陈相宜 作品数:11 被引量:56 H指数:4 供职机构: 广西医科大学基础医学院 更多>> 发文基金: 广西壮族自治区自然科学基金 国家自然科学基金 广西科技创新能力与条件建设项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
肝癌干细胞体外富集模式的构建 被引量:1 2016年 目的构建肝癌干细胞体外富集模式。方法选择肝母细胞瘤Hep G2细胞系,以有限稀释法培养体外单细胞,观察体外单细胞克隆培养的克隆细胞生长曲线和形成全克隆、部分克隆以及旁克隆的比例,选取全克隆逐级扩增,取1×104和1×106的Hep G2细胞进行裸鼠皮下成瘤实验,qRT-PCR检测全克隆癌干细胞表面标志物ABCG2、ALDH1A3、CD44、CXCR4、OCT4 mRNA,悬浮球形成实验计算全克隆悬浮球形成率。对全克隆细胞加0.5、0.3、0.2、0.1、0.05、0.01μg/m L浓度的阿霉素干预48 h,观察全克隆生长情况;对于干预后存活的全克隆全部进行逐级扩增和裸鼠荷瘤实验。结果 Hep G2细胞克隆形成率为32.78%±9.03%,其中全克隆、部分克隆、旁克隆百分比分别为7.12%±2.96%、62.67%±13.39%、30.21%±14.87%;所有全克隆均可逐级扩增;1×104、1×106个Hep G2细胞全克隆接种裸鼠成瘤率分别为12.5%、100%;与Hep G2细胞相比,单细胞全克隆ABCG2、CD44、ALDH1A3、CXCR4和OCT4表达倍数分别为2.26±0.33、2.67±0.55、3.96±1.56、2.56±0.55、1.05±0.40,两者ABCG2、ALDH1A3、CD44、CXCR4相比,P均<0.05;只有Hep G2全克隆细胞可形成悬浮球。单细胞克隆培养后的全克隆进行阿霉素干预,发现仅加入0.1、0.05、0.01μg/m L阿霉素的Hep G2细胞全克隆存活,接种裸鼠成瘤率均为100%。结论成功构建了肝癌干细胞体外富集模式。 杨帅 陈娟 佘佐亚 陈相宜 蔡捷 邝晓聪关键词:肿瘤干细胞 肝癌干细胞 细胞培养 基于耐药特性联合单细胞培养识别肝癌干细胞克隆亚群 被引量:1 2014年 目的:基于癌干细胞的耐药特性联合单细胞培养方法识别肝癌干细胞所在的克隆亚群.方法:以BEL-7404细胞系为研究对象,裸鼠体内移植瘤形成实验,并予阿霉素(adriamycin,ADM)8 mg/kg干预,待肿瘤直径为1.5 cm时取移植瘤细胞做原代培养,并在裸鼠体内连续传代4代,并将第4代移植瘤细胞命名为"BEL-7404-ADM-P4",根据成瘤时间检测肝癌干细胞富集情况.联合单细胞培养,取BEL-7404及BEL-7404-ADM-P4所形成的克隆根据克隆形态分为全克隆、部分克隆、旁克隆,检测BEL-7404及BEL-7404-ADM-P4单克隆中全克隆、部分克隆、旁克隆的癌干特性,即增殖能力、克隆形成率及悬浮球形成率;取其全克隆、部分克隆、旁克隆做hoechst33342染色,并在共聚焦显微镜下观察其染色情况;根据BEL-7404及BEL-7404-ADM-P4单克隆中全克隆、部分克隆、旁克隆的增殖能力、克隆形成率及悬浮球形成率以及hoechst33342染色情况识别癌干细胞所在的克隆亚群.结果:裸鼠体内低剂量阿霉素干预,在体内连续成瘤传代过程中,裸鼠皮下移植瘤成瘤率均为100%,且成瘤时间从第一代到第四代均有所缩短,以此达到了肝癌干细胞的初步富集;增殖能力:全克隆增殖速度最快,细胞量最大,部分克隆次之,旁克隆增殖速度最慢,并于第10天开始出现细胞皱缩死亡;克隆形成率:BEL-7404-ADM-P4-H高于BEL-7404及BEL-7404-ADM-P4-M,差异有统计学意义(P<0.05);悬浮球形成率:仅BEL-7404-H及BEL-7404-ADM-P4-H可形成悬浮球,其余细胞系不形成悬浮球,而BEL-7404-H及BEL-7404-ADM-P4-H悬浮球形成率比较,无统计学意义(P>0.05);BEL-7404及BEL-7404-ADM-P4单克隆中全克隆、部分克隆、旁克隆hoechst33342染色情况:BEL-7404及BEL-7404-A D M-P4单克隆中全克隆都有极少数不染和低染的细胞存在,但部分克隆、旁克隆全染,且BEL-7404单克隆中全克隆、部分克隆、旁克隆hoechst33342荧光强度均强于BEL-7404-ADM-P4单克隆中全� 陈娟 区泳芳 蔡捷 陶璐 陈相宜 邝晓聪关键词:肝癌干细胞 单细胞培养 舌癌耐药细胞株的建立及癌干细胞特性的实验观察 被引量:2 2012年 目的建立舌癌耐药细胞株,并观察耐药细胞株癌干细胞的相关生物学特性。