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郝华芳: 作品数：108 被引量：169H指数：7; 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所更多>>; 发文基金：国家科技支撑计划国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>

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一种病料运输袋: 本实用新型属于医疗器械技术领域，涉及一种病料运输袋。本实用新型是由软质材料制成的袋体，该袋体内填充有冷却液，所述袋体为半圆柱状结构，袋体内设置有半圆柱状的容纳腔。本实用新型采用多个相互连接的半圆柱状结构袋体组成病料运输袋...; 赵萍储岳峰贺英郝华芳陈胜利刘永生; 文献传递

山羊支原体山羊肺炎亚种特异性分子检测靶标的鉴定和应用被引量：2: 2020年; 本文旨在筛选出新的山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae,Mccp)特异性分子诊断靶标。首先通过全基因组本地BLASTp方法筛选得到Mccp理论上特异的蛋白基因序列,经BLASTn验证、优选特异性基因92.1作为候选靶标,设计引物92.1F/R,采用普通PCR体系检测4株Mccp(1801、1601、1309F、Zly-14)和7种其他支原体基因组DNA,包括无乳支原体(Ma)PG2、丝状支原体山羊亚种(Mmc)PG3、Mmc YG(前称丝状支原体丝状亚种大菌落型,MmmLC)、绵羊肺炎支原体(Mo)Y98、山羊支原体山羊亚种(Mcc)Ckid、牛支原体(Mb)08M、李奇氏支原体(Ml)PG50,并检测Mccp、Mo、Mmc人工感染羊试验样本DNA,评估该体系的特异性。结果表明92.1F/R引物只能从Mccp菌株及其感染试验样本中扩增出509 bp目的条带,证实该引物可用于检测Mccp,92.1序列可作为CCPP新的核酸诊断靶标,为CCPP诊断和实验室研究提供了一种新的分子标记。; 吴娅琴刘保红袁婷陈芙蔡亚婷郝华芳陈胜利马丽娜刘永生颜新敏储岳峰; 关键词：山羊支原体山羊肺炎亚种引物

4株鸡肾型IBV陕西分离株3种主要结构蛋白基因的遗传变异分析被引量：3: 2014年; 采用RT—PCR方法对近年来本实验室分离的4株肾型IBV陕西分离株的纤突蛋白S1基因、膜蛋白基因（M）和核蛋白基因（N）分别进行扩增，测序后进行遗传变异分析。结果显示：与肾型疫苗株w93相比，各分离株S1基因均存在广泛的点突变，并且都存在基因插入现象，分离株之间氨基酸同源性为75．8％～99．4％；M基因除了存在点突变外，W09和WNl2在其5’端还存在9个核苷酸的缺失，分离株之间氨基酸同源性为91．0％～99．6％；N基N无插入和缺失，但存在基因点突变，分离株之间氨基酸同源性为99．3％～99．5％。4株IBV分离株在S1、M和N基因氨基酸系统进化树上分属于不同的进化群，且都与较早的肾型IBV陕西分离株w118遗传距离较远。结果表明，4株鸡肾型IBV流行毒株的s1、M和N基因均存在不同程度变异，这可能是免疫鸡群肾型鸡传染性支气管炎长期流行的主要原因．; 杨涛张淑霞郝华芳刘青天陈胜利杨增岐王兴龙杜恩岐党如意; 关键词：鸡肾型传染性支气管炎病毒 S1基因 M基因

兔病毒性出血症病毒抗体间接ELISA检测方法的建立被引量：3: 2013年; 建立一种检测兔病毒性出血症病毒(RHDV)抗体的间接ELISA方法。对RHDV陕西分离株VP60基因进行原核表达,Western blot分析表达产物的免疫反应性;以纯化的蛋白为包被抗原建立ELISA方法,并对反应条件进行优化。结果表明,VP60蛋白在大肠杆菌中成功表达,产物约为42.34 ku的融合蛋白,具有良好的反应原性;优化的ELISA最佳工作条件为:重组抗原包被浓度2.9μg/mL,37℃2 h后4℃过夜,1%BSA 37℃封闭2 h,待检血清37℃孵育1 h,酶标抗体1∶10 000稀释,37℃作用1 h,37℃显色5 min,临界值为0.340;建立的ELISA方法特异性强、重复性好、敏感性高;临床检测180份样品,与血凝抑制试验的符合率为74.1%,与商品化试剂盒检测结果符合率为94.8%。该方法可用于临床样品的大批量检测。; 邱立郝华芳王兴龙陈胜利王佳; 关键词：兔病毒性出血症 ELISA

一种气相色谱氢气发生器电解质废液取出装置: 本实用新型公开了一种气相色谱氢气发生器电解质废液取出装置，包括取液瓶，所述取液瓶瓶体顶部设有进液口，瓶体一侧竖直连接有一长柄，长柄上端水平连接有手柄，瓶体外表面设有用于计量瓶内液体的刻度；所述进液口设置有按压式翻盖，所述...; 赵萍储岳峰贺英郝华芳陈胜利刘永生; 文献传递

