柳玉红
- 作品数：14 被引量：29H指数：4
- 供职机构：南方医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金深圳市宝安区科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人PRL-3基因启动子的克隆及转录因子Snail结合位点的初步鉴定被引量：3
- 2008年
- 促肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)是重要的肿瘤转移相关基因,其转录调控机制一直未被阐明.应用TRED在线分析系统共获得3种可能的人PRL-3基因启动子区域.通过与人基因组序列进行比对,发现其中3号启动子序列距离人PRL-3基因距离最近,位于该基因上游约1kb的DNA区域,与5′端非翻译区域邻接.在线Consite分析系统发现,-500bp至-451bp之间存在Snail结合的核心寡核苷酸序列CACCTG.运用分子克隆的方法获得PRL-3基因启动子2段区域-699bp至299bp及-642bp至-383bp区域,后者具有Snail结合位点核心寡核苷酸序列CACCTG.构建具有荧光素酶报告基因的pGL3载体并检测其启动子活性.-699～299bp区域与-642～-383bp区域的DNA片段在SW480、SW620、CNE2、293A细胞中均具有启动子活性,其中含有Snail结合位点核心寡核苷酸序列CACCTG的短片段活性强于较完整的序列.染色质免疫沉淀结合PCR扩增技术及凝胶迁移阻滞实验确定PRL-3基因启动子区域具有Snail结合位点.研究确定,PRL-3基因的启动子位于转录起始位点上游700bp与下游300bp的DNA区域,PRL-3基因启动子存在转录因子Snail结合元件.
- 周军李建明杨发达柳玉红丁彦青
- 关键词：PRL-3启动子SNAIL转录调控
- 人PRL-3基因真核表达载体构建及相关蛋白生物信息学分析
- 2008年
- 目的克隆人PRL-3基因并构建其真核表达载体,并运用生物信息学方法对PRL-3的相互作用蛋白进行预测分析。方法运用RT-PCR技术,从人大肠癌细胞系SW480细胞中扩增出人PRL-3cDNA,经T-A克隆,构建人PRL-3基因的真核表达载体pcDNA3-PRL-3,通过双酶切鉴定及测序确认,并利用生物信息学方法预测分析其相互作用蛋白。结果成功扩增出人PRL-3全长cDNA,构建pcDNA3-PRL-3真核表达载体,测序结果表明PRL-3全长cDNA与GeneBank中PRL-3序列完全一致。利用模式生物果蝇相互作用蛋白数据库DIP,利用基于保守的蛋白相互作用分析方法,预测认为肌动蛋白家族成员ARP6和功能尚不清楚的小G蛋白家族ARL-3可能是PRL-3的相互作用蛋白,提示PRL-3可能是联系信号分子和细胞骨架系统的重要桥梁,参与构建了一条独特的结直肠癌转移信号途径。结论成功克隆PRL-3基因全长cDNA并构建其真核表达载体,并利用生物信息学方法,初步预测PRL-3的相互作用蛋白,为进一步深入研究PRL-3在大肠癌发生发展中的作用奠定了基础。
- 周军李建明杨发达柳玉红丁彦青
- 关键词：PRL-3蛋白相互作用生物信息学
- 人大肠癌细胞PRL-3基因启动子Snail结合位点的初步研究
- 目的确定转录因子 Snail 可与 PRL-3 基因启动子区结合。方法应用生物信息学方法获得 PRL-3基因启动子区域,并对其潜在的 Snail 结合位点进行预测,进一步应用 Snail 抗体染色质免疫共沉淀技术结合 P...
