杜小弋
- 作品数：7 被引量：7H指数：1
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- 脂氧素受体激动剂BML-111对巨细胞病毒感染后巨噬细胞表达IFN-β及IE86 mRNA的影响被引量：1
- 2014年
- 目的:观察脂氧素受体激动剂BML-111对巨细胞病毒(HCMV)感染后巨噬细胞表达IFN-β以及IE86 mRNA的影响。方法:用HCMV感染巨噬细胞(MOI=0.5),设HCMV组、对照组、HCMV+BML-111组及HCMV+MP组,在感染后0、1、2、4、8、12 h收集细胞,用RT-PCR法检测IFN-β及IE86 mRNA表达水平。结果:与HCMV组相比,HCMV+BML-111组IFN-βmRNA升高(P<0.05),HCMV+MP组IFN-βmRNA下降;与HCMV组相比,HCMV+BML-111组IE86 mRNA无明显差异(P>0.05),HCMV+MP组IE86 mRNA升高(P<0.05)。结论:BML-111在HCMV感染早期通过促进IFN-βmRNA表达发挥抗病毒作用。
- 陈晓红舒赛男刘兴楼王慧张菊杜小弋李革方峰
- 关键词：巨噬细胞脂氧素
- 酵母双杂交技术筛选小鼠脑cDNA文库中鼠巨细胞病毒即刻早期蛋白M122相互作用蛋白的研究被引量：1
- 2010年
- 目的 应用酵母双杂交技术筛选小鼠脑cDNA文库中与鼠巨细胞病毒即刻早期蛋白M122相互作用的宿主因子,为进一步研究巨细胞病毒的致病机制奠定实验基础.方法将诱饵质粒pGBKT7-M122转化酵母菌AH109,Western blot检测诱饵蛋白在酵母细胞中的表达.阳性重组AH109菌株与小鼠脑cDNA文库进行配合,在色氨酸、亮氨酸、组氨酸和腺嘌呤缺陷培养基（SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade）和铺有Ⅹ-α-gal的SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade平板上进行筛选,提取阳性酵母菌质粒,转化大肠杆菌后提取质粒测序,对测序结果进行序列比对和分析.将阳性文库质粒与诱饵质粒共同转化酵母AH109感受态细胞,重新验证其在酵母中的相互作用,同时阳性文库质粒与空载体pGBKT7亦被用同样的方法转入AH109感受态细胞,以排除阳性文库质粒的自激活作用.结果筛选出与M122蛋白相互作用的21种已知基因编码的蛋白质和3种未知基因编码的蛋白,其中21种已知蛋白分别为：突触融合蛋白8（syntaxin 8,Stx8）、磷酸葡萄糖变位酶2（phosphoglucomutase 2,Pgm2）、Shaker型电压依赖性钾通道的β1亚单位（potassium voltage-gated channel,shaker-related subfamily,beta member 1,Kcnab1）、19型胶原蛋白（collagen,type ⅪⅩ,alpha 1,Col19a1）、古蛋白1（archain 1,Arcn1）、胞嘧啶核苷酸激酶（cytidylate kinase,Cmpk）、热休克蛋白DnaJ同系物A亚家族成员1[DnaJ（Hsp40）homolog,subfamily A,member 1,Dnaja1]、Na＋、K＋ATP转运酶β3亚单位（ATPase,Na＋/K＋ transporting,beta 3 polypeptide,Atp1b3）、SH3结构域GRB2样相互作用蛋白1[SH3-domain GRB2-like（endophilin）interacting protein 1,Sgip1]、锚蛋白重复域17（ankyrin repeat domain 17,Ankrd17）、无义介导的mRNA 降解因子Smg-7同系物（Smg-7 homolog,nonsense mediated mRNA decay factor,Smg7）、精子相关抗原9（sperm associated antigen 9,Spag9）、FK506结合蛋白1A（FK506 binding protein 1a,Fkbp1a）、MYST组蛋白乙酰转�
- 王慧周玉峰舒赛男罗丹田佳张慧娟杜小弋方峰
- 关键词：酵母双杂交系统蛋白质相互作用
- 脂氧素受体激动剂对巨细胞病毒感染巨噬细胞的免疫负调节被引量：5
- 2013年
