孙妙囡
- 作品数：10 被引量：20H指数：3
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- 相关领域：生物学化学工程医药卫生更多>>
- 牛胰脏RNA Ⅱ的制备
- 2007年
- 目的：改进从牛胰脏制备RNAⅡ的方法，以降低成本，减少污染排放，提高产品的质量和收率。方法：采用酶-苯酚-氯仿稀盐法，替代传统方法的大剂量苯酚多次萃取法从牛胰脏提取RNAⅡ。结果：采用酶-苯酚-氯仿-稀盐法制备的RNAⅡ，制剂A260／A230、A260／A280的比值分别达到2．1和1．9以上，传统工艺为1．44和1．63；DNA含量控制在2％以下，传统工艺为6．2％；有机试剂消耗降低明显，由传统工艺的18000mL苯酚·kg^-1牛胰脏降低到600和300mL氯仿·kg^-1牛胰脏；成本由原来的253元·g^1牛胰脏核糖核酸降到11～14元·g^1牛胰脏核糖核酸。结论：采用酶-苯酚-氯仿-稀盐法制备的RNAⅡ中蛋白、多糖含量较低，纯度较传统方法有较大提高；该方法可减少有机试剂用量，减少污染排放，使生产成本大幅度下降；本工艺适合大规模生产RNAⅡ。
- 赵轶卓孙妙囡孙德军
- 核糖核酸Ⅱ制备及其病毒灭活工艺的验证被引量：8
- 2008年
- 目的从牛胰脏制备核糖核酸Ⅱ(RNAⅡ),对巴氏灭活法灭活病毒工艺进行验证。方法以苯酚、氯仿抽提法制备,以猪细小病毒(PPV)为指示病毒,观察用巴氏灭活法(60℃,10h)灭活RNAⅡ原液中病毒的效果,用纯度、A260/A280比值、紫外特征峰、完整性、含量变化考察灭活前后制剂变化。结果制备了纯度和活性均较好的RNAⅡ,PPV滴度为7.7logTCID50/0.1mL时灭活液中未检测出PPV,经盲传3代,亦未发现特异性细胞病变,灭活前后制剂无质的变化。结论可以现行方法从牛胰脏制备较高纯度RNAⅡ,巴氏法能对RNAⅡ溶液作有效的病毒灭活处理。
- 朱文赫孙妙囡孙德军
- 关键词：病毒灭活
- 核糖核酸Ⅱ制备及其病毒灭活工艺的验证
- 目的从牛胰脏制备核糖核酸Ⅱ,对巴氏灭活法灭活病毒工艺进行验证。方法以苯酚、氯仿抽提法制备 RNA,以猪细小病毒(PPV)为指示病毒,观察用巴氏灭活法(60℃,恒温10小时)灭活核糖核酸Ⅱ原液中病毒的效果,用纯度、OD/O...
- 孙妙囡朱文赫浦升磊孙德军
- 关键词：病毒灭活
- 文献传递
- 一种细胞毒活性高的人胰核糖核酸酶突变体hRNase-mult及其编码基因
- 本发明公开了蛋白质工程改造的高活力人胰核糖核酸酶(hRNase)，属于生物工程技术领域。本发明公开了一种利用蛋白质工程改造人胰核糖核酸酶，通过人胰核糖核酸酶多聚化、优化活性中心而得到的人胰核糖核酸酶突变体。进而获得一种对...
- 孙妙囡孙德军
- 一种迅捷、经济及高效回收DNA片段方法的建立被引量：1
- 2008年
- 目的:建立一种迅捷、经济、高效的从凝胶中回收DNA的方法。方法:以二氯二甲基硅烷硅化晴纶纱,以硅化的晴纶纱作为过滤垫层,冻融处理凝胶,离心收集液体,计算不同硅化晴纶纱厚度、不同冻融时间、不同离心力、不同离心时间和不同DNA片段长度的DNA回收率。结果:用硅化晴纶纱从凝胶中回收DNA时,0.5～2.0mm硅化晴纶纱厚度DNA片段回收率均在85%左右,提示不同硅化晴纶纱厚度对DNA片段回收率影响较小;冻融时间在30min前,随着冻融时间延长,回收率上升明显,至30min回收率达85%,再增加冻融时间回收率变化不显著,提示冻融时间对回收率影响较大,冻融时间应为1h;在5000r.min-1前,随着离心力增加,回收率上升明显,至5000r.min-1回收率达85%,再增加转速,回收率有略微上升,提示离心力对回收率影响较大,离心力应超过10000r.min-1(约合10000g);以10000r.min-1离心,30min前,离心时间对回收率影响较大,至30min时,回收率达85%,增加离心时间,回收率不再增加;250～2000bp长度DNA片段,回收率为80.7%～88.4%,即使100bp小片段回收率也能达到76%以上,表明片段大小对回收率影响较小,说明本方法的有效性。结论:硅化晴纶纱厚度0.5～2.0mm,冻融时间≥1h,离心力≥10000g,离心时间30minDNA回收率较高;硅化晴纶纱法可以高效地从电泳凝胶中回收目的DNA片段。
- 杨春伟孙妙囡孙德军
- 关键词：DNA回收
- 免疫毒素Onconase-V3的组成型表达及抗肿瘤作用研究
- 癌症是目前影响人类健康的几大疾病之一,全球新增癌症患者及死亡病例近一半出现在中国。多年来,手术治疗、放射治疗、化学药物(细胞毒药物)治疗是肿瘤治疗的三个主要手段。但是,化疗药物缺乏组织特异性,它同时也会杀伤正常的组织细胞...
