金大智
- 作品数：84 被引量：303H指数：9
- 供职机构：浙江省疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：浙江省医药卫生科学研究基金国家自然科学基金艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程生物学农业科学更多>>
- 多重荧光PCR结合Allglo探针技术检测艰难梭菌相关毒素基因被引量：13
- 2014年
- 目的采用多重荧光PCR结合Allglo探针技术，建立一种快速、特异、灵敏的鉴定艰难梭菌相关毒素基因的方法，并对浙江杭州地区腹泻患者的产毒型艰难梭菌感染现状进行调查研究。方法应用型研究。针对艰难梭菌毒素tcdA和tcdB基因设计引物和相应的Allglo探针，优化PCR扩增体系，并评价其特异性、灵敏度、重复性。收集2012年8至12月杭州市第一人民医院的门诊腹泻患者粪便标本共180份，对粪便中携带tcdA和tcdB基因的产毒型艰难梭菌进行鉴定，同时通过对tcdA和tcdB基因直接测序进一步验证荧光PCR检测结果的可靠性。结果本试验建立的结合Allglo探针的多重荧光PCR方法可同时、准确、特异地鉴定艰难梭菌tcdA和tcdB基因，灵敏度可达10CFU／mI。定量检测tcdA基因的循环阈值（Ct）值变异系数分别为2．30％、0．42％、0．81％，检测tcdB基因的ct值变异系数分别为1．91％、1．02％、1．18％，均小于5％。在180份腹泻粪便样本中，检测m26份阳性样本，阳性率为14．4％，其中tcdA和tcdB毒素基因均阳性的样本为23份（23／26，88．5％），仅tcdA毒素基因阳性的样本为2份（2／26，7．7％）；仅tcdB毒素基因阳性的样本为1份（1／26，3．8％）。同时，采用直接测序方法对样本进行扩增检测和序列比对，与荧光定量PCR结果完全一致。结果显示浙江杭州地区腹泻患者感染的产毒型艰难梭菌以同时携带tcdA和tcdB毒素基因的菌株为主。结论本研究建立的Allglo探针的多重荧光PCR方法可用于临床上快速、准确地检测产毒型艰难梭菌。
- 金大智罗芸罗丽张政叶菊莲张严峻吴方方小飞李辉王贤军
- 关键词：梭菌细菌毒素类肠毒素类细胞毒素类
- 艰难梭菌毒素A和毒素B羧基端抗原区段的表达及抗原性分析被引量：2
- 2015年
- 目的构建艰难梭菌毒素A和毒素B的原核表达载体,获得融合表达抗原,并鉴定其抗原活性。方法以ATCC43255菌株基因组DNA为模板,通过PCR扩增获得毒素A和B羧基端(C端)基因片段,并进行原核表达获得毒素A和B羧基端抗原区段。利用艰难梭菌毒素检测试剂盒对毒素A和B羧基端抗原区段的抗原性进行鉴定。结果成功构建了艰难梭菌毒素A和毒素B的原核表达载体,并获得能被相应特异性抗体所识别的毒素A和B羧基端抗原区段。结论获得毒素A和B羧基端抗原区段具有很好的抗原活性,为进一步制备相应抗体并建立艰难梭菌毒素A和B的免疫检测方法奠定了基础。
- 黄忱杨锡琴修冰水罗芸刘志强张旭辉赵琰枫金大智冯晓燕张贺秋
- 关键词：艰难梭菌细菌毒素类原核表达
- 鼠疫耶尔森菌和假结核耶尔森菌基因鉴别方法的建立及评价被引量：1
- 2015年
- 目的建立鼠疫耶尔森菌和假结核耶尔森菌基因鉴别方法。方法依据鼠疫菌、假结核菌特有的基因组序列[“疫岛（PeI）”和“假岛（Psi）”]，与已公布的12株鼠疫菌和4株假结核菌全基因序列进行比对，设计特异性的引物，对鼠疫菌、假结核菌和其他肠道细菌进行鉴定。结果用52株鼠疫菌、57株假结核菌和其他肠道菌株进行验证，结果显示，5对鼠疫菌的鉴定引物中，2对（PeI2和PeI11）仅在52株鼠疫菌中扩出目的条带，另3对引物（PeIl、PeI3和PeI12）除鼠疫菌外在部分假结核菌株中也扩出目的条带；5对假结核菌鉴定引物中，1对引物（Psi1）在52株鼠疫菌和57株假结核菌株中扩出目的条带，4对引物（Psi7、Psi16、Psi18和Psi19）仅在57株假结核菌株中均扩出目的条带，在鼠疫菌中未扩出目的条带。结论用鼠疫菌和假结核菌共有的Psil序列、鼠疫菌特有的PeI2和PeIll序列及假结核菌特有的Psi7、Psi16、Psi18和Psi19序列组成的基因鉴别方法，可以用于鼠疫菌和假结核菌的基因快速鉴别。
