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曾辉: 作品数：116 被引量：505H指数：11; 供职机构：北京地坛医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金中国中医科学院自主选题项目更多>>; 相关领域：医药卫生文化科学农业科学生物学更多>>

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蝙蝠来源的重症急性呼吸综合征样冠状病毒WIV1刺突蛋白利用浣熊狗血管紧张素转换酶Ⅱ受体侵入细胞能力的研究被引量：11: 2019年; 目的研究蝙蝠来源的重症急性呼吸综合征(SARS)样冠状病毒WIV1刺突蛋白利用浣熊狗血管紧张素转换酶Ⅱ(ACE2)受体侵入细胞的能力,并探究SARS样冠状病毒WIV1潜在的跨宿主传播风险。方法构建来自浣熊狗、果子狸、中华菊头蝠和人等不同动物来源的ACE2表达质粒,转染至293T细胞并利用免疫印迹方法检测其在293T细胞中的表达水平;建立SARS冠状病毒(Tor2株系)及蝙蝠SARS样冠状病毒(WIV1株系)假病毒感染系统,并进行假病毒感染实验;利用假病毒感染系统及荧光素酶报告基因检测WIV1刺突蛋白对浣熊狗等不同动物来源ACE2受体利用能力;构建跨膜丝氨酸蛋白酶2(TMPRSS2)质粒,并转染至T Rex 293细胞,借助假病毒感染系统检测TMPRSS2对WIV1侵入能力的影响。结果本研究所获赠及构建的不同动物来源的ACE2质粒可经瞬时转染至细胞进行表达;与pc DNA3.1载体相比,浣熊狗、中华菊头蝠、果子狸和人的ACE2均可使蝙蝠SARS样冠状病毒WIV1侵入细胞的能力增加上万倍,上述ACE2组与载体组的荧光素酶活性差异均具有统计学意义(t=27.744、P<0.001,t=18.740、P<0.001,t=32.297、P<0.001,t=15.902、P<0.001);与TMPRSS2阴性组相比,TMPRSS2在靶细胞的表达可使WIV1假病毒的感染能力增加10倍以上,两组荧光素酶活性差异具有统计学意义(t=29.460、P<0.001)。结论蝙蝠SARS样冠状病毒WIV1的刺突蛋白除了利用人类、果子狸及中华菊头蝠的ACE2受体感染细胞,还可利用浣熊狗的ACE2受体侵入细胞,且TMPRSS2可显著促进其侵入能力,提示WIV1可能存在多种跨宿主传播的风险。; 郑梅郑双丽陈丹瑛蒋栋曾辉赵学森

免疫磁珠分选两步法纯化原代小胶质细胞被引量：2: 2012年; 目的神经系统感染研究需获得纯度高、细胞生物学状态接近体内的小胶质细胞。既往分离纯化方法不能满足研究需要,需建立新的高效纯化方法。方法获得小鼠全脑单细胞悬液后,应用磁珠分选阳选法,经过两步分选获得小胶质细胞。用流式细胞仪检测小胶质细胞的纯度,瑞氏-姬姆萨染色观察细胞形态,采用7-AAD染色鉴定分选后细胞的活性。结果应用免疫磁珠分选一步法可以获得纯度达(59.98±13.61)%的小胶质细胞;两步法进一步将细胞纯度提高至(97.62±1.35)%。该方法所获得的小胶质细胞活性良好,形态正常。结论免疫磁珠分选两步法能够稳定地获得高纯度的小胶质细胞,对小胶质细胞的活性和形态无显著影响,可用于后续中枢神经系统急性感染的体外研究。; 孙珊珊王蓓蓓鞠莉莉曾辉徐群渊; 关键词：小胶质细胞磁珠分选

单核-巨噬细胞亚型与动脉粥样硬化被引量：9: 2010年; 动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)是全球的常见病、多发病,极易导致冠心病、脑卒中等多种疾病,严重地危害人类身体健康和生存质量,已成为心血管领域的关注热点。目前对As的认识已由代谢性疾病向免疫性疾病转变,认为As是一种慢性血管炎症性疾病,使得对As治疗从单纯降脂扩大为对免疫损伤的控制和预防。; 马雅銮蔺洁秦明照曾辉; 关键词：巨噬细胞外周血单核细胞动脉粥样硬化免疫损伤炎性细胞因子炎症性疾病