方法以低浓度阿霉素持续增量诱导法建立TCA-8113舌癌耐药细胞株,并对亲代与舌癌耐药细胞株进行癌细胞基本特性、癌干细胞相关细胞学特性的检测,分别以计数法检测癌细胞生长曲线、倍增时间以及用MTT法测定耐药倍数,并进行单个细胞成克隆实验、平板克隆形成实验和悬浮球形成实验。结果 TCA-8113舌癌耐药细胞为"铺路石"状上皮样生长方式,但其中异形细胞略多,耐药倍数为22倍;生长曲线提示其增殖速度明显低于亲本TCA-8113舌癌细胞,且倍增时间增加,但在细胞周期中各期细胞比例未见明显改变;TCA-8113舌癌耐药细胞克隆形成率、单个细胞培养成株率均明显低于其亲本TCA-8113舌癌细胞(P﹤0.05)。结论低浓度阿霉素持续增量法可诱导形成舌癌耐药细胞株,但舌癌耐药细胞株的癌干细胞特征并不明显。 陈相宜 邝晓聪 蔡捷 陶璐关键词:舌癌 耐药细胞 癌干细胞 体内阿霉素干预富集肝癌干细胞的初步研究 被引量:1 2013年 目的建立肝癌裸鼠皮下移植瘤动物模型,以癌干细胞的耐药特性为建立富集肝癌干细胞的切入点,在机体环境下进行构建体内肝癌干细胞的富集模式。方法将BEL-7404人肝癌细胞株的细胞悬液注射裸鼠两侧腋窝皮下,建立皮下移植瘤模型,经阿霉素干预后原代取材,分别以单个细胞克隆形成实验、平板克隆形成实验和悬浮球形成实验,对亲本细胞及经阿霉素干预后的BEL-7404肝癌细胞进行癌干细胞相关细胞学特性的检测。结果每一代裸鼠皮下移植瘤模型成瘤率为100%,亲本细胞与经体内阿霉素干预后的第一代BEL-7404肝癌细胞的单细胞克隆形成率比较没有明显差异(P>0.05),而体内干预第二代细胞的单细胞克隆形成率均明显高于亲本细胞和经干预后的第一代细胞(P<0.05),体内干预第一代细胞平板克隆形成率均明显低于亲本细胞和第二代细胞(P<0.05)。亲本细胞及经体内阿霉素干预后的BEL-7404肝癌细胞在干细胞培养基中培养均未见有细胞悬浮球形成。结论经低剂量阿霉素体内干预可作为富集肝癌干细胞的手段之一。 区泳芳 邝晓聪 罗殿中 蔡捷 陶璐 陈相宜 佘佐亚 姚金光关键词:肝肿瘤 癌干细胞 皮下移植瘤模型 阿霉素 螺旋藻激酶对人脐静脉内皮细胞通透性及动脉粥样硬化大鼠血清黏附因子的影响 被引量:3 2016年 目的研究螺旋藻激酶(SPK)对人脐静脉血管内皮细胞通透性及动脉粥样硬化大鼠血清黏附因子的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,采用H2O2建立氧化损伤内皮细胞模型。测定单层细胞透过率、细胞外乳酸脱氢酶(LDH)渗出量、细胞分泌的细胞间黏附分子1(ICAM-1)量;采用高脂饲料喂养法建立大鼠动脉粥样硬化(AS)模型,同时给予SPK干预,连续饲养12周。末次给药后取血,分离血清,ELISA法测定细胞间黏附分子1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)。结果体外实验:SPK可显著降低氧化损伤造成的单层细胞通透性,减少细胞外溢出的LDH和细胞分泌的ICAM-1(P均<0.05);体内实验:SPK显著降低AS模型大鼠血清ICAM-1、VCAM-1水平(P均<0.05)。结论 SPK可降低血管内皮细胞通透性,减少其释放黏附因子;降低AS大鼠血清黏附因子,预防AS。 王慧杰 庞辉 陈萌 王科 杨莹 陈相宜关键词:动脉粥样硬化 细胞间黏附分子1 血管细胞黏附分子1 基于护理质量反馈构建精准护理模式应用于食管癌患者临床效果观察 被引量:33 2020年 目的:以护理质量反馈管理为基础,构建精准护理模式,观察其对食管癌患者的护理效果,为该模式的细化实施与推广提供依据。