杨文双
- 作品数：10 被引量：52H指数：5
- 供职机构：北京大学第一医院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人肌酸激酶MM同工酶在大肠杆菌中的高效可溶性表达及纯化研究被引量：6
- 2006年
- 目的构建肌酸激酶MM同工酶原核表达系统,纯化重组酶蛋白并对其稳定性进行研究,为其作为参考品或校准品应用于临床奠定基础。方法提取胎儿心肌组织总RNA,反转录扩增人肌酸激酶M亚基基因,构建pET-15b-CK、E.coliBL21(DE3)pLysS原核表达系统,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达。利用重组蛋白的组氨酸标签(H is-tag)进行金属螯合亲和层析纯化,观察重组酶在不同保存条件下的稳定性。结果重组质粒经酶切及测序鉴定与预期相符,诱导表达后细菌裂解液上清酶活性可达280 000 U/L,纯化后SDS-PAGE在分子量45 000处显示单一蛋白条带,在-20℃加入70g/L BSA、1 mmol/L DTT、2 mmol/L EDTA的PBS(pH 7.4)保存体系中,重组酶活性在30 d观察期内基本不变。结论成功表达并纯化了人肌酸激酶MM同工酶,重组酶稳定性良好,初步具备了作为基因工程人源酶校准品的基本特点。
- 黄燕杨文双徐国宾夏铁安
- 关键词：校准品金属螯合亲和层析稳定性
- 单中心就诊2~18岁儿童胆固醇水平异常发生率及病因分析
- 2022年
- 目的:探讨单中心就诊患儿血浆胆固醇水平异常情况及分布规律。方法:回顾性分析2016年6月至2019年6月在北京大学第一医院有胆固醇检测结果的2~18岁儿童血浆胆固醇水平。总胆固醇(total cholesterol,TC)采用胆固醇氧化酶法,低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)采用清除法检测,计数资料比较应用卡方检验。结果:调查有效数据11829例,其中男性7087例,女性4742例。TC升高儿童1822例(15.4%),LDL-C升高儿童1371例(11.6%),HDL-C降低儿童2798例(23.7%),胆固醇水平异常儿童总和4427例(37.4%)。非常见继发性高脂血症病因就诊儿童7835人,其中TC升高儿童731例(9.3%),LDL-C升高儿童561例(7.2%),HDL-C降低儿童1886例(24.1%),胆固醇水平异常儿童总和2576例(32.9%)。不同疾病就诊儿童中,胆固醇异常发生率差异有统计学意义(P<0.05)。TC升高及LDL-C升高发生率的前三位主要就诊原因均分别为“血脂异常”“泌尿系统疾病”“营养性疾病”。除小儿内科外,其他科室送检的1257例患儿血脂检测样本中,300例存在胆固醇水平异常(23.8%),其中高胆固醇血症患儿70例(5.6%),高低密度脂蛋白血症患儿44例(3.5%),低高密度脂蛋白血症患儿224例(17.8%)。在非常见继发性高脂血症病因就诊儿童中,因LDL-C≥140 mg/dL(3.6 mmol/L)需要进一步排除家族性高胆固醇血症的患儿共365例,占该部分患儿的4.6%。结论:就诊儿童胆固醇异常发生率高,在原发病诊治的同时加强胆固醇管理不仅有助于控制继发性高胆固醇血症,也为及时发现家族性高胆固醇血症提供可能。
- 闫辉逄璐李雪迎杨文双蒋世菊刘平闫存玲
- 关键词：高胆固醇血症血脂异常儿童
- 单中心2864例孕24至28周妊娠妇女口服75g无水葡萄糖耐量试验结果分析被引量：11
- 2012年
- 目的观察孕24—28周产前检查妇女口服75g无水葡萄糖耐量试验（0GTT）结果，分析应用2004年美国糖尿病协会（ADA）、2010国际妊娠合并糖尿病研究组织（IADPSG）、2005年第6版妇产科学教材推荐的3种妊娠糖尿病诊断时的诊断率。方法2864例入选者来自2011年4至11月期间就诊于北京大学第一医院产科门诊全部孕24～28周产前检查妇女。口服75g无水葡萄糖进行OGTF实验，分别于空腹，服用葡萄糖后1h和2h采集静脉血。静脉血以柠檬酸一氟化钠抗凝。血清葡萄糖测定采用具有溯源性的葡萄糖氧化酶法进行测定。未观察服用葡萄糖后3h血糖，本研究只读取空腹、OGT？