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姜永强: 作品数：135 被引量：314H指数：10; 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学自动化与计算机技术更多>>

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单链二硫键稳定抗体靶向超抗原SEA(D227A)分子的表达、纯化及鉴定被引量：3: 2005年; 目的:提高抗肝癌靶向超抗原SEA(D227A)的产量和稳定性,构建单链二硫键稳定抗体靶向超抗原分子scdsFv-SEA(D227A)。方法:构建scdsFv SEA(D227A)表达质粒,用IPTG诱导其在大肠杆菌BL21plusS表达。包涵体经洗涤和复性后,用QSepharoseHP和Hiprep26/60SephacrylS-200HR纯化。纯化蛋白经AMS烷化处理并结合PAGE电泳来检测二硫键形成情况,并通过ELISA和MTS分别检测重组蛋白与肝癌细胞的结合活性、稳定性和细胞杀伤活性。结果:重组蛋白以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上。通过复性及QSepharoseHP离子交换柱和Hiprep26/60SephacrylS-200H凝胶过滤两步纯化后,获得目的蛋白,每升诱导菌液的产量高达60mg。活性测定结果表明,相比与单链抗体靶向超抗原和二硫键抗体靶向超抗原SEA,二硫键抗体靶向超抗原在不影响结合活性和杀伤效果的情况下,稳定性有了较大提高。结论:建立了一种新的稳定的免疫毒素和提高其产量的方法,为hscFv25抗体靶向超抗原的临床应用奠定了基础,同时为其他低稳定性或低产量抗体的改造提供了借鉴的方法。; 郝淮杰郑玉玲余多慰马茹姜永强; 关键词：超抗原

A型产气荚膜梭菌α毒素基因的克隆及高效表达被引量：3: 2004年; 目的 :实现产气荚膜梭菌α毒素 (Clostridiumperfringensalphatoxin ,CPa)基因的克隆与表达。方法 :用PCR技术从A型产气荚膜梭菌中扩增出CPa基因 ,克隆到原核表达载体pQE30中 ,构建了重组质粒pQE30_CPa ,转化E .coliM15获得了CPa的高效表达。结果 :序列测定和双酶切表明 ,CPa基因正确插入载体。序列分析发现CPa基因与GenBank中的 4种CPa基因相似率为 76 .7%～ 99.9%。工程菌裂解液经SDS_PAGE分析显示在相对分子质量 4 30 0 0处有一条表达很强的蛋白区带 ,与CPa相对分子质量相符 ,约占菌体总蛋白的 6 2 .88% ,主要以包涵体形式存在。免疫印迹结果表明 ,表达的重组CPa蛋白同抗CPa血清有特异性结合。结论 :为进一步研究CPa重组疫苗和制备CPa的特异性抗体奠定了基础。; 王景林王利春吴东林康琳姜永强; 关键词：Α毒素基因表达

钌红染色观察猪链球菌荚膜超微结构研究: 本研究探讨钌红染色方法是否能用于观察猪链球菌荚膜的超微结构，结果显示，电镜下猪链球菌呈圆形或卵圆形，单个或呈链状排列。细胞内核质呈丝状，核糖体散在分布。细胞壁完整，与细胞质膜结合紧密。细胞表面包被一层荚膜，荚膜厚而肥大，...; 吴小红郝淮杰李豫川严格田光姜永强; 关键词：超微结构致病机制; 文献传递

猪链球菌2型双组分信号转导系统gene0906-0907插入失活突变体的构建及活性分析被引量：3: 2008年; 目的:构建猪链球菌2型89K毒力岛上的双组分信号转导系统(TCSTS)gene0906-0907的插入失活突变株,分析其活性,为进一步研究猪链球菌假想毒力因子在致病过程中的作用提供实验基础。方法:以猪链球菌2型05ZYH33基因组为模板,扩增gene0906-0907反应调节子gene0907内部的440bp片段为同源臂,并克隆到自杀载体pSET4s上,构建出插入失活载体pSET4s-P0907,将pSET4S-P0907转化05ZYH33,筛选出质粒整合到染色体gene0907内部的插入失活突变株05ZY△0907,PCR方法验证突变体。对突变株和野生株的生物学特性和小鼠致病性进行了初步比较。结果与结论:成功构建了89K TCSTS gene0906-0907插入失活突变株05ZY△0907,突变株的生物学特性和对小鼠的致病性与野生株相比差异不显著。; 李文君袁媛郑玉玲王恒樑姜永强; 关键词：猪链球菌2型

抗体靶向超抗原的抗肿瘤作用研究进展被引量：1: 2006年; 作为一种强大的T细胞激活剂,超抗原具有激活T细胞杀伤HLA-DR+肿瘤细胞的能力,但这种杀伤作用无特异性。抗体靶向超抗原通过抗肿瘤抗体与超抗原偶联,既具有超抗原活性,又具有肿瘤靶向性,从而可以选择性地结合到目标细胞,进行有效的特异性杀伤,因此,抗体靶向超抗原在肿瘤的生物治疗领域具有广泛的应用前景。; 宁保安姜永强晁福寰; 关键词：超抗原抗体靶向抗肿瘤