- 石国祥张政梅玲玲陈劲华梅盛华金大智张志凯王宇萌张孝和罗芸孙继民俞东征夏连续
- 关键词：鼠疫耶尔森菌假结核耶尔森菌基因
- 下呼吸道人博卡病毒感染患儿的荧光定量PCR检测被引量：2
- 2007年
- 引起小儿下呼吸道感染的病原微生物有相当部分是存在于自然界的病毒，其中包括呼吸道合胞病毒、流感病毒、腺病毒及冠状病毒等。迄今为止，约10％～39％的小儿下呼吸道感染的病因未知。人博卡病毒（human bocavirus）是最近从患儿下呼吸道感染分泌物中发现的一种新人细小病毒（parvovlrus），据报道由瑞典斯德哥尔摩卡罗林斯卡学院的Tobias Allander儿童医院的医生在对540例下呼吸道感染患儿进行治疗时发现的，将之命名为“人博卡病毒”。新发现的人博卡病毒被认为在引起患儿下呼吸道感染的病因中至少占5％。
- 曾爱平林峰郑敏巧林海燕郑昌华李桦陈弘吴锋杨宁敏杨恩金大智文思远
- 关键词：小儿下呼吸道感染荧光定量PCR检测患儿人细小病毒
- 一种抗生素耐药NDM-1基因的荧光检测试剂盒及检测方法
- 本发明提供了一种抗生素耐药NDM-1基因的荧光检测试剂盒及检测方法。所述试剂盒中特异性引物和荧光探针序列如下：上游引物：5′-CAG CCA CCA AAA GCG ATG T-3′，下游引物：5′-CGG CCACAC...
- 金大智张政罗芸程苏云
- 荧光定量PCR结合TaqMan-MGB检测食品中空肠弯曲菌被引量：1
- 2009年
- 目的:基于TaqMan-MGB探针的荧光定量PCR技术,研发出一种定量检测食品污染物中空肠弯曲菌的方法,为食品污染物调查提供快速、可靠的监测工具。方法:根据TaqMan-MGB探针原理,在空肠弯曲菌基因组保守区设计引物和探针,探针的5′端用FAM荧光标记,3′端标记MGB,建立基于TaqMan-MGB探针的实时荧光定量PCR方法。并对其特异性、灵敏度、重复性进行评价,然后对收集的市场食品污染物调查样本进行检测,与常规方法做对照。结果:所建立的实时荧光定量PCR方法可准确、特异的检测空肠弯曲菌,最低检测限为10 cfu/ml;对50例市场污染物调查样本进行评价,结果显示6份食品污染物调查样本中空肠弯曲菌为阳性,其余为阴性,结果与常规培养检测结果一致。结论:空肠弯曲菌TaqMan-MGB探针荧光定量PCR方法具有结果可靠、操作简便等优势,比目前常规检测方法更灵敏,该方法可用于食物污染物调查、临床检验等多个方面。
- 金大智程苏云张政朱敏罗芸叶菊莲
- 关键词：实时荧光定量PCR空肠弯曲菌
- 实时荧光RT—PCR检测活性单核细胞增生李斯特菌方法的建立被引量：5
- 2008年
- 目的采用逆转录结合实时荧光定量PCR技术，建立一种快速、准确、特异甄别单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes，简称单增李氏菌）死活状态的定量方法。方法根据单增李氏菌hlya基因序列设计引物和探针；对实时荧光PCR反应体系进行优化后，提取菌体mRNA，通过随机引物进行逆转录反应；产生的cDNA通过实时荧光定量PCR进行鉴定。进一步评价逆转录结合实时荧光定量PCR方法的特异性、灵敏度、重复性后，对20份模拟双盲样本进行检测。结果本实验所建立的逆转录结合实时荧光定量PCR方法可准确、特异地检测单增李氏菌，其他菌株和失活的单增李氏菌均无阳性结果出现；该方法检测纯菌和模拟样本的灵敏度分别可达到10CFU／ml和1000CFU／ml；定量检测的批间和批内的变异系数均小于5％；对20份模拟样本进行检测，其中10份含有活性单增李氏菌样本的检测结果均为阳性，其他含有失活单增李氏菌的5份样本和其他致病菌的5份样本检测结果为阴性。结论本文建立的检测活性单增李氏菌实时荧光定量PCR方法快速、准确，结果可靠，实用性强，可进行定量分析，为食品安全监测和现场流行病学调查提供较好的分析手段和完整的数据。
