钟英成
- 作品数：10 被引量：57H指数：3
- 供职机构：北京大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组凋亡相关蛋白PDCD5的纯化及稳定性被引量：1
- 2003年
- 目的 :建立简便、有效的原核表达促凋亡相关蛋白PDCD5的纯化路线 ,获得高纯度的PDCD5蛋白 ,并观察其稳定性。方法 :以包涵体形式表达的PDCD5融合蛋白 ,经包涵体洗涤、变性、复性、酶切、DEAESepharoseFastFlow和SephacrylS 2 0 0两步层析分离获得PDCD5蛋白。选用毛细管电泳方法检定蛋白质纯度 ,SDS -PAGE检定蛋白质的稳定性。结果 :经毛细管电泳方法检测PDCD5蛋白纯度为 10 0 % ,相对分子质量 15 80 0 ,等电点 5 .9。生物学活性分析PDCD5蛋白能够促进撤除细胞因子的HL 6 0细胞的凋亡 ,呈现一定的量效关系。稳定性研究发现储藏中的PDCD5蛋白不稳定 ,对温度敏感 ,4℃和 2 5℃极易降解 ,而 - 2 0℃和冻干保存则相对稳定。结论 :本研究建立的蛋白纯化方法可以获得大量、高纯度PDCD5蛋白。稳定性实验提示PDCD5宜在 - 2 0℃以下或冻干保存。
- 王露范慧莫晓宁张颖妹魏征人钟英成黄大无
- 关键词：PDCD5纯化稳定性HL-60细胞
- 人心肌肌钙蛋白Ⅰ在大肠杆菌中的高效表达及纯化被引量：1
- 2000年
- 目的 :获得高纯度的人心肌肌钙重组蛋白 ,为临床上检测心肌损伤及预后提供新的诊断方法。方法 :利用RT PCR方法从人心肌细胞的cDNA文库中扩增编码人心肌肌钙蛋白Ⅰ的cDNA ,并克隆到大肠杆菌表达载体中 ,表达含凝血酶识别序列的MS2 cTnI融合蛋白 ,纯化后用Western blot进行鉴定。结果 :从人心肌cDNA文库中扩增出编码人cTnI的cDNA ,克隆并在大肠杆菌中表达 ,表达量达 30 %以上。经离子交换柱纯化 ,最终产物纯度在95 %以上。可与其特异性单克隆抗体反应。结论 :cTnI能够在大肠杆菌中高效表达和纯化 。
- 狄春辉钟英成施群
- 关键词：心肌肌钙蛋白大肠杆菌基因转移心血管疾病
- 人重组钙依赖性磷脂结合蛋白Ⅴ在大肠杆菌中的高效表达、纯化及细胞凋亡检测被引量：3
- 2001年
- 目的 :为细胞凋亡研究提供快速可靠的实验方法。方法 :利用RT PCR技术从人外周血单核细胞系U937cDNA文库中扩增出编码钙依赖性磷脂结合蛋白Ⅴ (AnnexinⅤ )cDNA ,并克隆到大肠杆菌表达载体中 ,在大肠杆菌中表达含凝血酶识别序列的MS2AnnexinⅤ融合蛋白。表达产物经凝血酶消化 ,可除去MS2细菌蛋白 ,再经离子交换层析纯化 ,可得成熟的AnnexinⅤ纯品 ,FITC标记后的AnnexinⅤ可用于细胞凋亡的检测。结果 :在大肠杆菌表达的人重组AnnexinⅤ占菌体蛋白的 5 6 % ,经纯化获得 99%纯度的非融合型AnnexinⅤ ,FITC标记的An nexinⅤ能有效地检测凋亡细胞。结论 :成功地建立了批量获取AnnexinⅤ的技术路线 。
- 狄春辉施群张颖妹赵辰钟英成黄大无马大龙
- 关键词：大肠杆菌纯化细胞凋亡
- 髓样造血抑制因子(MPIF)存在一种新的mRNA剪切变异体
- 2003年
- 目的 克隆并原核表达趋化因子 ,研究其结构与功能。方法 RT PCR技术 ,DNA测序和计算机网上比对 ,DNA重组及原核表达技术 ,离子交换层析技术 ,半固体骨髓集落培养。结果 在利用RT PCR扩增趋化因子MPIF 1的过程中发现存在一种新的变异体形式。该变异体比MPIF 1多5 1个碱基 ,编码的蛋白质比MPIF 1长 17个氨基酸 ,基因定位于人类第 17号染色体上 ,其序列符合内含子和外显子的剪切规律 ,因而很可能为MPIF 1的mRNA不同剪切形式 ,将其命名为MPIF 1β。应用DNA重组技术构建原核表达质粒PKPL MPIF 1β ,转化大肠杆菌 ,诱导表达 ,获得重组蛋白。SDS PAGE表明MPIF 1β的表达效率达 15 % ,相对分子质量 (Mr)约为 (14～ 15 )× 10 3。功能研究表明 ,MPIF 1β有抑制小鼠骨髓集落形成的作用。结论 MPIF 1β是与MPIF 1功能类似的新变异体。
- 莫晓宁范慧张颖妹曹丽钟英成马大龙
- 关键词：MPIF趋化因子变异体原核表达
- 趋化素样因子(CKLF1)对骨髓细胞增殖活性的研究被引量：47
- 2001年
