,以Symmetry(C18柱(4·6mm×150mm,5μm),甲醇∶10mmol/L磷酸缓冲液(pH6·5)=5∶95(V/V)为流动相,在波长210nm检测条件下,使琥珀酰亚胺及其酶解产物琥珀酰胺酸得到了较好的分离。琥珀酰亚胺与琥珀酰胺酸的质量浓度与峰面积呈良好的线性关系,相关系数均在0·999以上。该方法既可用于定量分析琥珀酰亚胺和琥珀酰胺酸,又能用于测定环二酰胺酶的活性及产物转化率。检测精度可达μg水平;用NMR确认了酶分解物质的分子结构。
- 钮利喜陈云霞钞建宾袁静明
- 关键词：琥珀酰亚胺高效液相色谱核磁共振谱
- 突变型环酰亚胺水解酶的底物专一性研究被引量：1
- 2007年
- 目的:研究环酰亚胺水解酶(CIH293)C-末端区残基对其底物专一性的影响。方法:通过缺失或替代获得了环酰亚胺水解酶C-末端剔除2个或3个氨基酸残基及C-末端两个Lys替代为两个Glu的突变型酶CIH291、CIH290以及KK292,293EE,用比色法与高效液相色谱法分析了重组野生型酶与突变型酶的底物专一性和动力学参数。结果:突变型酶与重组野生型酶相比,底物专一性未发生显著改变,最适底物仍为琥珀酰亚胺,然突变型酶对最适底物的亲和力略有降低,导致反应速度减小。结论:环酰亚胺水解酶(CIH293)C-末端区残基的改变对其底物专一性的影响不大,但影响了酶对底物的亲和力。
- 陈云霞钮利喜袁静明石亚伟
- 关键词：动力学参数底物专一性
- 高活性Co^2＋-替代海因酶中Co^2＋的定量及酶学活性鉴定被引量：3
- 2008年
- 利用产D-海因酶(HDT)的重组pE-hdt/E.coli菌株,在LB培养基中添加40μmol/L的Co2+,37℃培养10h,表达产物经Q-Sepharose阴离子交换剂和Phenyl-Sepharose疏水层析,获得电泳纯Co2+-D-海因酶(Co2+-HDT).该酶对底物DL-海因的比活性较HDT高约6倍,达21.8U/mg.可见光光谱分析表明,在498nm和568nm处呈现Co2+-海因酶络合物的特征性吸收峰.用ICP-AES测定纯酶金属离子含量,HDT每摩尔亚基含0.93摩尔Zn2+和0.04摩尔Co2+,而Co2+-HDT中每摩尔亚基中含0.17摩尔Zn2+和0.89摩尔Co2+.这一结果表明,HDT中的Zn2+已被Co2+所替代.此外,在动力学常数,pH和温度稳定性,金属螯合剂EDTA的影响等方面,HDT和Co2+-HDT也略有差异.
- 张学尧陈云霞史鹏梁爱华袁静明
- 关键词：D-海因酶
- 突变型环酰亚胺水解酶的分子构象与底物专一性
- 环酰亚胺水解酶(Cyclic imide hydrolase，CIH，EC.3.5.2.16)，是一类报道甚少的环酰胺酶类，在细菌、真菌与霉菌中分布广泛。目前，有关CIH的报道主要有三例，分别来自于Blasterbact...
- 陈云霞
- 关键词：分子构象反相高效液相色谱法
- 文献传递
- 蛋白质类药物合成方法学研究进展
- 2006年
- 综述了化学法和化学—生物结合法制备蛋白质药物的一些实例,重点介绍了(His)6-tag辅助法和蛋白质内含子介导法。
- 陈云霞袁静明
- 关键词：蛋白质药物化学合成法
- 环酰亚胺水解酶C末端区为该酶活性所必需被引量：1
- 2007年
- 为了研究一个新环酰亚胺水解酶（CIH）C端区残基对酶分子构象及酶活性的影响，设计了C末端缺失1～4个氨基酸残基以及C-末端2个Lvs替代为2个Glu或2个Leu的突变酶，以野生型酶基因重组质粒pE—cih293为模板，在相应引物存在下，通过PCR扩增获得突变的CIH基因片段．经克隆、表达与纯化，得到不同的突变酶蛋白．酶活性测定、荧光光谱与CD谱分析表明，随着C-末端缺失残基的增多，酶活性丧失也越来越多，但酶分子的聚合状态未发生变化；当CIH的C末端2个Lys替代为2个Glu时，酶活性及分子结构变化均不明显，但当替代为2个Leu时，酶活性丧失殆尽，分子结构变得松散而不再保持寡聚态．pH及热稳定性实验也表明。酶的稳定性与其分子的完整性密切相关．结果证实，CIH的C末端电荷残基对该酶活性与分子状态具有重要作用．
- 石亚伟陈云霞崔丽方袁静明
- 关键词：分子构象