1h、2h3点血浆葡萄糖水平，根据2004版ADA、2010年IADPSG和第6版妇产科学教材标准计算诊断率，同一标准不同年龄间诊断率的比较采用行×列表卡方检验，同一年龄组不同标准间诊断率的比较采用配对卡方检验。结果采用IADPSG标准，GDM诊断率高达20．6％，较2004版ADA和第6版妇产科学教材标准诊断率分别升高307％和199％。如将IADPSG标准的血糖异常个数改为≥2个，阳性例数下降到227人，GDM诊断率骤然下降到7．93％，与2004版ADA标准诊断阳性率（6．8％）相似。结论更严格的IADPSG标准使得GDM诊断率显著升高，IADPSG推荐的新标准与2004版ADA老标准间GDM诊断率的巨大差异主要源于诊断标准中超过血糖阈值的个数从2个变成1个所致。
- 常乐江亚平蒋世菊杨红云李海霞王学晶杨文双徐国宾
- 关键词：葡糖耐量试验妊娠中期流行病学研究
- 三种统计学方法在建立妊娠期凝血功能指标参考区间中的应用被引量：7
- 2020年
- 目的比较三种统计学方法在间接法建立参考区间中的实用价值。方法方法学评价。调取2017年1月至2019年12月在北京大学第一医院门诊进行产前检查的妊娠期妇女凝血指标,共收集32401例孕妇数据,其中早孕组11151例,中孕组4872例,晚孕组16378例。对凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原(FIB)、D-二聚体(D-D)和纤维蛋白(原)降解产物(FDP)的检测结果进行分析,判断各孕龄组内是否需要根据年龄进行参考区间分组。PT和APTT在三个孕期均需要根据年龄进行分组,FIB和TT在晚孕期、D-D在早孕期需要根据年龄分组。采用非参数法、Hoffmann法和Q-Q图法计算各指标的参考区间。于2019年10月至2020年1月在北京大学第一医院妇儿门诊招募健康孕妇42例作为参考人群,验证建立的参考区间并比较参考人群检测结果在3种方法计算得出的参考区间外的百分比。结果35岁以下早孕期PT、APTT、FIB、TT的参考范围分别为(10.44~13.11)s、(25.29~35.88)s、(2.61~4.64)g/L和(11.53~15.58)s6项指标水平随孕期进展产生显著差异,PT和APTT在3个孕期内均需要根据年龄进行分组,FIB和TT在晚孕期、D-D在早孕期需要根据年龄分组。数据量较大时,Hoffmann法所建立的参考区间和非参数法较接近,Q-Q图法建立的参考区间略宽于Hoffmann法。数据量较小时,应用Hoffmann法和Q-Q图法计算的参考区间更为可靠。应用Hoffmann法计算的。结论妊娠期凝血功能指标需要根据孕期及年龄分组,基于Hoffmann法的间接法可以作为直接法的替代方法。
- 赵婧晨杨文双蒋世菊邢莹苗林子屈晨雪
- 关键词：妊娠血液凝固试验参考值统计学非参数
- 尿蛋白与肌酐比值的测定及临床应用的初步评价被引量：15
- 2006年
- 目的通过观察24 h尿蛋白定量(24UP)与随机尿和晨尿蛋白/肌酐比值(UP/Ugcr)的相关性,研究随机尿和晨尿UP/Ugcr代替24UP的可行性。方法选取肾内科住院病人119例,对其24UP与随机尿及晨尿UP/Ugcr进行相关分析。采用ROC曲线分析确定随机尿UP/Ugcr相对于24UP为1 g及3 g的诊断界点。尿蛋白采用改良双缩脲法进行测定,血尿肌酐采用Jaffe法测定。结果按肾功能分组分析显示,肌酐清除率(Ccr)<10 ml/min时,随机尿和晨尿UP/Ugcr比值与24UP两者不相关,Ccr>10 ml/min时高度相关。随机尿UP/Ugcr相应24UP为1 g及3 g的诊断界点分别为0.94 g/gcr及2.61 g/gcr时敏感性分别为91.6%和96.2%,特异性分别为85.7%和91.1%。随机尿和晨尿UP/Ugcr之间无统计学差异,相关性好。结论Ccr>10 ml/min的肾脏病患者,可以用随机或晨尿Up/Ugcr代替24 Up用于监测尿蛋白排泄的变化。当Ccr<10 ml/min时,两者相关性较差,无临床应用价值。
- 焦莉莉杨文双李海霞徐国宾夏铁安
- 关键词：尿蛋白肌酐清除率尿蛋白与尿肌酐比值
- 人肌酸激酶MM同工酶在大肠杆菌中的高效可溶性表达及纯化研究
- 目的: 构建肌酸激酶MM同工酶原核表达系统,纯化重组酶蛋白并对其稳定性进行研究,为其作为参考品或校准品应用于临床奠定基础.
方法: 提取胎儿心肌组织总RNA,反转录扩增人肌酸激酶M亚基基因,构建pET-15b-C...