口腔黏膜渗出液快速诊断试剂与血清ELISA试剂检测不同人群HIV-1抗体的评价被引量：6: 2011年; 目的探讨口腔黏膜渗出液（OMT）快速诊断试剂与酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂检测不同人群HIV—1抗体的-致性。方法对已经过生物梅里埃ELISA试剂检测血清HIV-1抗体阳性并经蛋白印迹（WB）试验确诊的H1V感染者200例（HIV阳性组），和经过生物梅里埃ELISA试剂检测血清HIV-1抗体阴性的健康人群600例（HIV阴性组）采集OMT标本，使用OMT快速诊断试剂进行HIV-1抗体检测。同时评价口腔黏膜渗出液快速诊断试剂在实际应用中的影响因素。结果HIV阳性组200例中198例OMT标本检测为阳性，其中192例（96％）检测线清楚，易做阳性结果判断。4例（2％）“模糊”，2例（1％）“很模糊”，需经专业人员判断；2例（1％）检测线“看不见”，为阴性。HIV阴性组600例OMT标本检测HIV抗体全为阴性。结论口腔黏膜渗出液快速诊断试剂与生物梅里埃血清ELISA诊断试剂检测HIV-1抗体相比，在HIV阳性标本中检测一致性为99．0％，在HIV阴性标本中检测一致性为100％，总体-致性为99．75％。; 吴焱王克荣韩晶赵红心曾辉徐克沂刘彦春闫会文李兴旺伦文辉; 关键词：HIV抗体口腔黏膜酶联免疫吸附测定

非诺贝特和阿托伐他汀对ApoE基因敲除小鼠外周血单核细胞TLR4表达的影响被引量：2: 2008年; 目的探讨非诺贝特和阿托伐他汀对动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)模型小鼠单核细胞Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)表达的影响。方法apoE基因缺陷(apoE deficient,apoE-/-)小鼠被随机分为3组,分别为阿托伐他汀干预组、非诺贝特干预组、模型组,每组10只。前两组分别给予阿托伐他汀10mg.kg-1.d-1和非诺贝特100mg.kg-1.d-1,对照组给予等量蒸馏水灌胃。8周后,测定血清低密度脂蛋白(LDL)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)水平,并应用流式细胞仪检测各组小鼠外周血单核细胞表面TLR4的表达。结果各组小鼠血脂水平无统计学差异。与单纯高脂餐喂养组相比,非诺贝特干预组小鼠TLR4表达明显降低(P=0.02);阿托伐他汀干预组TLR4表达轻度升高,但无统计学意义。结论非诺贝特可降低TLR4表达,可能参与AS进程中介导的天然免疫反应。; 耿小勇韩俊燕朱柳园刘舒秦明照曾辉; 关键词：TOLL样受体非诺贝特阿托伐他汀

基于多色流式降维聚类方法的自发性细菌性腹膜炎患者T淋巴细胞亚群分析: 2023年; 目的建立多色流式降维聚类分析方法,检测自发性细菌性腹膜炎(SBP)患者外周血和腹水中T细胞亚群,探讨SBP患者外周以及腹腔局部T淋巴细胞的表面标志物表达差异。方法选取2021年12月至2022年1月就诊于首都医科大学附属北京地坛医院的4例SBP患者为研究对象。根据多色流式荧光搭配原则,初步确立检测外周血及腹水T淋巴细胞亚群比例的多色流式配色方案。利用健康对照者外周血单个核细胞(PBMCs)调节最适检测电压及荧光补偿;设定条件后,检测4例SBP水样本。建立多色流式降维聚类分析方案以检测SBP患者外周血和腹水中T淋巴细胞的差异。结果采用统一流形逼近和投影(UMAP)结合FlowSOM插件的多色流式降维分析法将CD4^(+)T细胞和CD8^(+)T细胞均分为12个细胞群。该降维聚类方法通过可视化UMAP图定位,并结合统计学分析初步发现,与外周血相比,SBP患者腹水中CD69^(+)PD-1^(+)CD4^(+)T_(EM)(t=3.427、P=0.0416)以及CD25-TIGIT-CD4^(+)T_(EM)(t=3.203、P=0.0492)比例较高,差异有统计学意义。结论多色流式降维聚类分析法用于检测SBP患者外周血及腹水样本中T淋巴细胞分群及功能,具有快速、准确、多维度并且可视化强的优点。; 王锃涛王宪波曹钰郝禹韩俊燕曾辉; 关键词：自发性细菌性腹膜炎 T细胞亚群

