熊四平
- 作品数：21 被引量：27H指数：4
- 供职机构：中国人民解放军南京军区军事医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金江苏省科技支撑计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 抗EB病毒LMP2A单克隆抗体的制备及免疫学特性分析
- 2014年
- 目的:利用杂交瘤技术制备抗EB病毒潜伏膜蛋白2A(LMP2A)单克隆抗体并分析其免疫学特性。方法:以LMP第2和第5胞外区表位串联制备的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫后小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,制备抗LMP2A的单克隆抗体。通过ELISA、Western blot、免疫荧光、免疫组化、流式细胞术等方法鉴定单抗的免疫学特性。结果:获得1株稳定并持续分泌抗LMP2A单克隆抗体的稳定杂交瘤细胞株,所分泌的单克隆抗体5C12-C4-A6能够特异性识别鼻咽癌细胞膜表面的LMP2A蛋白。结论:本文制备了能够特异性识别鼻咽癌细胞膜表面LMP2A蛋白的单克隆抗体,为进一步进行鼻咽癌临床早期诊断和分子靶向治疗奠定了基础。
- 徐鑫唐小军熊林王欢李文杰高畅熊四平仇镇宁Tan Min HanVo Jess Honganh冯振卿陈仁杰
- 关键词：EB病毒LMP2A单克隆抗体免疫学特性
- 人源抗炭疽保护性抗原PA的抗体IgG及其应用
- 本发明涉及一种抗炭疽保护性抗原的全分子人源单克隆抗体及其应用，该抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。对该全分子人源抗体做功能鉴定和体外细胞中和实验...
- 朱进熊四平冯振卿
- 文献传递
- 人源抗H7N9血凝素中和抗体IgG的制备及鉴定被引量：4
- 2016年
- 目的 :将从全人源Fab噬菌体抗体库筛选获得的抗H7N9血凝素Fab抗体基因进行基因工程改造,以表达全分子抗H7N9血凝素中和抗体Ig G,并验证其对H7N9型禽流感病毒的中和活性。方法:用H7N9型禽流感病毒血凝素筛选全人源Fab噬菌体抗体库,构建全分子Ig G抗体重、轻链表达载体,共转染293 Free Style(293F)细胞,表达并纯化Ig G抗体。应用ELISA及Western blot实验检测抗体免疫学活性,微量中和实验及鸡胚预防保护实验检测其中和活性,血凝抑制试验判断其结合血凝素亚基。结果:成功筛选出1株全人源抗H7N9血凝素Fab抗体基因并构建Ig G真核表达载体。获得的全分子Ig G抗体重、轻链序列正确,并可特异性结合H7N9血凝素。微量中和实验证明其对H7N9型禽流感病毒有良好中和活性,中和滴度为15.6μg/m L。鸡胚预防保护实验显示抗体用量为200μg时可达100%保护率。血凝抑制试验表明其结合血凝素HA2亚基。结论:制备的重组全人源全分子抗H7N9血凝素Ig G抗体可特异性识别H7N9型禽流感病毒血凝素,对H7N9型禽流病毒有显著的中和作用,为进一步研发用于禽流感防治的抗体药物奠定基础。
- 陈雅熊四平唐奇王怡雯耿以如顾慧徐亚如周荧仇镇宁冯振卿朱进
- 关键词：血凝素中和抗体
- 狂犬病病毒糖蛋白在昆虫细胞中的表达及其免疫学特性分析被引量：2
- 2015年
- 目的 :利用Bac-To-Bac杆状病毒昆虫细胞表达系统对狂犬病病毒糖蛋白(rabies virus glycoprotein,RVG)基因进行克隆、表达、纯化,并对重组RVG进行免疫学特性鉴定。方法:参照Gen Bank收录的狂犬病病毒CVS-11株RVG基因序列,设计特异性引物,扩增目的基因。RVG基因经Bam HⅠ/KpnⅠ双酶切后定向克隆到p Fast Bac-GP67B载体上,阳性重组转座质粒进一步转化E.Coli DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选及PCR鉴定后获得重组穿梭载体r Bacmid-RVG,将其转染至对数生长期的Sf-9昆虫细胞,进行重组RVG的真核表达。His-Trap HP纯化目的蛋白,SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。重组RVG免疫小鼠,检测其免疫原性和血清中和活性。结果:用Bac-To-Bac杆状病毒昆虫细胞表达系统表达并纯化了重组RVG,分子量约58 000。经重组RVG免疫后的小鼠血清具有中和活性。结论:重组RVG具有天然RVG的活性,为进一步研制亚单位疫苗及制备筛选中和抗体奠定了基础。
- 王晓蕾陈芳芳袁伟钱国强耿以如张晓杨瑾熊四平陈雅唐奇仇镇宁冯振卿朱进
- 关键词：狂犬病病毒狂犬病病毒糖蛋白纯化抗体
- 人源抗TLR4抗体IgG的制备及其中和特性分析被引量：2
- 2015年
- 目的 :构建全人源抗人Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)抗体轻、重链表达载体,在293Free style细胞中表达并纯化,分析该重组全分子抗体的生物学活性。方法:设计引物扩增全人源抗人TLR4抗体可变区编码序列,将其分别克隆到真核表达载体p FUSE-CHIg-h G1和p FUSE-CLIg-hl中,共转染至293Free style细胞,表达产物用protein A亲和层析柱纯化。应用酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)、Western blot、免疫共沉淀、质谱分析及蛋白芯片检测抗体的免疫学特性,并检测该抗体对人单核细胞淋巴瘤THP1细胞肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α表达的影响。结果:成功构建全人源抗人TLR4抗体真核表达载体,获得的全分子抗TLR4抗体保持了与抗原的结合活性,对THP-1细胞TNF-α表达的抑制率可达85.7%。结论:重组全人源抗TLR4 Ig G保持了与TLR4的结合特异性,并具有明显的中和作用,对炎症治疗具有潜在的应用价值。
