高新
- 作品数：58 被引量：142H指数：7
- 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 密码子优化的人成纤维细胞生长因子-21在毕赤酵母中的表达被引量：6
- 2010年
- 目的在毕赤酵母中表达密码子优化的人成纤维细胞生长因子-21(hFGF-21),为探讨hFGF-21在糖尿病治疗方面的作用奠定基础。方法经密码子优化合成hFGF-21基因,构建表达载体pPICZαA-hFGF-21,电转化毕赤酵母GS115,斑点免疫印迹法筛选工程菌株,甲醇诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析表达产物,并对诱导条件进行优化。结果重组表达质粒经PCR、双酶切及测序鉴定,证明构建正确。筛选出5株阳性菌株,诱导上清经SDS-PAGE分析,可见相对分子质量约为25000的目的蛋白条带,目的蛋白的表达量约为6μg/L。Westernblot显示该蛋白具有良好的反应原性。诱导96h和培养液pH值为4.0时,目的蛋白的表达量最高,甲醇浓度对表达量无影响。结论已成功构建了密码子优化的hFGF-21真核表达载体,并在毕赤酵母GS115中分泌表达了hFGF-21。
- 马忠辉赵巧香高新王诗鸿宋海峰杨焕民
- 关键词：毕赤酵母电转化
- 人α-半乳糖苷酶转导克服异种移植HAR的小鼠实验研究被引量：5
- 2003年
- α 半乳糖苷酶可以特异地清除半乳糖α 1,3 半乳糖抗原 (Galα1,3Galantigen) ,此抗原是引起异种器官移植超急性排斥反应 (HyperacuteRejection ,HAR)的主要异种抗原 .将构建好的α半乳糖苷酶转基因载体通过显微注射的方式注入小鼠受精卵 ,培育出了转基因小鼠 .结果表明 ,转基因小鼠的心、肝、肾、脾、肺组织中均有人α 半乳糖苷酶基因的表达 ,其表达可以有效减少小鼠器官表面Galα1,3Gal抗原的表达水平 ,可以降低转基因小鼠脾细胞对补体介导的杀伤作用的敏感性 .研究表明人源α半乳糖苷酶基因可用于研制不表达Galα1,3Gal抗原的转基因动物 ,从而可以降低异种器官移植HAR的反应强度 。
- 贾延军程萱任会明高新杨晓章扬培
- 关键词：转导超急性排斥反应
- 活体电穿孔法辅助HE4基因免疫小鼠制备单克隆抗体被引量：2
- 2010年
- 目的：采用电穿孔辅助DNA免疫方法制备小鼠抗人附睾蛋白4（HFA）单克隆抗体（mAb）并对其生物学特性进行鉴定。方法：利用逆转录多聚酶链反应（RT—PCR）从卵巢癌患者组织中获得人HFA基因编码序列，将其亚克隆至pPICZαA表达载体中并测序鉴定。采用活体电穿孔法免疫BALB／c小鼠。单抗制备采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合，经多次克隆化培养，筛选出特异分泌鼠抗人HFAmAb的杂交瘤细胞株。采用Westernblot，Ig亚型分析和mAb表位分析等对mAb的生物学特性进行鉴定。结果：获得2株持续、稳定分泌鼠抗人I-IFAmAb的杂交瘤细胞株，命名为1—7-C和3-12-C。ELISA和Westernblot结果均显示本实验获得的2株mAb能够特异识别有天然构象的HFA蛋白，2株mAb的Ig亚类均为IgM，轻链均为入链。结论：成功地构建了pPICZαA-HE4表达载体，并获得2株鼠抗人HFA杂交瘤，其所分泌的抗体能特异地识别HFA蛋白。
- 栾好飞高新卞丽红付洁邱伟成董立厚范礼斌宋海峰
- 关键词：卵巢癌HE4DNA免疫杂交瘤单克隆抗体
- 阳离子脂质体-小干扰RNA复合物的处方优化及其治疗前列腺癌的体外研究被引量：3
- 2014年
- 目的研究小干扰RNA(siRNA)的新型阳离子脂质体的制备,考察此脂质体-小干扰RNA复合物对LNCap细胞中靶mRNA的沉默效应。方法采用逆向蒸发法制备新型阳离子脂质体,并加入鱼精蛋白和小牛胸腺DNA以增加其对小干扰RNA的压缩,评价其理化性质;以LNCap细胞为模型,以lipofectamine 2000作为阳性对照,用RT-PCR方法研究脂质体-小干扰RNA复合物对前列腺癌细胞中靶基因Plk-1的沉默效应。结果制备的脂质体(2,3-二油氧基丙基)三甲基氯化铵胆固醇的最佳比例为3∶1,粒径为(117±4.3)nm,Zeta电位为(47±3.6)mV;新型阳离子脂质体小干扰RNA复合物的入胞效率显著提高,荧光显微镜显示LNCap细胞内小干扰RNA含量明显升高。结论本实验所制备的阳离子脂质体具有较高转染效率,脂质体-小干扰RNA复合物的沉默效果显著。此新型阳离子脂质体有望成为小干扰RNA等基因治疗药物的高效传递系统。
- 王啸林葛华王清清李淼高新付洁宋海峰
- 关键词：阳离子脂质体小干扰RNALNCAP前列腺癌
- 大豆和人α-半乳糖苷酶基因在毕赤酵母中的表达及功能比较
- α-半乳糖苷酶基因是广泛存在于自然界中的一类外切糖苷酶.一方面,α-半乳糖苷酶在生命过程中具有重要的代谢和细胞发育分化调控作用;另一方面,α-半乳糖苷酶被广泛地应用于食品加工、化工业、制药业、医疗和科研领域.比较不同物种...