CT抗原NY-ESO-1基因克隆、表达及纯化: 2007年; 目的:利用大肠杆菌表达人CT抗原NY-ESO-1,对表达产物进行Western印迹鉴定和纯化,为今后利用其进行肿瘤疫苗的研究奠定基础。方法:通过全基因拼接获得NY-ESO-1基因,构建重组表达载体NY-ESO-1-pET28a(+),在大肠杆菌BL21(DE3)中利用IPTG诱导获得表达,利用单克隆抗体进行Western印迹鉴定,通过Ni柱亲和纯化获得纯化蛋白。结果与结论:拼接的NY-ESO-1全基因经测序证明与GenBank中人的NY-ESO-1全基因完全相符;构建的原核表达载体NY-ESO-1-pET28a(+)可稳定地可溶性表达NY-ESO-1蛋白;经Ni柱亲和纯化获得较好的纯化结果;利用鼠抗人单克隆抗体对表达的蛋白进行验证,结果显示阳性。本研究成功利用原核表达系统实现了对CT抗原NY-ESO-1的可溶性表达。; 江华郑玉玲姜永强; 关键词：NY-ESO-1 WESTERN印迹

RGD-葡激酶突变体(K130T,K135R)的制备与活性分析被引量：5: 2005年; 以葡激酶突变体质粒mSAK(K130T ,K135R) pBV2 2 0为模板,PCR重叠引物延伸法引入突变位点,并将该片段克隆至载体pBV2 2 0 ,构建了RGD mSAK pBV2 2 0质粒,转化大肠杆菌后热激诱导获得了高效表达,表达产物占菌体总蛋白的5 0 %以上,且主要以可溶性形式存在,所获蛋白依次用Q SepharoseHP柱、SephaycrylS 2 0 0HR柱和SP柱进行纯化,纯化的蛋白的纯度可达98%以上,纤维蛋白溶圈法体外溶栓活性测定结果表明,所获RGD mSAK蛋白溶栓活性与野生型葡激酶相当,豚鼠体内免疫试验证明突变体的免疫原性也有所降低,血小板聚集试验分析突变体蛋白的抗血小板聚集能力,RGD 葡激酶突变体具有一定的抗血小板聚集能力。; 宁保安马茹郑玉玲高志贤申博姜永强

葡萄球菌中毒性休克毒素的分离纯化与性质分析: 1998年; 葡萄球菌中毒性休克毒素（ＴＳＳＴ－１）是引起毒性休克症（ＴＳＳ）的主要病原，同时又是超抗原家族的重要成员之一，对于肿瘤的免疫治疗有着潜在的药用价值。获得纯度高、活性好ＴＳＳＴ－１是开展该项研究工作的关键。产毒培养后经ＣＭ离子纤维素层析、ＳｅｐｈｄｅｘＧ－７５和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００凝胶过滤简便有效的三步程序，成功地获得了高纯度的中毒性休克毒素。对其理化和免疫学性质分析的实验证明，纯化毒素纯度大于９５％，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上呈现单一条带，与其对应型抗血清有免疫学特异反应，不含核酸、糖和其它各型肠毒素等物质。提纯毒素对其致病机理和体内外免疫学调节作用的研究有重要意义。; 姜永强雷祚荣郑玉玲尚继栋常东施志国; 关键词：金黄色葡萄球菌纯化层析

一种猪链球菌2型表面脂蛋白、其制备方法及用途: 本发明公开了一种猪链球菌2型表面蛋白，还公开了该蛋白质的制备方法及用途。本发明的猪链球菌2型表面蛋白在genebank中的编号为gi|146320941，其制备方法包括克隆该表面蛋白基因；将基因与大肠杆菌表达质粒相连接，...; 姜永强郑玉玲耿红冉张炜李文君袁媛江华; 文献传递

2型猪链球菌胞壁蛋白MRP的截短表达、纯化及抗原保护性评价被引量：1: 2012年; 目的:扩增猪链球菌2型(Streptococcus suis 2)05Z33中的mrp基因,并在大肠杆菌BL21中重组表达,以获得高纯度的重组MRP截短蛋白,验证其抗原保护性。方法:以05ZYH33基因组为模板并设计引物扩增目的片段,构建表达质粒,利用亲和层析对目的蛋白进行纯化,免疫新西兰大白兔制备抗血清并测其效价。通过抗原保护实验及抗血清调理的全血杀伤实验验证重组MRP蛋白抗原保护性。结果:重组MRP蛋白在大肠杆菌中高浓度表达,纯化获得了高纯度的MRP截短蛋白并制备获得了抗血清。经该蛋白免疫过的CD-1小鼠与阴性对照组相比,存活率显著升高。经抗血清调理后,野生株05ZYH33在全血中的存活率显著降低,突变株ΔMRP无显著变化。结论:MRP蛋白有较高的抗原保护性。; 王萍萍骈亚亚袁媛郑玉玲姜永强熊正英; 关键词：猪链球菌2型 MRP

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