- 杨瑾唐奇熊四平蔡炳刚朱旭辉王长军汪茂荣冯振卿朱进
- 关键词：TOLL样受体4中和抗体
- 全人源抗狂犬病病毒G蛋白单链抗体制备及中和活性鉴定被引量：5
- 2013年
- 目的:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,筛选针对狂犬病病毒G蛋白不同表位的单链抗体(scFv)并鉴定其中和活性。方法:分离130例经狂犬病疫苗免疫接种志愿者的外周血淋巴细胞,提取总RNA,逆转录制备cDNA,构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库。以纯化的狂犬病病毒G蛋白包板筛选,对阳性克隆进行可溶性表达,并鉴定中和活性。结果:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,库容为5.0×107,经核酸序列分析,证实插入片段为scFv。经过5轮筛选,从富集的次级抗体库中随机挑出140个克隆,通过phage-ELISA鉴定得到4株核酸序列不同的scFv抗体。经His-Trap纯化后进行中和活性鉴定,获得1株有中和活性的scFv,其中和效价为0.13 IU/mg。结论:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,获得1株具有中和活性的抗狂犬病病毒G蛋白scFv抗体,为进一步研发狂犬病治疗性抗体药物奠定了基础。
- 张倩倩赵茜张晓丁贵鹏金秋高畅熊四平陈玉平朱进冯振卿
- 关键词：噬菌体抗体库中和活性
- 一种全人源抗TLR4的抗体Fab及其全分子抗体IgG和应用
- 本发明涉及一种全人源抗TLR4的抗体Fab及其全分子抗体IgG和应用，该全分子抗体IgG轻链的氨基酸序列为SEQ ID NO.11所示，重链的氨基酸序列为SEQ ID NO.12所示。体外实验结果表明，本发明的全人源抗T...
- 唐奇熊四平朱进冯振卿汪茂荣
- 文献传递
- 人源化抗炭疽保护性抗原PA的抗体及应用
- 人源化抗炭疽保护性抗原PA的抗体及应用，所述抗体的重链可变区具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列，轻链可变区具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列；重链恒定区具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列，轻链恒定区具有SEQ...
- 朱进熊四平唐奇冯振卿
- 文献传递
- 炭疽杆菌致死因子LF253的制备及活性分析
- 2015年
- 目的 :制备具有生物学活性的重组致死因子253(lethal factor 253,LF253)抗原,获得纯化的目的蛋白,检测其与全分子致死因子(lethal focfor,LF)蛋白竞争性结合保护性抗原(protective antigen,PA)的能力。方法:PCR扩增致死因子LF253片段的DNA,将目的基因插入p ET-28a(+)表达载体中,利用大肠杆菌BL21(DE3)作为宿主菌,IPTG诱导重组蛋白表达,通过His标签亲和层析柱获得目的蛋白,Western blot和ELISA法检测蛋白抗原性,Biacore T-100测定重组蛋白与保护性抗原PA结合的亲和力,细胞毒性实验检测其生物学活性。结果:成功构建原核表达载体p ET-28a/LF253,诱导获得重组蛋白s LF253的表达。Western blot和ELISA检测结果证实,该重组蛋白具有良好抗原特异性;细胞毒实验结果表明,重组蛋白可在体内外中和致死毒素引起的生物学效应。结论:本研究制备的融合蛋白s LF253能够与保护性抗原PA结合,可竞争性抑制LF全分子蛋白与PA的聚合,阻断炭疽毒素的致死作用,为今后炭疽疫苗等药物的研发奠定了基础。
- 许小明郑峰周婷婷熊四平刘鹏王长军冯振卿周玮朱进
- 关键词：炭疽活性分析
- 人源抗TROP2全分子抗体IgG的真核表达及对胰腺癌细胞增殖的抑制作用被引量：2
- 2014年
- 目的:以人源抗TROP2抗体Fab基因为模板,构建人源抗TROP2全分子抗体IgG真核表达系统,观察人源抗TROP2全分子抗体IgG对胰腺癌细胞增殖的抑制作用。方法:分别扩增抗TROP2抗体的重链和轻链基因,构建人源抗TROP2全分子抗体IgG的重组表达载体pWS-anti-TROP2,转染CHO dhfr-细胞,加MTX筛选抗体表达量高的单克隆株,Protein G亲和柱纯化,获得人源抗TROP2全分子抗体IgG。SDS-PAGE、Western blot、ELISA、免疫荧光和流式细胞术等方法鉴定人源抗TROP2全分子抗体IgG并分析其免疫学活性。MTT法分析人源抗TROP2全分子抗体IgG对胰腺癌细胞BxPC-3的增殖抑制作用。结果:成功构建了人源抗TROP2全分子抗体IgG的真核表达系统,表达并纯化人源抗TROP2全分子抗体IgG。经鉴定,抗体的轻链与重链大小与预期一致,可与TROP2蛋白特异性结合,效价可达1∶6 400。MTT检测结果表明,人源抗TROP2全分子抗体IgG对胰腺癌BxPC3细胞的增殖有明显的抑制作用,且呈时效、量效依赖关系。结论:本研究成功构建了人源抗TROP2全分子抗体IgG的真核表达系统,并证明此抗体可特异性识别胰腺癌细胞表面的TROP2蛋白,且对胰腺癌细胞的增殖有明显的抑制作用。
- 王欢刘琼琼唐小军徐鑫褚楚熊四平郑峰童华朱进冯振卿林红
- 关键词：真核表达系统CHO胰腺癌
