都伟欣 作品数:56 被引量:139 H指数:6 供职机构: 中国食品药品检定研究院 更多>> 发文基金: 国家科技重大专项 艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 更多>>
结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白对不同分枝杆菌致敏动物的鉴别作用 被引量:4 2009年 目的探讨结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白对不同分枝杆菌致敏动物的鉴别作用。方法以不同分枝杆菌分别致敏豚鼠,致敏成功后,每只豚鼠皮内分别注射结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白和结核菌素纯蛋白衍生物(PPD)。用双盲法记录注射后24和48h注射局部硬结的纵径和横径,计算其均值。结果PPD对结核分枝杆菌活菌、死菌和卡介苗致敏豚鼠的皮肤反应均为阳性,局部硬结直径分别为(13.91±1.04)mm、(13.11±1.40)mm和(13.16±1.43)mm。结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白对结核分枝杆菌活菌致敏豚鼠的皮肤反应为强阳性(≥10mm),局部硬结直径为(10.53±2.66)mm;对结核分枝杆菌死菌致敏豚鼠的皮肤反应为弱阳性(≤5mm)或阴性,局部硬结直径为(1.61±1.39)mm;对卡介苗致敏豚鼠的皮肤反应为阴性,局部硬结直径为0。结论结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白可鉴别结核分枝杆菌活菌、死菌和卡介苗致敏动物。 都伟欣 陈保文 徐苗 王国治关键词:分枝杆菌 重组AEC/BC02疫苗联合化疗在豚鼠模型中的抗结核效果 被引量:5 2018年 目的评价豚鼠感染结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)后,抗生素治疗联合重组AEC/BC02疫苗免疫的抗结核效果。方法高剂量结核分枝杆菌皮下攻击豚鼠2周后,将重组ESAT6-CFP10(EC)变态反应原皮试阳性的豚鼠随机分成4组:生理盐水(NS)组、AEC/BC02疫苗组、抗生素组、抗生素+AEC/BC02疫苗组。抗生素+AEC/BC02疫苗组接受异烟肼(isoniazid,INH)和利福喷丁(rifapentine,RFT)的联合化疗,1次/周,共3次,给药结束后每只豚鼠开始肌内免疫AEC/BC02疫苗,1只/次,共6次,间隔10 d。AEC/BC02疫苗组仅免疫AEC/BC02疫苗;抗生素组给药INH和RFT。这两组给药剂量和程序同抗生素+疫苗组。NS组给予生理盐水作为阴性对照。全部豚鼠于攻毒后第14周安乐死解剖,评价肝、脾、肺的脏器综合病变指数,计算脾脏活菌载量(lgCFU),并对肝、脾、肺脏器做组织病理检查。结果NS组、AEC/BC02疫苗组、抗生素组、抗生素+AEC/BC02疫苗组的脏器评分分别为83±8、77±22、45±28和19±14。其中抗生素+AEC/BC02疫苗组脏器病变最轻,与抗生素组、AEC/BC02疫苗组和NS组比较,差异均有统计学意义(分别为P〈0.05,P〈0.01,P〈0.01)。抗生素组与AEC/BC02疫苗组和NS组比较,差异均有统计学意义(P均〈0.01);而AEC/BC02疫苗组与NS组比较,差异无统计学意义。