肾型IBV陕西分离株CK/CH/Shaanxi/2009/H09全基因的克隆与序列分析: 2013年; 为了解鸡肾型传染性支气管炎病毒陕西流行株的分子生物学特征，参考DY07株全基因核苷酸序列设计22对引物，采用RT PCR方法对西北农林科技大学动物医学院禽病研究室分离的1株肾型IBV陕西分离株CK/CH/Shaanxi/2009/H09的全基因进行分段扩增并测序，将测序成功的各序列依次拼接，得到全基因序列后进行序列比对分析。研究结果表明，该分离株基因组全长27 675 bp，共有10个开放阅读框，其基因排序为5′cap Replicase S 3a 3b 3c M 5a 5b N poly（A）3′，纤突蛋白裂解位点为到536RRFRR540， 3a、5a和N基因的大小与参考毒株相比是保守的，但编码其他蛋白的基因长度存在差异；同源性分析结果显示，该毒株与48个参考毒株的同源性为85.2%~93.5%；系统进化树分析结果显示，该毒株与中国分离株ck/CH/LDL/091022、YX10株和DY07 株的亲缘关系较近，同属于中国近年来主要流行的血清型毒株，但在基因水平上已经产生一定程度的变异。; 杨涛张淑霞杨增岐刘青天郝华芳陈胜利杜恩岐王兴龙党如意王晶钰; 关键词：鸡肾型传染性支气管炎病毒全基因

一种比较山羊支原体山羊肺炎亚种菌株毒力的方法: 本发明公开一种简单比较山羊支原体山羊肺炎亚种菌株毒力的方法。发明的方法就将等浓度的经复苏的山羊支原体山羊肺炎亚种接种于鸡胚上，再将接种后的鸡胚置于恒温箱内培养，定时检测鸡胚状态及死亡情况，统计各个菌株的鸡胚致死率，以此进...; 陈胜利储岳峰郝华芳颜新敏刘永生毛婷

牛支原体TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用被引量：9: 2019年; 以牛支原体p80基因为靶基因,设计特异性引物与探针,优化反应体系,建立了牛支原体TaqMan探针实时荧光定量PCR(TaqMan real-time PCR)检测方法,并对该方法进行了特异性、敏感性、重复性评估以及临床样本检测。结果显示,特异性试验中,牛支原体2个菌株Cq值均小于18,其余13个非牛支原体菌株Cq值均大于36;敏感性试验中,最低可检3.89拷贝/μL靶DNA,是普通PCR的10~4倍(普通PCR 3.89×10~4拷贝/μL);重复性试验中,组内、组间重复的变异系数均小于1%;44份牛的临床样品利用TaqMan real time PCR检出6份阳性(阳性率为13.64%),分离培养鉴定检出7份阳性,普通PCR检测全部阴性。本研究建立了一种敏感、特异、稳定的牛支原体TaqMan real time PCR检测方法,可用于牛支原体的快速诊断和核酸定量检测。; 翟肖辉王方国郝华芳颜新敏陈胜利Hussam Askar Mohamad朱建勋储岳峰; 关键词：牛支原体 TAQMAN探针实时荧光定量PCR 敏感性

青海地区牦牛牛支原体核酸检测分析被引量：2: 2022年; 为了解青海地区牦牛牛支原体分子流行情况,本试验采用荧光定量PCR(qPCR)方法对2018-2019年采集青海地区的636份牦牛鼻拭子进行牛支原体核酸检测,并对不同地区、年份、年龄、性别、饲养模式的牦牛牛支原体核酸检测结果进行统计分析。结果显示,牛支原体的总检出率为21.86%(139/636),牛支原体在青海不同地区(海北州、海南州、西宁市、海西州)牦牛群存在不同程度的流行(0%~44%);2018年11月检出率为18.02%,2019年6月检出率26.37%;雌性检出率(27.84%)高于雄性检出率(18.41%),差异性显著(P<0.05);0~2岁的检出率最高,为22.26%,其次为3~6岁,检出率为19.50%,6~12岁检出率最低,为18.03%,差异性显著(P<0.05);放牧养殖模式下检出率最高(34.00%),其次是集约化养殖模式(22.81%),放牧+圈养养殖模式下检出率最低(17.47%),差异显著(P<0.05)。青海不同地区牦牛牛支原体存在不同程度的流行,不同年龄、性别、饲养模式存在统计学差异。本研究为明确青海地区牦牛牛支原体流行情况,为制定合理的防制措施提供了参考数据。; 王方国陈胜利颜新敏郝华芳兰仕梅李章程马丽娜储岳峰曹随忠; 关键词：牦牛牛支原体核酸检测

禽脑脊髓炎病毒VP1蛋白间接ELISA检测方法的建立被引量：3: 2013年; 对AEV陕西分离株VP1基因进行原核表达,采用SDS-PAGE和Western blotting检测表达产物;以纯化的蛋白为包被抗原建立ELISA方法,并对反应条件进行优化。结果表明,VP1蛋白在大肠杆菌中成功表达,产物约为50 000的融合蛋白,具有良好的反应原性;优化的ELISA最佳工作条件为:重组抗原包被质量浓度3.8mg/L,37℃2h后4℃过夜,1%BSA 37℃封闭2h,待检血清1∶50稀释37℃孵育0.5h,酶标抗体1∶4 000稀释,37℃作用30min,底物37℃显色5min,临界值为0.360;建立的ELISA方法特异性强、重复性好、敏感性高;临床检测180份样品,与美国IDEXX公司AEV抗体检测试剂盒检测结果符合率为91.9%。该方法可用于临床样品的大批量检测。; 张淑霞郝华芳杨涛杨增岐王兴龙杜恩岐党如意; 关键词：禽脑脊髓炎 ELISA

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