- 黄燕杨文双徐国宾夏铁安
- 关键词：可溶性表达重组酶大肠杆菌
- 文献传递
- SYSMEX XE-5000全自动血液分析仪在儿童脑脊液常规检测中的应用被引量：2
- 2016年
- 目的探讨SYSMEX XE-5000全自动血液分析仪(简称XE-5000)在儿童脑脊液常规检测中的应用价值。方法选取194份住院患儿的脑脊液标本,采用XE-5000体液模式进行脑脊液常规检测,同时行人工显微镜镜检,比较仪器法与人工镜检法检测结果的符合性。结果当白细胞(WBC)计数≥30个/μL时,2种方法差异无统计学意义(P>0.05)。当WBC计数<30个/μL时,2种方法差异有统计学意义(P<0.05)。当WBC计数≥10个/μL时,2种方法之间单个核细胞计数及多个核细胞计数均具有良好的相关性(P<0.01)。当红细胞(RBC)计数>1 000个/μL时,2种方法具有良好的相关性(r=0.98,P<0.01)。结论应用XE-5000体液模式检测儿童脑脊液,在WBC总数≥30个/μL时具有较好的应用价值,可代替人工镜检。
- 孙奎霞杨文双蒋世菊
- 关键词：细胞计数脑脊液儿童SYSMEX
- 健康成人与肝脏疾病患者血浆肉毒碱的检测被引量：3
- 2007年
- 目的建立成人总肉毒碱(TC)和游离肉毒碱(FC)的参考范围;检测肝病患者血浆TC和FC水平,并探讨其临床意义。方法采用循环酶法测定35例慢性病毒性肝炎、30例急性病毒性肝炎和30例肝硬化患者血浆TC和FC水平,同时测定200名健康成年人血浆TC和FC水平作为对照。结果健康成人TC为(56.5±9.6)μmol/L、FC为(46.6±8.2)μmol/L,其中男性TC为(57.5±8.5)μmol/L,女性TC为(55.6±10.5)μmol/L,两者之间差异无统计学意义(P>0.05),FC男性为(48.4±7.2)μmol/L,水平略高于女性(44.7±8.9)μmol/L。慢性病毒性肝炎患者的TC为(46.9±14.8)μmol/L、FC为(36.3±9.8)μmol/L,急性病毒性肝炎患者的TC为(44.4±14.2)μmol/L、FC为(35.4±13.0)μmol/L,均低于健康成年人(P<0.01);肝硬化患者TC和FC水平与健康组差异无统计学意义(P>0.05)。结论TC水平男女之间差异无统计学意义,FC男性水平略高于女性;女性肉毒碱有随年龄增加的趋势。肝病患者可发生肉毒碱代谢异常。
- 焦莉莉杨文双蔺小红杨瑞锋徐国宾
- 关键词：肉毒碱肝病酶循环法
- 健康成人与肝脏瘁病患者血浆肉毒碱的检测
- 本文建立了成人总肉毒碱(TC)和游离肉毒碱(FC)的参考范围；检测肝病患者血浆TC和FC水平，并探讨了其临床意义。
- 焦莉莉杨文双蔺小红杨瑞锋徐国宾
- 关键词：肉毒碱肝病酶循环法
- ADVIA 120/2120及多种类血细胞分析仪复检规则的建立和评价被引量：8
- 2010年
- 目的 建立ADVIA 120/2120血细胞分析仪复检规则和不同系列血细胞分析仪的通用复检规则.方法 应用ADVIA120/2120血细胞分析仪检测2400份标本（含恶性血液病标本6份）,其中1200份标本同时应用Sysmex XE-2100和Beckman-Coulter LH750血细胞分析仪检测,并均进行血涂片显微镜检查（镜检）,对检测结果进行统计分析,参考国际血细胞分析仪复检规则并进行适当调整建立新的复检规则.随机选择300份标本验证新建立的复检规则.结果 根据国际血细胞分析仪复检规则和我国血液学专家制定的涂片镜检阳性标准进行统计分析,ADVIA 120/2120血细胞分析仪检测的2400份标本真阳性率22.1%（530份）,假阳性率28.1%（675份）,真阴性率44.3%（1063份）,假阴性率5.5%（132份）,复检率50.2%（1205份）,假阴性率超出最大可接受限（5.0%）.修改涂片镜检阳性标准（提高中性杆状核粒细胞、嗜酸粒细胞、嗜碱粒细胞和单核细胞百分比）并对国际血细胞分析仪复检规则进行适当调整后建立新的复检规则,重新进行统计分析,真阳性率为15.5%（371份）,假阳性率18.7%（449份）,真阴性率61.6%（1479份）,假阴性率4.2%（101份）,复检率34.2%（821份）,恶性血液病标本无漏检.在ADVIA 120/2120血细胞分析仪复检规则的基础上添加Sysmex XE-2100和Beckman-Coulter LH750血细胞分析仪特异参数后提出了通用复检规则,统计分析3种血细胞分析仪同时测定的1200份标本,假阴性率分别为4.3%、4.6%和4.6%,假阳性率分别为14.7%、17.5%和12.7%,均未漏检恶性血液病标本.验证试验中3种仪器的假阴性率分别为3.8%、4.3%和4.0%.结论 建立了适用于大型综合性医院ADVIA 120/2120血细胞分析仪临床应用的复检规则和适用于3种不同系列血细胞分析仪的通用复检规则.
- 邢莹王建中普程伟尚柯闫振林白玉柱杨文双李涛张时民
- 关键词：血细胞计数自动化