抗生素+AEC/BC02疫苗组脾活菌数最低,为(2.50±1.26)lgCFU,与NS组的(4.92±0.52)lgCFU、AEC/BC02疫苗组的(4.78±0.84)lgCFU以及抗生素组的(4.39±0.50)lgCFU比较,差异均有统计学意义(P均〈0.01)。抗生素组和AEC/BC02疫苗组的脾脏活菌载量均较高,与NS组比较,差异均无统计学意义。肺病理组织切片:各组肺脏均出现不同程度的以肉芽肿病灶为主的病理变化,病变程度由重到轻为AEC/BC02疫苗组、NS组、抗生素组和抗生素+AEC/BC02疫苗组。结论IN 卢锦标 杨蕾 苏城 沈小兵 陈保文 王国治 都伟欣关键词:结核疫苗 保护力 抗生素联合卡介苗治疗结核病的动物模型评价 被引量:1 2018年 目的用豚鼠模型初步评价抗生素联合卡介苗治疗结核病的可行性。方法用高剂量Mtb皮下攻击豚鼠2周后,将重组ESAT6-CFP10(EC)变态反应原皮试阳性的豚鼠随机分成4组:NS组、BCG组、抗生素组、抗生素+BCG组。抗生素+BCG组接受异烟肼(isoniazid,INH)和利福喷丁(rifapentine,RFT)的联合化疗,1次/周,共3次,给药结束后,每只豚鼠皮下免疫1/10人用剂量BCG;BCG组每只豚鼠仅皮下免疫1/10人用剂量BCG;抗生素组仅给药INH和RFT,1次/周,共3次;NS组给予生理盐水作为阴性对照。全部豚鼠于攻毒13周后安乐死解剖,评价肝、脾、肺的脏器综合病变指数,计算脾脏活菌载量(lg CFU),并对肝、脾、肺脏器做组织病理检查。结果 NS组、BCG组、抗生素组和抗生素+BCG组的脏器评分分别为83±8、81±10、45±28和33±14。其中,BCG组与NS组差异无统计学意义;抗生素组和抗生素+BCG组与NS组差异均有统计学意义(分别q=6.84,P<0.001;q=9.02,P<0.001),两组与BCG组比较,差异也均有统计学意义(q=6.44,P<0.001;q=8.63,P<0.001);但抗生素组与抗生素+BCG组差异无统计学意义。抗生素+BCG组豚鼠的脾脏活菌载量为(3.62±1.13)lg CFU,与NS组的(4.92±0.52)lg CFU和BCG组的(5.20±0.43)lg CFU比较,差异均有统计学意义(q=5.54,P<0.01;q=6.72,P<0.001)。抗生素组脾脏活菌载量为(4.39±0.50)lg CFU,与其他各组的差异均无统计学意义。病理组织切片显示各组病变程度由重到轻依次为BCG组>NS组>抗生素+BCG组≈抗生素组。结论化疗后免疫1针BCG的治疗效果较差,多针次的BCG免疫效果还需进一步研究。 都伟欣 苏城 沈小兵 杨蕾 陈保文 王国治 卢锦标关键词:抗生素 卡介苗 保护力 结核分枝杆菌早期培养滤液蛋白的制备和应用 2012年 全球结核杆菌感染者高达20亿人,每年新发病例约800万~1000万,其中我国每年新发患者高达150万。结核杆菌流行病学的一个重要特征是结核分枝杆菌的潜伏感染。结核分枝杆菌潜伏感染是一种亚临床状态,其中约有10%的结核分枝杆菌潜伏感染者会发展成为结核病患者。流行病学调查显示,我国受结核杆菌感染人数超过5亿。因此,如何有效、全面地筛查出结核病患者和结核杆菌潜伏感染人群,是结核病控制首要解决的问题。 都伟欣 杨蕾 苏城 沈小兵 徐苗 卢锦标 王国治 陈保文关键词:结核分枝杆菌 流行病学调查 结核病患者 结核杆菌 反相高效液相色谱法和16S rRNA序列分析法对分枝杆菌分型鉴别的比较研究 被引量:2 2012年 目的比较反相高效液相色谱法(RP-HPLC)和16S rRNA序列分析法对分枝杆菌分型鉴别的异同。方法将《伯杰细菌鉴定手册》中载入的49种分枝杆菌模式株接种于改良罗氏培养基上,置于最适温度下孵育。