- 高新李素波杨军刘泽澎章扬培
- 关键词：毕赤酵母酶基因Α-半乳糖苷酶半乳糖功能比较
- 文献传递
- 猪血人源化改造——酶解清除猪红细胞α-Gal抗原被引量：6
- 2003年
- 猪红细胞(pRBC)是人红细胞的理想替代品,但pRBC表面有异种抗原——α-Gal抗原(Galα1,3Galβ1,4GalNAc-Ra),人血清中含有天然存在的抗α-Gal抗原的抗体,pRBC的α-Gal抗原会引起猪→人异种输血的急性临床输血反应.因此要消除种间的免疫排斥,首先要清除pRBC表面的α-Gal抗原.实验使用基因重组的大豆α-半乳糖苷酶(rSα-GalE)切除α-Gal抗原的末端α-Gal残基,对pRBC表面的α-Gal抗原进行人源化改造.结果表明,rSα-GalE能清除pRBC表面的α-Gal抗原,减缓种间的急性输血反应,经适当浓度的rSα-GalE酶解后,pRBC的结构、功能和形态均正常.
- 王捷熙高新任会明檀英霞章扬培白燕
- 关键词：猪血猪红细胞基因重组
- B→O血型转变的初步研究
- α-半乳糖苷酶(α-Galactosidase,EC 3．2．1．22) 是实现B→O血型转变、制备通用型血的关键工具酶。研究证明,决定人类ABO血型抗原的物质基础是红细胞表面的糖链结构。B型血与O型血的唯一差别在于红细...
- 杨军刘泽澎任会明高新宫锋季守平李素波章扬培
- 关键词：Α-半乳糖苷酶
- 文献传递
- 抗Glycophorin A单链抗体基因的构建及酵母表达研究被引量：1
- 2003年
- 目的 制备人红细胞表面血型糖蛋白A单链抗体。方法 从可分泌抗人红细胞表面血型糖蛋白A单克隆抗体的杂交瘤细胞中 ,分别扩增出编码其轻、重链可变区基因的cDNA ,通过连接序列组建单链抗体基因 ,将该基因导入毕赤酵母中 ,筛选工程菌株。结果 构建了抗GPA单链抗体基因 ,获得了分泌型表达单链抗体的毕赤酵母菌株 ,工程菌株可表达 30kD蛋白 ,ELASA证明其具有与GPA特异结合活性。结论 该单链抗体保留了亲本抗体的活性 。
- 高新逯好英徐东刚杨军李素波章扬培
- 关键词：单链抗体红细胞血型糖蛋白A毕赤酵母
- 核酸杂交酶联桥接分析系统定量分析寡核苷酸被引量：7
- 2012年
- 建立了基于核酸杂交及连接酶和核酸内切酶的酶联桥接分析(ELBA)系统,用于生物基质中反义寡核苷酸(ODN)药物的定量分析。对ELBA系统中的亲和素包被、俘获探针/检测探针浓度、T4DNA连接酶及S1核酸酶用量、碱性磷酸酶底物反应时间等条件进行了优化,确定使用中性亲和素包被的酶标板,俘获探针与检测探针浓度比为2∶3,S1酶为40U/孔,显色15min为最优条件,并考察了生物基质效应和稀释效应对方法的影响,建立了猕猴血浆中反义寡核苷酸的定量方法,并进行方法学确证,方法学定量范围为0.10～6.25nmol/L。本方法成功应用于反义硫代寡核苷酸药物在低剂量(1mg/kg)静脉滴注后的药代动力学研究,成为生物基质中寡核苷酸类药物定量分析的有效手段。
- 孙云娟付洁王清清周磊董立厚欧伦高新宋海峰
- 关键词：寡核苷酸药代动力学核酸杂交
- 新型宫颈癌治疗性疫苗肿瘤杀伤作用
- 2012年
- 目的研究新型治疗性疫苗NTV的体内外宫颈癌杀伤作用。方法采用51Cr释放法研究脾淋巴细胞对宫颈癌细胞TC-1的体外杀伤活性,将正常小鼠体内激活的免疫活性细胞输给荷瘤小鼠,采用过继性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)转移实验研究CTL的体内抗肿瘤作用。结果 CTL杀伤实验设置的效应细胞与靶细胞数量比分别为3:1、10:1及30:1,51Cr释放分析结果显示,疫苗NTV能够显著诱导脾淋巴细胞的肿瘤特异性杀伤作用,杀伤作用呈剂量依赖性变化,杀伤效率最高可达到53.5%;疫苗NTV在过继性CTL转移实验中的肿瘤抑制率为64.7%,上述结果均与阴性对照组有统计学差异(P<0.05)。结论疫苗NTV在体内外对宫颈癌细胞均具有良好的杀伤作用。
- 张卓梅宋海晶李娜邹佳季颖王清清陈方高新董立厚
- 关键词：治疗性疫苗融合蛋白