- 杨发达李建明周军柳玉红丁彦青
- 关键词：启动子
- 文献传递
- 36例异位胰腺临床病理分析被引量：4
- 2019年
- 目的 探讨异位胰腺的临床病理学特征、诊断及鉴别诊断。方法 收集36例异位胰腺患者的临床资料,对病理切片做形态学观察,复习文献进行分析讨论。结果 36例异位胰腺中,男性20例,女性16例,年龄以20~40岁的青壮年为主。临床症状以腹胀、腹痛多见,仅有1例通过内镜检查诊断为异位胰腺,临床与病理诊断符合率仅为5. 6%。异位胰腺发生部位以胃窦部高发,病理分型以II型异位胰腺最为多见。结论 异位胰腺容易被临床误诊漏诊,其确诊需要结合临床与病理组织学特点。
- 邱立柳玉红张同先李晓鸣
- 关键词：异位胰腺临床病理特征
- 应用RNA干扰技术建立PRL-3和CDH22双基因表达抑制的结直肠癌细胞模型被引量：1
- 2009年
- 目的建立稳定干扰PRL-3及CDH-22基因的结直肠癌细胞株,为探讨PRL-3、CDH22及其相互作用在结直肠发生及转移中的作用提供理想的细胞模型。方法以稳定干扰人PRL-3基因大肠癌SW480细胞的克隆为基础,以靶向人CDH22基因的RNAi慢病毒再次感染该细胞株,将经慢病毒二次感染的细胞悬液通过有限稀释法制备细胞单克隆,各细胞克隆扩大培养,荧光定量PCR检测各细胞克隆PRL-3及CDH22mRNA表达水平。结果应用于二次感染的慢病毒悬液的滴度为8×105U/ml。综合分析荧光定量PCR结果,所获得的细胞克隆中1号克隆PRL-3及CDH22mRNA水平的表达显著降低。结论成功建立PRL-3及CDH-22基因稳定敲低的大肠癌细胞克隆,探索同时敲低2个基因的慢病毒RNAi技术。
- 姚娟丁彦青周军柳玉红李建明
- 关键词：PRL-3RNA干扰慢病毒结直肠癌
- SLUG基因可调控性干扰载体的构建及其在鼻咽癌细胞中的表达
- 2019年
- 目的 探讨鼻咽癌细胞中基因表达,构建可调控性相关基因干扰载体,并验证其干扰作用。方法 将高转移人鼻咽癌细胞株5-8F、5-8F-H3细胞进行培养,实时荧光定量RT-PCR检测5-8F及5-8F-H3细胞中SLUG、CBX3、MAD2L1、PLAU、HMGA1基因的表达水平。应用酶切、连接技术构建pSUPERIOR-SLUG干扰载体,采用脂质体转染方法转染5-8F-H3细胞,经嘌呤霉素筛选获得阳性克隆,实时荧光定量RT-PCR检测干扰效果。结果 5-8F及 5-8F-H3细胞中SLUG基因表达水平均明显高于CBX3、MAD2L1、PLAU、HMGA1基因(均P<0.05),相对倍数分别为(11.23±1.78)倍、(1.23±0.17)倍、(1.57±0.27)倍、(6.36±0.38)倍、(3.66±1.14)倍,以SLUG基因倍数最高。所构建的pSUPERIOR-SLUG重组质粒,经酶切鉴定及序列分析证实为所需的目标序列,并成功转染鼻咽癌5-8F-H3细胞。阳性克隆S2-18基因表达水平高于阳性克隆S1-7、S1-9、S2-22基因(P<0.05),干扰率分别为67.42%、72.45%、84.20%、75.61%。结论 SLUG基因在鼻咽癌5-8F-H3中高表达。成功构建了重组质粒——pSUPERIOR-SLUG,并成功转染鼻咽癌5-8F-H3细胞,为后续进一步研究SLUG在鼻咽癌的作用奠定了基础。
- 刘芳柳玉红李晓鸣邹桂华周来勇
- 关键词：鼻咽肿瘤SLUG基因
- A20诱导沉默对鼻咽癌细胞生物学行为的影响被引量：2
- 2018年