挑取生长良好且无污染的培养物,一部分经皂化和酸化提取分枝菌酸并衍生后,采用反相高效液相色谱法进行分枝菌酸指纹图谱构建;另一部分经裂解和PCR扩增,获得DNA,纯化后,采用核酸分析仪进行16S rRNA序列测定。结果 49种分枝杆菌模式株中,采用RP-HPLC分析时,单簇峰的结核分枝杆菌、牛分枝杆菌和胃分枝杆菌,双簇峰的爱知分枝杆菌和罗德岛分枝杆菌,三簇峰的南非分枝杆菌和母牛分枝杆菌共7种因各组内相对保留时间和相对峰高比值相近而难以进行鉴别;采用16S rRNA序列分析法分析时,产鼻疽分枝杆菌和塞内加尔分枝杆菌、溃疡分枝杆菌和海分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌和胃分枝杆菌、龟亚分枝杆菌和龟脓分枝杆菌以及结核分枝杆菌复合群(结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、田鼠分枝杆菌和非洲分枝杆菌)共12种因各组内基因序列相似性百分比为100%而难以进行鉴别。通过两种分型鉴别方法的比较,可见除结核分枝杆菌和牛分枝杆菌外,两种分型方法相互补充,可将49种分枝杆菌模式株中的47种进行明确鉴别。结论分枝菌酸RP-HPLC和16S rRNA序列分析法均为分枝杆菌的分型鉴定提供了准确和有效的技术方法。两种方法相互借鉴能准确地将大多数分枝杆菌鉴定到种。 陈保文 都伟欣 杜蓉 闫李侠 郭磊 杨蕾 王国治关键词:分枝杆菌属 分枝菌酸 高压液相 细菌分型技术 RRNA 生物制品生产与质量控制的生物安全风险分析 被引量:1 2010年 目的探讨生物制品生产与质量控制中存在的生物安全风险。方法采用文献法和调研法,认知生物制品生产与质量控制中存在的生物安全风险。结果生物制品生产企业应高度重视生物安全。结论加强对生物安全风险的管理,以确保安全生产。 陈保文 刘刚 都伟欣 王国治关键词:生物安全 生物制品 风险分析 重组结核分枝杆菌11kDa变态反应原临床前安全性研究 被引量:3 2012年 目的通过临床前动物试验评价重组结核分枝杆菌11kDa变态反应原的安全性。方法通过小鼠的急性毒性试验、豚鼠的一般安全性试验、致敏效应试验、全身过敏试验以及家兔的热原试验等评价重组结核分枝杆菌11kDa变态反应原在动物体内的安全性和耐受性。结果重组结核分枝杆菌11kDa变态反应原未引起小鼠的急性毒性、豚鼠的迟发型超敏反应、全身过敏反应和家兔的热原反应;在豚鼠的安全性实验中未见重组结核分枝杆菌11kDa变态反应原对动物注射部位、体重及各脏器有不良影响。结论重组结核分枝杆菌11kDa变态反应原具有良好的安全性。 陈保文 都伟欣 王璞 沈小兵 苏城 王国治 徐苗关键词:结核分枝杆菌 动物 安全性 4种结核分枝杆菌皮肤变态反应原的动物试验 被引量:5 2018年 目的通过不同分枝杆菌致敏豚鼠皮试反应的大小评价4种结核分枝杆菌皮肤变态反应原的诊断效果。方法用结核分枝杆菌和卡介苗分别致敏豚鼠,致敏成功后采用轮圈法于每只豚鼠皮内分别注射TB-PPD、BCGPPD、重组结核分枝杆菌ESAT6-CFP10变态反应原(简称EC)和重组结核分枝杆菌11k Da变态反应原(简称11k Da)4种皮肤变态反应原各0.1 mL。记录注射后24及48 h注射局部红肿反应的纵径和横径,计算其均值。结果在不同分枝杆菌致敏豚鼠中,4种皮试试剂各自24及48 h皮试反应大小差异均无统计学意义(P>0.05)。在结核分枝杆菌致敏豚鼠中,TB-PPD和BCG-PPD皮试反应均为阳性,48 h局部红肿直径分别为(11.1±1.4)和(8.7±2.4)mm,差异有统计学意义(P<0.05);EC和11kDa皮试反应也均为阳性,48 h局部红肿直径分别为(15.4±2.3)和(17.0±1.7)mm,差异无统计学意义(P>0.05),但两者反应强度均高于TB-PPD和BCG-PPD。