方法:选取2017年12月至2018年12月在广西医科大学第一附属医院行食管癌根治术的90例患者为研究对象,随机分为对照组和观察组,每组45例。对照组采用护理规范实施常规护理,观察组采用动态护理质量反馈模式进行精准护理。护理效果观察指标为术后首次下床活动时间、住院天数、焦虑程度(SAS评分)、疼痛程度(VAS评分)、并发症发生率和护理满意度情况。结果:观察组患者的术后首次下床活动时间、住院天数明显短于对照组,术后第1天和第3天疼痛评分、出院前焦虑评分及并发症发生率均明显低于对照组,护理满意度显著高于对照组(P<0.05或P<0.01)。结论:基于动态护理质量反馈的精准护理模式,可提高食管癌患者的围手术期护理满意度,改善护理质量,有推广价值。 卢欣欢 罗玉华 黄灵 陈相宜关键词:食管癌 肝癌耐药细胞株的建立及癌干细胞的特性 被引量:5 2012年 目的建立肝癌耐药细胞株,并观察耐药细胞株癌干细胞的相关生物学特性。方法采用阿霉素(ADM)浓度梯度递增法诱导建立耐药BEL-7404人肝癌细胞株,并对亲代与耐药肝癌细胞株进行癌细胞基本特性、癌干细胞相关细胞学特性进行检测,用计数法检测癌细胞生长曲线、倍增时间与MTT法测耐药倍数;单个细胞成株培养、平板克隆形成实验、"球囊"细胞培养实验。结果耐药BEL-7404人肝癌细胞与亲本细胞相似,呈上皮样生长方式,但其中梭状细胞略多,耐药倍数为292倍;生长曲线表明其增殖速度明显低于亲本BEL-7404人肝癌细胞,且倍增时间增加;耐药BEL-7404肝癌细胞克隆形成率、"球囊"细胞形成率均明显低于其亲本BEL-7404人肝癌细胞。结论低浓度阿霉素持续增量法可诱导形成耐药肝癌细胞株,但耐药肝癌细胞株的癌干细胞特征并不明显。 陶璐 蔡捷 邝晓聪 陈相宜关键词:肝肿瘤 耐药性 癌干细胞 螺旋藻激酶对人脐静脉内皮细胞抗氧化能力的影响 被引量:6 2016年 内皮细胞损伤是动脉粥样硬化发生的起始步骤,氧化应激则被认为是血管内皮损伤最重要的致病因子之一[1-2].研制抗氧化内皮细胞保护剂已成为国内外研究的热点.我们前期的研究证明螺旋藻激酶(SPK)具有抗凝溶栓、保护细胞的能力[3].本研究建立脐静脉内皮细胞氧化损伤模型,探讨螺旋藻激酶的抗氧化能力和保护细胞的作用. 陈萌 庞辉 王慧杰 陈相宜关键词:人脐静脉内皮细胞 丙二醛 超氧化物歧化酶 谷胱甘肽过氧化物酶 拉曼光谱研究两面针活性成分诱导肝癌细胞的凋亡 被引量:4 2016年 运用拉曼光谱法对两面针活性成分诱导的肝癌细胞凋亡进行分析,肝癌细胞7404分别经10 mg·L^(-1)氯化两面针碱及3 g·L^(-1)两面针提取液处理后,收集经药液处理12,24,36,48 h的各组细胞的拉曼光谱后,通过Hochest33342/PI荧光染色法鉴定细胞并保留荧光染色阳性(发生凋亡活细胞)的光谱,并在Origin Pro8.0系统中比较各组平均光谱的差异。收集肝癌细胞的拉曼光谱依次进行背景扣除、平滑、归一化等方法处理。Hochest荧光染色后空白组细胞核染色均匀,而药物处理48 h后,核碎裂,拉曼光谱结果显示两面针提取液处理肝癌细胞12,24,36,48 h后,与核酸及蛋白质相关的峰均有降低,其中785,1 002,1 175,1 660 cm^(-1)峰强度随两面针药物作用时间的延长而降低,表明两面针活性成分能够诱导肝癌细胞凋亡,凋亡的肝癌细胞中核酸和蛋白质的含量均低于活细胞。两面针活性成分作用时间与药效呈一定的相关性。拉曼光谱能够反映中药两面针活性成分作用后的肝癌细胞内物质变化的信息,对实时监测细胞凋亡过程及药物的临床应用具有重要意义。 毛晓丽 覃禹 陈相宜 邝晓聪 黄庶识 刘华钢关键词:拉曼光谱 肝癌细胞 两面针 基于肿瘤耐药特性构建舌癌干细胞富集模式的实验研究 背景:癌干细胞(cancer stem cell, CSC)是肿瘤组织中存在数量稀少的癌细胞,具有自我更新、增殖和分化的潜能,在肿瘤形成、生长、复发和转移中起着决定性的作用,而且具备有以下基本特性:①自我更新,②高致瘤性... 陈相宜关键词:舌癌 癌干细胞 耐药 文献传递