陈钜豪
- 作品数：10 被引量：13H指数：2
- 供职机构：华南农业大学兽医学院更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生文化科学更多>>
- 充分发挥学生的主体作用，迎接新世纪的挑战
- 近几年，本校和全国其他高校一样，面临着扩招的压力。教学对象是多层次，任务也相当繁重，尤其是本科生教学，学校十分重视。五年一度的本科教学评估工作，要求以评促建，将许多工作规范化，制度化，而不是为了迎评在评审专家到校前自行加...
- 罗满林苏丹萍刘健陈钜豪张欣
- 关键词：本科教育教学评估
- 文献传递
- 鸭白细胞介素-2基因在毕赤酵母中的表达被引量：2
- 2008年
- 根据GenBank中登录的鸭IL-2基因序列设计并合成了1对特异性引物,以经ConA诱导的广州鸭外周血淋巴细胞提取的总RNA为模板,用RT-PCR方法扩增出长度为360 bp的目的基因片段,并将该基因克隆到pMD18-T载体上。酶切鉴定、PCR鉴定及序列测定结果表明,获得了鸭IL-2成熟蛋白基因的完整克隆。测序结果表明,该成熟蛋白基因由360个核苷酸组成,共编码119个氨基酸。克隆的鸭IL-2基因与GenBank上序列号为AY173028及AF294322的鸭IL-2基因的同源性高达99.4%。将目的基因克隆至真核表达载体pPICZαC上,构建了重组质粒pPICZαC-DuIL-2。酵母转化子经甲醇诱导发酵分泌表达了鸭IL-2基因。SDS-PAGE分析证实,鸭IL-2基因在毕赤酵母(Pichia pastoris)中表达成功,表达的重组蛋白的分子质量约为14.3 ku。
- 张欣崔敏罗满林贺东生黄毓茂房红莹陈钜豪马魁
- 关键词：毕赤酵母
- 鉴别猪圆环病毒1型和2型的二重PCR方法的建立被引量：1
- 2009年
- 根据GenBank上发表的PCV-1和PCV-2序列,设计2对引物分别扩增PCV-1和PCV-2的独特区域,长度为382 bp和222 bp。将PCR产物分别克隆至pMD-18T vector,经转化、PCR鉴定和序列测定,构建了PCV-1和PCV-2的阳性质粒,并等量混合作为二重PCR阳性模板。将2对PCR引物混合后,进行退火温度优化,敏感性和特异性试验,并用于临床检测。结果表明,该二重PCR方法可以特异性地鉴别PCV-1和PCV-2,最低检出量分别为0.1 ng和0.01 ng,敏感性较高。应用该方法可对临床样品进行准确、快速地诊断,为猪圆环病毒的临床诊断与流行病学调查等研究奠定了基础。
- 陈钜豪陈文玉甘志鹏刘健赵海参曾小娜罗满林
- 关键词：猪圆环病毒流行病学调查
- 猪IL-15 cDNA真核表达载体的构建、表达及其免疫佐剂效应被引量：2
- 2011年
- 参考GenBank发表猪IL-15mRNA序列设计引物,用RT-PCR方法扩增猪IL-15cDNA,并克隆到pMD18-T载体中,通过PCR、酶切和测序验证克隆正确,再亚克隆到真核表达载体pcDNA-3.1(+)上,得到重组质粒pcD-NA-pIL-15。在脂质体介导下,重组质粒pcDNA-pIL-15转染AD-293细胞。以鼠抗猪IL-15为一抗,用间接免疫荧光分析表明猪IL-15基因均在AD-293细胞中成功进行了瞬时表达。小鼠免疫试验表明,pcDNA-pIL-15作为免疫佐剂,能够有效提高小鼠的脾T细胞增殖,加强pcDNA-ORF2(PCV2)质粒免疫过程中的特异性中和抗体的产生,为进一步研制猪IL-15基因佐剂疫苗及进行临床实验奠定基础。
- 何谦陈钜豪房红莹卢俊鹏张欣崔敏曾小娜刘健罗满林
- 关键词：真核表达佐剂疫苗中和抗体水平
- 牛IFN-γ基因的原核表达及单克隆抗体的研制
- 本研究参考GenBank中牛IFN-γ的cDNA基因序列，设计合成了一对含酶切位点的引物，PCR扩增出不含信号肽的IFN-γ基因，克隆进pMD18-T Simple Vector，将测序正确的目的基因插入表达载体pET-...