- 背景:脂氧素可以抑制炎症细胞、内皮细胞、小鼠脾脏树突状细胞等合成细胞因子,还可以抑制炎性细胞因子对细胞的生物效应。目的:分析脂氧素受体激动剂BML-111对人巨细胞病毒感染THP-1源巨噬细胞的免疫调节作用。方法:用人巨细胞病毒AD169毒株感染THP-1源巨噬细胞(MOI=0.5),细胞培养后设立对照组、人巨细胞病毒感染组及人巨细胞病毒+BML-111组。在感染后0,1,2,4,12,24,48,72h收集各组细胞培养上清液,以ELISA检测各组细胞因子的表达水平;RT-PCR检测各指标mRNA的表达强度;Western blot检测感染4h的细胞核内p65亚基蛋白表达。结果与结论:与对照组相比,其他两组各细胞因子蛋白及mRNA表达明显升高(P<0.05)。与人巨细胞病毒感染组相比,人巨细胞病毒+BML-111组白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α显著降低,转化生长因子β显著升高(P<0.05),白细胞介素10差异无显著性意义(P>0.05);人巨细胞病毒+BML-111组各细胞因子mRNA均明显降低(P<0.05)。与对照组相比,其他两组细胞核内NF-κBp65亚基蛋白浓度明显升高(P<0.05);人巨细胞病毒+BML-111组显著低于人巨细胞病毒感染组(P<0.05)。说明BML-111可能通过抑制NF-κB的p65亚基核转位,减少白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α的表达,促进转化生长因子β的表达,从而对人巨细胞病毒感染的THP-1源巨噬细胞发挥其免疫负调节作用。
- 陈晓红舒赛男刘兴楼王慧张菊杜小弋李革方峰
- 关键词：器官移植巨细胞病毒巨噬细胞脂氧素
- 脂氧素受体激动剂对巨细胞病毒复制增殖的影响
- 2014年
- 背景:脂氧素的抗炎及保护效应已经在多种免疫相关疾病模型中被验证,课题组前期研究结果亦显示,脂氧素受体激动剂BML-111对巨细胞病毒诱导的免疫损伤有负调节作用,那么,它对病毒的复制将产生怎样的影响呢?目的:观察脂氧素受体激动剂BML-111对人巨细胞病毒在THP-1源巨噬细胞及人胚肺成纤维细胞中复制增殖的影响。方法:用HCMV AD169毒株感染THP-1源巨噬细胞(MOI=0.5),设立模拟感染组、人巨细胞病毒感染组及人巨细胞病毒+BML-111组,BML-111的终浓度为100 nmol/L;于感染后0,1,2,4,12,24,36,48 h收集各组细胞,用RT-PCR法检测细胞中IE86和pp65 mRNA的水平;人巨细胞病毒感染人胚肺成纤维细胞(MOI=0.1),设立人巨细胞病毒感染组与人巨细胞病毒+BML-111组,逐日光镜观察人胚肺成纤维细胞病变并计数其比率;蚀斑法测定人胚肺成纤维细胞内感染性人巨细胞病毒滴度。结果与结论:人巨细胞病毒感染巨噬细胞后,与模拟感染组相比,人巨细胞病毒感染组和人巨细胞病毒+BML-111组IE86 mRNA及pp65 mRNA表达明显升高;与人巨细胞病毒感染组相比,人巨细胞病毒+BML-111组IE86 mRNA及pp65 mRNA在细胞感染早期(4 h内)表达明显升高,但在感染中晚期(24-72 h),pp65 mRNA的表达明显降低。人巨细胞病毒感染人胚肺成纤维细胞后,与人巨细胞病毒感染组相比,人巨细胞病毒+BML-111组细胞提前2 d达到100%细胞病变;感染性病毒滴度提前2 d达到峰值,但两组病毒滴度峰值差异无显著性意义。结果显示BML-111在感染早期加快人巨细胞病毒在细胞内的复制速度,在感染晚期抑制pp65基因表达;BML-111在体外对人巨细胞病毒的感染性病毒增殖量无影响。
- 陈晓红舒赛男刘兴楼王慧张菊杜小弋李革方峰
- 关键词：巨细胞病毒胚肺成纤维细胞脂氧素病毒复制
- 小鼠MCMV先天感染模型的构建及神经系统感染状况的观察
- 2012年
- 目的建立小鼠巨细胞病毒（MCMV）先天感染模型，并观察其脑组织的病理变化及感染状况。方法取孕11～13．5d的BALB／c鼠，模型组羊膜腔微量接种K181毒株（病毒量1×10^3PFU），对照组注射DMEM培养液。单独饲养5d后处死孕鼠，剖宫取出胎鼠，麻醉处死，取胎鼠脑组织制作冰冻切片。胎脑组织切片常规HE染色，光镜下观察病理学变化；采用免疫酶组化及免疫荧光法检测脑组织中的MCMV早期抗原。结果感染组胎鼠存活率为71．9％。与对照组相比，羊膜腔内接种MCMV病毒对胎鼠存活率、吸收胎率、死胎率及胎鼠头部重量无明显影响，但可致胎鼠体重降低。感染组胎鼠脑组织出现明显的病理变化。在宫内感染组，免疫酶学组化法发现脑室区、脑室管膜下区、大脑皮质和海马区可见病毒感染细胞；免疫荧光法观察到的主要感染部位与免疫酶组化法基本一致。结论通过羊膜腔内注射MCMV病毒成功建立MCMV先天感染小鼠模型，为研究MCMV先天感染致脑发育异常机制提供合适的整体研究模型。
- 杜小弋周玉峰刘兴楼舒赛男方峰
- 关键词：巨细胞病毒动物模型先天感染神经系统脑组织
- 肾素前体受体在阿霉素所致心力衰竭中的作用及穿心莲内酯干预的研究
- 阿霉素(DOX)是一种高效的蒽环类化疗药物,在临床上广泛用于急性白血病、乳腺癌、淋巴癌等癌症的治疗。然而,DOX可呈剂量依赖性引起心力衰竭(Heart failure,HF)。当DOX的累积剂量增加到700 mg/m时,...
- 杜小弋
- 关键词：心力衰竭阿霉素RAC1NOX4穿心莲内酯
- 小鼠MCMV先天感染模型的构建及神经系统感染状况的观察
- 目的:
建立小鼠巨细胞病毒（MCMV）先天感染模型，并观察其脑组织的病理变化及感染状况。
方法:
1）MCMV毒株制备及感染性滴度的测定：剖宫取出孕中晚期BALB/c 胎鼠，制备鼠胚成纤维细胞（MEF）...
- 杜小弋
- 关键词：巨细胞病毒神经系统脑发育异常
