梁宏博
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：江南大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 近平滑假丝酵母(R)-羰基还原酶在大肠杆菌中的外泌表达及高效转化(R)-苯基乙二醇
- 2014年
- 克隆了近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis)(R)-羰基还原酶基因rcr,构建胞外表达工程茵Escherichia coli BL21(DE3)/pET20b-rcr,实现了(R)-羰基还原酶在大肠杆菌中高效外泌表达,周质空间和发酵液酶的比活力分别达0.68 U/mg和0.26 U/mg,与大肠杆菌的胞内体系重组酶相比,酶的比活力提高了近两倍。为了更好地促进该重组酶的外分泌于大肠杆菌细胞外,通过添加温和型化学渗透剂甘氨酸,改善细胞壁的透性,(R)-羰基还原酶的活力提高至1.99 U,与添加甘氨酸前相比,酶活力提高了12.4倍,比活提高了4.3倍。浓缩后的发酵液催化2-羟基苯乙酮,产生(R)-苯基乙二醇,产率为88.1%,e.e.值为93.9%。与胞内重组酶相比,产率和光学纯度分别提高了44.4%和15.9%。本研究通过构建(R)-羰基还原酶的大肠杆菌分泌表达体系,大幅度提高了(R)-羰基还原酶的比活和生物转化手性醇的效率。
- 王磊张荣珍徐岩范文来李尧慧梁宏博
- 关键词：分泌表达甘氨酸大肠杆菌近平滑假丝酵母
- (S)-羰基还原酶II于酿酒酵母孢子中表达与功能
- 2015年
- 【目的】使近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis CCTCC M203011)的(S)-羰基还原酶II表达并包埋于酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae AN120)孢子中,实现了重组酶高效催化生产(S)-苯基乙二醇的转化过程。【方法】采用PCR扩增技术,从近平滑假丝酵母基因组中克隆(S)-羰基还原酶II基因,于酿酒酵母AN120中表达,以醋酸钾为唯一碳源诱导培养产生孢子,包埋(S)-羰基还原酶II。以该孢子为生物催化剂,2-羟基苯乙酮为底物进行生物转化反应,经HPLC分析,计算产物的光学纯度和得率。考察了孢子催化转化反应的最适温度和p H值,温度和p H稳定性以及多批次使用性能。【结果】在最适反应温度40℃和p H6.0条件下,10%(W/V)子囊孢子催化6 g/L 2-羟基苯乙酮,产物(S)-苯基乙二醇的光学纯度和得率均高达99%以上。与重组大肠杆菌相比较,重组孢子合成(S)-苯基乙二醇的得率由89.7%提高到99.0%,反应时间由48h缩短为4 h;连续使用10批次后,其催化产物的光学纯度几乎不变,得率保持在85%以上。【结论】该研究首次实现了氧化还原酶在酵母孢子内的异源表达,为手性化合物的高效制备奠定了坚实的研究基础。
- 梁宏博张荣珍徐岩周晓天姜佳伟李尧慧高晓东中西秀树
- 关键词：蛋白表达