- 金大智曹际娟张政谢明杰朱水荣
- 关键词：实时荧光定量PCR单核细胞增生李斯特菌流行病学调查
- 副溶血性弧菌多重定量PCR检测试剂盒及检测方法
- 本发明提供了一种副溶血性弧菌毒素基因多重定量PCR检测试剂盒及检测方法。所述试剂盒主要包括特异性引物和探针以及PCR反应试剂，所述特异性引物和探针由副溶血性弧菌耐热直接溶血素基因(tdh)、不耐热溶血素基因(tlh)、毒...
- 叶菊莲金大智罗芸张政王复甦
- MALDI-TOF MS在临床微生物鉴定中的标准化操作专家共识被引量：57
- 2019年
- 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of- flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)技术,简称飞行质谱技术,是近年来临床微生物鉴定领域最具代表性的技术之一。每种微生物都由自身独特的肽/蛋白质组成,通过MALDI-TOF MS检测微生物的肽/蛋白质指纹图谱,经软件处理并与微生物数据库进行比对分析,可在几分钟之内完成对微生物种、属水平的鉴定。与传统的检测微生物表型和生理生化方法相比,MALDI-TOF MS具有快速、准确、高通量、和低成本的优势。除了可鉴定常见细菌和酵母样真菌,更极大提高了临床微生物实验室对苛养菌、厌氧菌、丝状真菌以及分枝杆菌等难鉴定微生物的鉴定效率和能力。对MALDI-TOF MS系统开发耐药性分析、细菌同源性分析及阳性血培养、无菌体液细菌直接鉴定等工作尚处在科研阶段,随着研究的成熟和标准化的实现,有望逐步从研究走入临床应用。
- 胡继红马筱玲王辉张建中罗燕萍鲁辛辛苏建荣张嵘赵虎余方友孙自镛顾兵刘小平赵建宏胡云建胡志东吕火烊周铁丽金大智刘文恩喻华徐修礼杨青
- 关键词：MALDI-TOF微生物鉴定基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱MS蛋白质指纹图谱
- 肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶基因SnaPshot技术检测方法的建立与研究
- 2015年
- 目的碳青霉烯类抗生素的大范围使用导致多药耐药株肺炎克雷伯菌不断出现,给该菌感染的临床治疗带来极大的困难,针对产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌,建立一种高通量、快速、准确地甄别15种碳青霉烯酶基因型的分析方法,进行碳青霉烯酶基因型筛查,同时采用特异性引物测序寻找碳青霉烯酶新的基因型,为产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的防控、流行病学分析、溯源和临床治疗提供可靠的分析方法。方法采用Sna Pshot技术,设计引物,优化反应体系和条件,通过高通量、快速、准确的PCR反应,反应产物经测序仪检测,用Gene Mapper 3.2软件分析检测结果,从而得到基因分型结果。结果对已知分型的6株KPC分型结果与已知分型一致。临床收集的耐药样本均为KPC-2型,这也是国内外报道较多的一种亚型。结论采用Sna Pshot技术成功构建了一种可对15种碳青霉烯酶基因型进行分型和寻找碳青霉烯酶新的基因型的方法。
- 朱海燕顾建忠葛斌文金大智吴方
- 关键词：碳青霉烯酶SNAPSHOT基因型引物