- 孙妙囡
- 关键词：抗肿瘤药物免疫毒素靶向药物V3ONCONASE
- 文献传递
- 乌苏里蝮蛇去整合素ussurin制备、抗肿瘤活性及安全性研究
- 蛇毒中含有三类与血液凝集和细胞粘附有关的蛋白质，即GPIb/IX结合蛋白，出血毒和去整合素。 去整合素是49-84个氨基酸、富含半胱氨酸的小分子量多肽，由-S-S-桥形成的环中含有RGD结构(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸)，...
- 孙妙囡
- 关键词：去整合素纯化抗肿瘤安全性
- 文献传递
- 蜂毒肽基因在大肠杆菌中的表达、纯化及初步鉴定被引量：8
- 2010年
- 目的通过pGEX-2T原核表达载体表达蜂毒肽。方法将人工合成整合了肠激酶作用位点的蜂毒肽基因,插入载体pGEX-2T,构建蜂毒肽与谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合表达载体pGEX-MEL。重组质粒转化E.coliBL21(DE3)诱导表达,超声破碎菌体,SDS-PAGE检测蛋白表达情况,取超声上清,通过GST亲和色谱系统纯化目的融合蛋白,酶切通过溶血实验检测其溶血活性。结果SDS-PAGE结果显示,表达了相对分子质量约为30 000的融合蛋白,目的融合蛋白量约占菌体总蛋白量的29.5%。经Western blot鉴定,表达的GST融合蛋白与GST抗体有强烈的交叉反应,说明成功表达了目的融合蛋白。取超声上清,亲和色谱纯化融合蛋白,纯度为95%。肠激酶切割得到了人工天然蜂毒肽,测定蜂毒肽回收率为80%。结论通过原核表达系统成功表达蜂毒肽,具有和天然蜂毒相同的溶血活性。
- 朱文赫田立玲孙妙囡孙德军
- 关键词：蜂毒肽大肠杆菌纯化
- 蜂毒明肽的原核表达及纯化被引量：2
- 2009年
- 目的原核表达并纯化蜂毒明肽。方法人工合成蜂毒明肽基因,与肠激酶识别序列基因串联,插入原核表达载体pGEX-2T中,构建蜂毒明肽与谷胱甘肽硫转移酶的融合表达载体pGEX-APAM。将重组质粒转化E. coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定,并进行纯化和肠激酶切割。结果经Western blot鉴定,表达产物具有良好的反应原性。在优化的表达条件下,融合蛋白的表达量约占菌体总蛋白的25.8%,且大部分以可溶性形式存在。纯化的融合蛋白纯度大于95%,每毫克融合蛋白经肠激酶切割后,可得蜂毒明肽58.5μg,回收率为81.9%。结论已成功地原核表达并纯化了蜂毒明肽。
- 朱文赫王涵孙妙囡孙德军
- 关键词：原核表达纯化
- 肌氨肽苷制备工艺及其病毒去除方法的验证被引量：4
- 2008年
- 目的研究肌氨肽苷制备工艺并对超滤法去除病毒工艺进行验证。方法以家兔心脏和肌肉为原料,制得肌氨肽苷原液。并以猪细小病毒(PPV)为指示病毒,观察用截留相对分子质量为10 000的超滤器在进压0.12MPa、回流压0.05 MPa和进压0.20 MPa、回流压0.12 MPa条件下去除肌氨肽苷原液中病毒的效果,并以牛血清白蛋白为对照品,20%磺基水杨酸作为指示剂的条件下,对超滤膜的完整性进行验证。结果滤过液中未检测出PPV,经过盲传3代,也未发现特异性细胞病变;磺基水杨酸检测未变浑浊,表明膜完整性好,超滤设备可用。结论制备肌氨肽苷的方法可行,且所采用的超滤法去除PPV是1种有效去除病毒的方法。
- 孙妙囡孙德军王智鼎
- 关键词：肌氨肽苷生产工艺超滤法