建立体外诱导和检测中性粒细胞胞外诱捕网的方法被引量：7: 2015年; 目的建立体外诱导和检测中性粒细胞胞外诱捕网的方法,旨在研究中性粒细胞胞外诱捕网(NET)产生和调节的机制。方法分离正常人外周血中性粒细胞,通过内毒素(LPS)和白细胞介素-8(IL-8)体外诱导NET产生。采用免疫荧光染色和激光共聚焦显微成像定性评价NET生成;采用Pico Green染料定量检测细胞上清游离DNA,反映NET生成量。结果 LPS体外刺激中性粒细胞3 h后,与对照组相比,产生大量胞外网状结构(NET),该结构包含DNA、组蛋白和髓过氧化物酶(MPO)成分;同时细胞上清中游离DNA(NET)含量显著升高(P<0.01)。采用IL-8体外刺激中性粒细胞3 h,与上述结果相似(P<0.05)。结论建立了体外诱导和定性、定量检测NET的方法,二者结合能更好地评价NET的产生。; 朱鏐娈张玥张玥梁顺涛李国力李蕊梁顺涛; 关键词：免疫荧光染色游离DNA

脂多糖所致脓毒症诱导的急性肺损伤肺组织T淋巴细胞活化及共刺激分子表达的研究被引量：6: 2015年; 目的研究腹腔注射脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(ALI)模型肺组织T淋巴细胞活化状态。方法健康雄性C57BL/6随机分为生理盐水(NS)腹腔注射组,LPS腹腔注射组,每组4只。模型建立后3 h,获取两组小鼠肺组织细胞并进行T淋巴细胞各亚群及活化指标染色,采用流式细胞术检测。结果与对照组(NS)相比,LPS腹腔注射组小鼠肺组织内抑制性共刺激分子PD-1、CD40/CD40L、CTLA-4在CD4^+和CD8^+T细胞表达水平均显著升高(P<0.05),协同共刺激分子CD28(MFI:298.50±4.44)表达水平降低;与对照组相比,早期活化分子CD69在LPS诱导的急性肺损伤模型小鼠肺组织内CD4^+T(MFI:848.30±95.57;t=6.8670,P<0.001)和CD8^+T淋巴细胞的表达水平显著升高(MFI:606.00±95.54;t=4.8780,P<0.01);晚期活化分子CD38在CD4^+T细胞表达显著升高(MFI:69.38±2.86;t=4.1150,P<0.01),在CD8^+T细胞表达无明显升高。结论 LPS诱导的急性肺损伤能够导致肺组织内T淋巴细胞早期活化,并且能够上调其多种抑制性共刺激分子表达,提示T淋巴细胞可能在ALI中发挥重要作用。; 林涛孔雅娴贾蓓刘三海胡小玲曾辉; 关键词：脂多糖急性肺损伤共刺激分子活化

异阿魏酸、含异阿魏酸中药提取物及升麻的用途: 本发明提供了异阿魏酸、含异阿魏酸中药提取物、及升麻在制备用于自身免疫性疾病的药物或功能性保健品中的用途。本发明还提供了用于自身免疫性疾病的药物组合物以及用于抑制炎性细胞因子的药物组合物。本发明提供了异阿魏酸、包含异阿魏酸...; 曾辉王宪波朱鏐娈李蕊; 文献传递

诱导表达人IFITM3的293细胞株的建立及其对H1N1型流感病毒侵染作用: 2018年; 目的建立诱导表达IFITM3蛋白的293细胞株,为进一步研究人IFITM3对H1N1型流感病毒侵染的作用及其分子机制提供细胞模型。方法构建IFITM3/pc DNA5/FRT/TO expression vector质粒及诱导表达细胞株,建立H1N1型流感病毒假病毒评价系统,利用蛋白印迹(Western blot)和荧光素酶报告基因对筛选的诱导表达细胞株功能进行检测。结果建立的293诱导表达细胞株能够很好表达目的蛋白,且诱导表达出来的IFITM3蛋白使H1N1型流感假病毒感染率下降97%(t=38.08、P<0.001),使水泡性口炎假病毒(VSVpp)感染率下降68%(t=54.56、P<0.001),而阴性对照组小鼠白血病假病毒(MLVpp)感染率(t=1.282、P=0.2208)和拉沙假病毒(LASVpp)感染率(t=0.4814、P=0.6377)无显著影响。结论 IFITM3蛋白诱导表达细胞株可以显著抑制H1N1型流感病毒感染,为进一步深入研究IFITM3抑制流感病毒感染的作用机制和分子机理提供了细胞模型和实验基础。; 侯志飞蒋栋赵学森曾辉; 关键词：假病毒

曾辉

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