洪扬
- 作品数：5 被引量：26H指数：2
- 供职机构：中国科学院生物物理研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 利用半补齐技术构建以质粒为载体的基因文库被引量：2
- 1993年
- 在以质粒为载体的基因文库构建中,引入末端半补齐技术,可以显著提高文库转化子中重组子所占的比例(>70%),从而可以大大减轻文库构建和筛选的工作量.与常用的碱性磷酸酯酶法相比,半补齐技术具有连接产物转化率高、能防止外源片段自身间发生连接反应等优点,可望在以质粒为载体的基因文库构建中取代碱性磷酸酯酶法.
- 洪扬雷虹
- 关键词：基因文库质粒
- 地衣芽孢杆菌2709碱性蛋白酶基因的克隆、序列测定及其表达被引量：11
- 1994年
- 以克隆的地衣芽孢杆菌2709碱性蛋白酶编码序列的PCR扩增片段为探针,通过原位杂交从2709基因文库中筛选出两个含有完整的2709碱性蛋白酶基因的阳性克隆:pSC1和pSC7。对pSC7中的插入片段构建若干亚克隆后测定了其全部DNA序列,结果显示该插入片段含2709碱性蛋白酶及其信号肽与导肽(Pro-peptide)在内的全部编码序列(1140碱基对)及长度分别为299和832碱基对的上、下游序列,该序列同M.Jacobs等克隆的地衣芽孢杆菌NCIB6816的Subtilisin Carlsberg基因序列显示了极高的同源性。通过枯草杆菌-大肠杆菌穿梭质粒pBE2将克隆的2709碱性蛋白酶基因转入到蛋白酶缺陷型的枯草芽孢杆菌DB104中,结果表明2709碱性蛋白酶基因在枯草芽孢杆菌中得到了明显的表达。
- 洪扬雷虹赵玉风韩玉珉申同健
- 关键词：地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶基因
- 地衣芽孢杜菌2709碱性蛋白酶基因的克隆、序列测定及表达
- 洪扬
- 地衣芽孢杆菌2709碱性蛋白酶基因的克隆、序列测定及表达
- 以pUCI8为载体,采用'末端半补齐(partial-filling)'技术按shotgun途径构建了2709菌株的基因文库,共获3× 10<'4>个转化子,其中重组子所占比例在70﹪以上.以克隆的2709碱性蛋白酶成熟...
- 洪扬
- 关键词：基因表达地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶基因克隆
- 地衣芽孢杆菌2709碱性蛋白酶编码序列的PCR扩增、克隆及序列测定被引量：19
- 1993年
- 在地衣芽孢杆菌NCIB 6816菌株碱性蛋白酶基因已知序列的基础上,通过设计合适的引物,利用PCR(Polymerase Chain Reaction)技术从地衣芽孢杆菌2709菌株的柒色体DNA中扩增了2709碱性蛋白酶的编码序列。对两个克隆的PCR片段的全序列分析结果显示,2709碱性蛋白酶的编码序列同相应的NCIB 6816序列相比有3％左右的碱基组成差异。由此推定的2709碱性蛋白酶的氨基酸序列肯定了2709碱性蛋白酶属典型的subtilisin Carlsberg类,同时还表明来源于不同地衣芽孢杆菌菌株的subtilisin Carlsberg存在着若干氨基酸组成上的差异。
- 雷虹洪扬张玉瑛申同健
- 关键词：地衣芽孢杆菌蛋白酶