- 目的 研究趋化素样因子 1(CKLF1)对造血功能的调节作用。方法 利用 MTT法，检测 CKLF1真核细胞表达载体转染上清在液体培养基中，对人低密度骨髓细胞和小鼠骨髓细胞的增殖调控作用；并在半固体培养基中，观察其对人低密度骨髓细胞集落形成的刺激作用。结果 COS-7细胞表达的 CKLF1能明显促进人和小鼠骨髓细胞的增殖，并能促进人骨髓细胞的集落形成，与 GM-CSF有协同刺激作用。结论 CKLF1能促进人和小鼠骨髓造血干
- 韩文玲芮珉张颖妹陈英玉钟英成狄春辉宋泉声马大龙
- 关键词：趋化素样因子1集落形成骨髓细胞增殖
- 人类新细胞因子(CKLF-1)在大肠杆菌中的表达与鉴定被引量：3
- 2003年
- 目的 进一步研究人类新细胞因子———趋化素样因子 1(CKLF 1)蛋白的结构与生物学活性。方法 构建了融合蛋白的原核表达质粒 ,并在大肠杆菌中进行诱导表达 ,获得了原核表达的融合蛋白 ,经凝血酶切割获非融合重组蛋白 ,并进行体外活性鉴定。结果 CKLF 1原核表达蛋白获得了高表达 ,纯化后获得约 90 %纯度以上蛋白 ,发现其可以与肝素结合 ,生物学活性检测表明其对人中性粒细胞、外周血单个核细胞和大鼠的巨噬细胞具有明显的趋化作用。结论 CKLF
- 王露张颖妹钟英成陈英玉宋泉声马大龙
- 关键词：趋化素样因子1大肠杆菌肝素结合
- 具有多种功能的细胞因子
- 本发明涉及一种编码如SEQ ID NO：2所示氨基酸序列或其片段的多核苷酸，含有所述多核苷酸的基因工程载体和宿主细胞。同时，本发明涉及一种如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列或其片段的多肽及多肽的生产方法。本发明还涉...
- 韩文玲马大龙石爽王应邱晓彦刘雅楠李婷钟英成钟吉张颖妹宋泉声
- 文献传递
- 具有多种功能的细胞因子
- 本发明涉及一种编码如SEQ ID NO：2所示氨基酸序列或其片段的多核苷酸，含有所述多核苷酸的基因工程载体和宿主细胞。同时，本发明涉及一种如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列或其片段的多肽及多肽的生产方法。本发明还涉...
- 韩文玲马大龙石爽王应邱晓彦刘雅楠李婷钟英成钟吉张颖妹宋泉声
- 文献传递
- Nmi及其变异体在大肠杆菌中表达、抗体制备及其细胞分布被引量：3
- 2001年
- 为了检测细胞内源性Nmi和变异体Nmi s的表达、亚细胞分布以及可能形成的信号转导蛋白复合物 ,成功构建并表达了异源Nmi和Nmi s 获得纯化异源蛋白 ,用以制备兔源抗Nmi(Nmi s)多克隆抗体 .Western印迹在多种细胞株HL 60 ,K562 ,2 93T细胞中检测到Nmi(Nmi s)高表达 .在不同的细胞系中 ,Nmi表现为不同的蛋白复合物迁移带 ;Nmi(Nmi s)在胞浆和胞核均存在 ,而核内荧光更强 .Nmi(Nmi s)通过与多种蛋白相互作用行使其生物学功能 ,在不同细胞中可能与不同的蛋白相互作用 ,发挥不同的功能 .
- 莫晓宁孙荣华钟英成张颖妹陈英玉马大龙
- 关键词：NMI变异体蛋白印迹
- 人类新细胞因子CKLFSF2羧基端蛋白在大肠杆菌中的表达纯化、抗体制备与鉴定被引量：1
- 2007年
- 哺乳动物细胞表达的人类新细胞因子——趋化素样因子超家族成员-2(CKLFSF2)存在分泌形式,位于CKLFSF2分子的羧基端,具有细胞趋化作用.为进一步研究CKLFSF2羧基端蛋白的结构和生物学功能及抗体制备,构建了GST-CKLFSF2C51原核表达质粒,经原核表达、亲和层析、凝胶过滤,获得GST-CKLFSF2C51融合蛋白和CKLFSF2羧基端蛋白(CKLFSF2C51),纯度可达到95%以上.GST-CKLFSF2C51融合蛋白用于制备多克隆抗体,ELISA方法检测抗体效价阳性,蛋白质印迹检测CKLFSF2哺乳动物细胞超表达细胞裂解液,获得特异性条带与预期大小一致.CKLFSF2C51经N端测序,质谱鉴定与预期结果一致,该蛋白质具有对PC-3细胞趋化的活性,并且该活性可被制备的多克隆抗体中和.上述结果表明,原核CKLFSF2羧基端蛋白具有与CKLFSF2真核表达蛋白类似的细胞趋化活性,原核CKLFSF2羧基端蛋白制备的多克隆抗体可用于免疫组织化学、蛋白质印迹检测,并能中和CKLFSF2蛋白的趋化活性作用.
- 钟英成石爽张颖妹莫晓宁刘大振宋泉声韩文玲王应
- 关键词：重组蛋白纯化多克隆抗体趋化