- 目的观察A20基因表达下调对鼻咽癌细胞体内外增殖、侵袭及转移能力的影响。方法筛选并建立Tet－on基因表达系统诱导A20沉默的鼻咽癌肝转移亚系5－8F－H3细胞系，实时荧光定量PCR、Western印迹检测干扰效率；CCK8法、平板克隆形成实验检测A20对5－8F－H3增殖能力的影响；流式细胞仪检测细胞周期；侵袭小室检测A20对5－8F－H3侵袭能力的影响；裸鼠皮下成瘤实验和体内转移实验检测经强力霉素（DOX）诱导A20基因表达沉默对5－8F－H3在体内增殖及转移能力的影响。结果可诱导沉默A20的鼻咽癌细胞5－8F－H3/A20－shRNA构建成功。5－8F－H3/A20－shRNA经DOX诱导后，A20基因mRNA及蛋白的表达均下调（均P〈0.01）；CCK8法（F＝18.542，P＝0.003）、平板克隆形成实验（F＝40.080，P〈0.001）及流式细胞术检测实验（F＝7.398，P＝0.024）结果显示A20基因表达下调明显抑制5－8F－H3在体外增殖能力；侵袭小室检测结果显示A20基因表达下调抑制5－8F－H3在体外侵袭能力（F＝26.157，P〈0.001）。裸鼠皮下成瘤实验和体内转移实验结果显示A20基因表达下调明显抑制5－8F－H3在裸鼠体内的成瘤和转移能力。结论A20与鼻咽癌多种恶性生物学行为密切相关，有望成为鼻咽癌潜在治疗靶点。
- 刘芳谢卫兵周来勇柳玉红方唯意姚开泰
- 关键词：鼻咽肿瘤A20基因基因表达调控肿瘤侵润
- PRL-3基因的克隆及其原核表达载体的构建表达
- 2007年
- 目的克隆人PRL-3基因并构建其原核表达载体。方法设计PRL-3特异性引物,提取人大肠癌细胞系SW480总RNA,用RT-PCR方法获取人PRL-3cDNA。经T-A克隆,通过双酶切鉴定及测序确认后,构建人PRL-3基因的原核表达载体pGEX-4T-1-PRL-3。结果成功扩增出人PRL-3全长cDNA,并构建pGEX-4T-1-PRL-3原核表达载体,测序结果表明PRL-3全长cDNA与GenBank中PRL-3序列完全一致,SDS-PAGE胶分析表明,在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达了重组蛋白。结论获得人PRL-3基因全长cDNA并构建其原核表达载体,使其在大肠杆菌中获得了高效表达,为深入研究PRL-3基因在大肠癌发生发展中的作用奠定了基础。
- 周军李建明柳玉红丁彦青
- 关键词：大肠癌PRL-3基因克隆原核表达
- 人大肠癌细胞PRL-3基因启动子Snail结合位点的初步研究被引量：6
- 2007年
- 目的确定转录因子Snail可与PRL-3基因启动子区结合。方法应用生物信息学方法获得PRL-3基因启动子区域,并对其潜在的Snail结合位点进行预测,进一步应用Snail抗体染色质免疫共沉淀技术结合PCR技术检测PRL-3基因启动子序列,以确定转录因子Snail可与PRL-3基因启动子结合。结果应用TRED在线分析系统确定PRL-3基因的启动子区域位于PRL-3基因上游-700bp至299bp之间,在该启动子区域存在多个转录因子如Snail、n-MYC、ARNT、E74A、NF-kappaB、NRF-2及AML-1等的结合位点;在启动子区域的-500bp至-451bp之间存在Snail结合的核心寡核苷酸序列CACCTG,在其他多个区域存在多个类似这一核心序列的DNA序列;应用染色质免疫沉淀技术结合PCR扩增的方法对人大肠癌细胞株SW480细胞进行分析,发现Snail可与人大肠癌细胞株SW480PRL-3基因的启动子区域的DNA片断结合。结论转录因子Snail可与人大肠癌细胞SW480PRL-3基因启动子结合,参与PRL-3基因的调控。
- 杨发达李建明周军柳玉红丁彦青
- 关键词：SNAIL
- PRL-3对结直肠癌钙粘附蛋白相关信号通路的调节
- 研究背景和目的
结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一,近十年来,结直肠癌在我国的发病率有逐年上升的趋势。转移是影响患者治疗效果和导致患者死亡的主要原因。阐明结直肠癌转移相关的分子机制及寻找预防和治疗的有效途径是目前结直肠...
- 柳玉红
- 关键词：PRL-3结直肠癌钙粘蛋白信号途径
- 文献传递
