高笑宇
- 作品数：7 被引量：4H指数：1
- 供职机构：内蒙古大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项转基因生物新品种培育专项内蒙古自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 毛囊特异表达载体pCDsR-UI的构建以及绒山羊胎儿成纤维细胞的体外转染和筛选被引量：1
- 2012年
- 构建IGF1基因的毛囊特异表达载体,可为今后通过体细胞核移植技术建立转基因克隆绒山羊准备核供体细胞.将绵羊IGF1cDNA序列,连接到含有UHS启动子序列的克隆载体p19TU的SalI、SphI位点,获得过渡质粒载体p19TUI;pCDsRed2和过渡质粒载体分别经酶切和连接构成表达载体pCDsR-UI.以组织块贴附法分离和培养绒山羊胎儿成纤维细胞,外源性表达载体以脂质体方法转染所培养的第2代成纤维细胞,DMEM/F12+10%FBS、37℃5%CO2中培养,经添加G418筛选,获得了稳定表达红色荧光蛋白的细胞克隆,经特异性PCR鉴定证实外源基因已经整合在细胞基因组中.转基因前后分析细胞生长曲线和染色体核型证明转基因细胞的生长状态良好、各项参数正常.
- 肖红高圆梁伟高笑宇汪慧杜晓媛郭旭东刘东军
- 关键词：绒山羊胰岛素样生长因子I红色荧光蛋白胎儿成纤维细胞
- 以四环素调控表达系统调节LEF1基因在绒山羊成纤维细胞中的表达
- 本研究利用Tet-on系统构建毛囊特异性的LEF1表达载体，调节和控制LEFT基因在绒山羊胎儿成纤维细胞中的表达，为今后转基因绒山羊新品种的培育提供基础数据。本研究获得了转染pcDNA4-KL表达载体后稳定整合LEF1基...
- 杜晓媛汪慧许腾张志鹏薛娜高笑宇梁浩郭旭东刘东军
- 关键词：遗传育种成纤维细胞基因表达
- 文献传递
- 小鼠KGF基因毛囊特异性表达载体的构建及mESC脂质体悬浮转染条件的优化被引量：1
- 2011年
- 旨在构建小鼠角质细胞生长因子(KGF)真核表达载体pCDsR-UKA,通过脂质体转染法转染小鼠胚胎干细胞(mESC),并进一步优化其转染条件,最终获得可以正常生长并稳定表达红色荧光蛋白的转KGF基因的ES细胞。利用RT-PCR技术扩增小鼠KGF基因cDNA并构建表达载体pCDsR-UKA(6.6 kb),经鉴定正确的重组质粒DNA用脂质体包裹后转染mESC。从小鼠成纤维细胞cDNA扩增出891 bp的KGF基因片段与UHS启动子和BGH polyA序列成功重组到pCDsRed2载体中。经酶切和DNA测序验证,插入载体的DNA片段为KGF基因且方向正确。采用脂质体法优化转染条件,mESC最高转染效率达到(34.4±4.1)%。经G418筛选的转基因ES细胞通过PCR鉴定证实外源基因已整合在ES细胞基因组中。成功获得了小鼠KGF基因片段,以及真核表达载体pCDsR-UKA,经优化的脂质体悬浮法转染条件,在六孔板中当DNA与脂质体比例为3∶10时,可获得最佳转染效率且不改变ES细胞的生长状态,经筛选获得了转基因ES细胞克隆。为下一步通过四倍体补偿技术获得ES小鼠提供了转基因ES细胞。
- 梁伟肖红高笑宇杜晓媛汪慧郭旭东刘东军
- 关键词：KGF胚胎干细胞毛囊红色荧光蛋白脂质体转染悬浮法
- 胸腺素β4对小鼠毛发生长的影响及其作用机制
- 胸腺素β4(Thymosin beta4，Tβ4)能够促进毛发生长和毛囊发育，然而其作用机制尚不明确。我们构建Tβ4表皮特异性过表达小鼠模型和全身性敲除小鼠模型，进一步研究Tβ4对毛囊发育与毛发生长的影响，并探索其作用机...
- 高笑宇
- 关键词：胸腺素Β4毛发生长基因敲除
- 全身性过表达和表皮特异性过表达胸腺素β4小鼠皮肤中目的基因表达差异分析
- 2015年
- 胸腺素β4(Thymosinβ4,Tβ4)能够促进毛发生长.旨在构建CAG启动子指导的全身性过表达Tβ4小鼠(CTP小鼠)和角蛋白14(Keratin14,Krt14)启动子指导的表皮特异性过表达Tβ4小鼠(KTP小鼠),比较两种转基因小鼠模型的Tβ4表达情况,为进一步研究Tβ4对毛发生长的影响以及其作用机制奠定基础.首先构建CAG启动子指导的全身性过表达载体pODsRed-CTP,然后用pODsRed-CTP和Krt14启动子指导的pODsRed-KTP表达载体,通过原核注射技术制作转Tβ4基因小鼠.PCR鉴定得到CTP小鼠2只,阳性率1.6%;KTP小鼠4只,阳性率8%.通过Real-time PCR检测Tβ4基因mRNA水平表达量,结果显示Tβ4在CTP小鼠皮肤中mRNA水平表达量是对照小鼠的1.24和1.13倍,在KTP小鼠皮肤中mRNA水平表达量分别是对照小鼠的4.22、1.84、4.60和2.74倍.Western blotting检测Tβ4在蛋白水平的表达,发现CTP小鼠皮肤中Tβ4蛋白的表达量没有显著变化,而KTP小鼠皮肤中Tβ4蛋白表达水平显著升高.与CTP小鼠相比,KTP小鼠更适合作为Tβ4过表达小鼠模型,深入研究Tβ4对毛发的影响以及作用机制.
- 高笑宇刘东军梁浩仓明郭旭东
- 关键词：转基因小鼠
- 胸腺素β4表皮特异性表达载体的构建及转基因小鼠的研究
- 胸腺素β4(Thymosinbeta4，Tβ4)是肌动蛋白结合肽家族的一员，具有促进毛囊发育，加快毛发生长的作用。为了深入了解Tβ4基因对毛囊发育与毛发生长的作用，本研究构建了表皮特异性表达载体，并通过转染阿尔巴斯绒山羊...
- 高笑宇
- 关键词：胸腺素Β4转基因
- 文献传递