在卡介苗致敏豚鼠中,TB-PPD和BCG-PPD皮试反应均为阳性,48 h局部红肿直径分别为(11.8±1.3)和(11.4±1.5)mm,差异无统计学意义(P>0.05)。而EC和11kDa皮试反应均为0。结论 EC和11kDa可有效鉴别结核分枝杆菌感染和卡介苗接种,而TB-PPD和BCG-PPD均不能对其进行有效鉴别。 都伟欣 卢锦标 王国治 沈小兵 苏城 杨蕾 陈保文关键词:结核分枝杆菌 变态反应原 豚鼠模型中结核菌素纯蛋白衍生物量效关系比较研究 被引量:3 2018年 目的在不同分枝杆菌致敏豚鼠模型中研究结核菌素纯蛋白衍生物(purified protein derivative of tuberculin,TB-PPD)的量效关系。方法将受试豚鼠随机分成6组:结核分枝杆菌H37Rv活菌致敏组、结核分枝杆菌临床株CMCC 94757、94754、94766致敏组、卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin vaccine,BCG)致敏组和灭活结核分枝杆菌H37Rv致敏组。各组豚鼠分别于左侧大腿腹股沟皮下注射相应致敏原,5~6周后,所有豚鼠于脊柱两侧皮内注射20 IU/m L TB-PPD和50 IU/m L TB-PPD各0.1 m L;于注射后24 h、48 h观察和记录局部硬结的纵径与横径,计算平均值。结果所有组别豚鼠接受两种规格TB-PPD皮试后,无论是24 h还是48 h,局部硬结反应直径均大于10 mm,全部阳性,阳转率均为100%。5 IU TB-PPD皮试反应强度高于2 IU TB-PPD,存在明显的剂量效应关系。其中,24 h结果显示:2 IU TB-PPD和5 IU TB-PPD在H37Rv活菌致敏组、94766致敏组、灭活H37Rv致敏组皮试反应大小差异无统计学意义(t=2.291、P=0.071;t=2.722、P=0.053;t=1.76、P=0.153),其余3组5 IU TB-PPD皮试反应强度高于2 IU TB-PPD,差异均有统计学意义(t=4.098、P=0.015;t=4.811、P=0.009;t=3.068、P=0.037)。48 h硬结反应和24 h、48 h平均硬结反应结果均显示:在各致敏组豚鼠模型中5 IU TB-PPD皮试反应强度均高于2 IU TB-PPD,皮试反应大小均有统计学差异(t=3.471、P=0.018;t=3.371、P=0.020;t=6.216、P=0.003;t=5.244、P=0.006;t=3.959、P=0.017;t=4.674、P=0.010;t=4.824、P=0.008;t=3.794、P=0.019;t=3.857、P=0.018;t=2.86、P=0.046;t=3.539、P=0.024;t=3.365、P=0.028)。结论各组豚鼠致敏模型中5 IU TB-PPD的效价均明显高于2 IU TB-PPD,存在较为明显的量效关系。各种感染状态下,虽然高剂量制品可诱导更强的迟发型超敏(delayed type hypersensitivity,DTH)反应,但低剂量制品也不影响其阳性检出率。 苏城 卢锦标 沈小兵 陈保文 王国治 都伟欣关键词:结核菌素纯蛋白衍生物 皮肤试验 结核分枝杆菌 卡介苗 一种增强型结核亚单位疫苗 本发明提供了一种增强型结核亚单位疫苗,其包括结核分枝杆菌抗原Ag85b蛋白、重组结核分枝杆菌ESAT6-CFP10融合蛋白、BCG-CpG佐剂、铝佐剂以及PolyIC佐剂。本发明疫苗可减轻Mtb感染豚鼠各脏器的病变程度,... 王国治 卢锦标 都伟欣 陈保文 杨蕾 苏城 沈小兵文献传递