- 马魁房红莹周荣罗满林张欣陈钜豪崔敏
- 关键词：干扰素牛血清IFN-Γ基因单克隆抗体酶联免疫吸附试验
- 文献传递
- 牛分枝杆菌ESAT-6-CFP-10融合基因重组腺病毒载体的构建及表达被引量：3
- 2009年
- 目的构建表达牛分枝杆菌的ESAT-6-CFP-10融合基因的重组腺病毒载体,为研制能有效防治牛结核病的重组腺病毒活载体疫苗打下基础。方法以牛分枝杆菌ValleeⅢ株基因组DNA为模板,应用PCR扩增获得ESAT-6和CFP-10两个目的基因片段,采用重叠延伸剪接技术(SOE)将ESAT-6和CFP-10基因通过(G1y4Ser)3接头连接,得到融合基因。将融合基因T/A克隆后,亚克隆至腺病毒转移载体pShuttle-CMV中,构建重组穿梭质粒pShuttle-CMV-ESAT-6-CFP-10,限制性内切酶消化、菌液PCR、序列分析验证无误后,PmeⅠ酶切,转化含有腺病毒骨架质粒pAdeasy-1的BJ5183-AD-1感受态细胞,经同源重组获得复制缺陷型重组腺病毒载体pAd-CMV-ESAT-6-CFP-10。PacI酶切线性化的重组质粒pAd-CMV-ES-AT-6-CFP-10转染AD-293细胞进行病毒包装和扩增。PCR、Western blot检测包装病毒的融合基因及其表达情况。结果成功构建携带牛分枝杆菌的ESAT-6-CFP-10融合基因的重组腺病毒载体,包装病毒用PCR、Western blot检测到包装病毒的融合基因及其表达。结论本研究成功地构建携带牛分枝杆菌的ESAT-6-CFP-10融合基因的重组腺病毒,为下一步在动物体内进行免疫效果研究打下基础。
- 房红莹鲁俊鹏曾小娜王雷陈钜豪刘健罗满林
- 关键词：牛分枝杆菌ESAT-6CFP-10重组腺病毒载体
- 牛分枝杆菌ESAT-6基因和CFP-10基因在大肠杆菌中的融合表达被引量：5
- 2008年
- 以牛分枝杆菌Vallee株基因组DNA为模板,应用PCR扩增获得了ESAT-6和CFP-10两个目的基因片段,采用重叠延伸剪接技术(SOE)将ESAT-6基因和CFP-10基因通过(G1y4Ser)3接头连接,得到了融合基因。将融合基因片段先克隆于pMD18-T载体,再亚克隆到表达载体pET32a(+)中,通过限制性内切酶消化、菌液PCR鉴定、序列分析证实得到含预期序列的重组质粒pET-ESAT-6-CFP-10;该质粒转化BL21(DE3);经IPTG诱导,表达出了40ku的融合蛋白;用Ni螯合层析方法纯化该蛋白,经SDS-PAGE检测,出现了清晰的单一条带;Western-blotting试验结果显示,该融合蛋白能与抗牛分枝杆菌阳性血清发生反应。结果表明,ESAT-6基因和CFP-10基因在大肠杆菌中融合表达成功并具有良好的反应原性。
- 房红莹马魁张欣崔敏陈钜豪蒋启荣刘付启荣罗满林
- 关键词：牛分枝杆菌
- 牛白细胞介素15基因的克隆及在大肠杆菌中的表达
- 2009年
- 根据GenBankTM中发表的牛IL-15基因序列设计并合成了特异性引物,以经LPS和ConA刺激的牛外周血单个核细胞提取的总RNA为模板,用RT-PCR方法扩增出长度约500 bp的目的基因片段,并将该基因克隆到pMD18-T载体上.酶切、PCR及序列测定结果表明,获得了牛IL-15全长基因的克隆.进一步通过PCR方法得到缺失其N端48个氨基酸的信号肽序列的牛IL-15成熟蛋白基因,将其亚克隆到原核表达载体pET-32a上,构建重组表达质粒pET-IL-15,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,该菌表达以包涵体形式存在的相对分子质量约为33 000的融合蛋白.用Ni螯合层析方法纯化表达的蛋白.Western-blot试验显示表达的重组融合蛋白能与抗6×His的单克隆抗体发生反应,同时也能与鼠抗猪IL-15的多克隆抗体发生明显交叉反应.
- 房红莹陈钜豪张欣胡寻罗满林
- 关键词：基因克隆原核表达
- 猪白细胞介素15的克隆、表达及佐剂效应研究
- IL-15是新发现的具有类似IL-2生物活性的一种新型细胞因子，广泛存在于动物机体内，在免疫调节和免疫应答尤其是在抗肿瘤免疫应答中有重要作用。1997年发现的猪白细胞介素15(Porcine Interleukin-15...
- 陈钜豪
- 关键词：原核表达真核表达活性测定
- 文献传递
- 牛白细胞介素15基因的克隆与表达
- 根据Genbank上发表的牛IL-15基因序列设计并合成了特异性引物,以经LPS和ConA刺激的牛外周血单个核细胞提取的总RNA为模板,用RT-PCR方法扩增出长度约500bp的目的基因片段,并将该基因克隆到pMD18-...
- 房红莹陈钜豪张欣胡寻罗满林
- 关键词：基因克隆原核表达
- 文献传递
