杨迷芳
- 作品数：17 被引量：21H指数：3
- 供职机构：南京医科大学附属口腔医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金南京医科大学科技发展基金江苏省高校自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- PGC-1α-shRNA慢病毒载体对牙髓干细胞分化的影响被引量：1
- 2011年
- 目的:构建过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(peroxisome proliferators activated receptor γ coactivator 1α,PGC-1α)短发夹RNA(short hairp in RNA,shRNA)慢病毒表达载体,体外评价其对牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSC)分化的影响。方法:根据shRNA设计原则,设计合成用于体内干扰PGC-1α编码序列的shRNA,重组入慢病毒载体PLKO.1。将构建正确的PLKO.1/PGC-1α-shRNA感染DSPC,实时荧光定量PCR检测PGC-1α的表达,细胞化学染色和实时荧光定量PCR检测其对DPSC分化的影响。结果:测序证实重组质粒构建成功;体外试验表明,DPSC转染了PGC-1α-shRNA后PGC-1α表达水平降低,干扰效率达81%,而且细胞钙化结节增多,牙本质涎磷蛋白和Ⅰ型胶原的表达明显上调,与对照组相比具有显著性差异(P<0.05)。结论:慢病毒介导的PGC-1α-shRNA成功在体外抑制了目的基因的表达,并影响牙髓干细胞的分化。
- 王子露曹灵郑阳玉杨迷芳王舒舒于金华
- 关键词：短发夹RNA慢病毒载体牙髓干细胞
- 倒置显微镜专用观察非平面金属材料样本的固定装置
- 本实用新型提供一种倒置显微镜专用观察非平面金属材料样本的固定装置，包括上定位件和下定位件，上定位件包括上拧盖和定位凸柱，上拧盖设于定位凸柱的端部，定位凸柱设有外螺纹，下定位件包括下托槽和观察孔，下托槽设有与定位凸柱的外螺...
- 杨迷芳王琰玲蒋玲玲王珏胡伟李敏谭明娟
- 文献传递
- 微小RNA-29b体外抑制皮肤成纤维细胞胶原蛋白1的研究被引量：4
- 2011年
- 目的探讨微小RNA-29b（miR-29b）如何参与皮肤成纤维细胞胶原蛋白1的表达调控。方法应用生物信息学平台预测靶向胶原蛋白1的miRNA。转染miR．29b模拟物和抑制剂48h后，应用定量逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）和Westernblot检测胶原蛋白1-α1和以的表达。应用荧光素报告酶实验验证胶原蛋白1是否受miR．29b直接调控。结果miR-29b过表达降低胶原蛋白1-α mRNA56，8％／蛋白51．6％、以mRNA47．8％／蛋白40．8％。抑制miR．29b表达增强胶原蛋白1-αmRNA4．4倍／蛋白3．6倍、0L2mRNA2．2倍／蛋白1．7倍。体外共转染报告载体和模拟物后显著降低报告载体的荧光素酶活性，分另0达52．1％和43．4％。且差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论miR-29b是参与皮肤成纤维细胞胶原蛋白1的转录后调控分子之一。
- 王琰玲王子露杨迷芳程杰吴煜农
- 关键词：成纤维细胞微小RNA转录
- 重组细胞致死性扩张毒素CdtB、其表达载体及其制备方法
- 本发明提供一种能原核表达cdtB基因的原核表达质粒pET-15b-cdtB构建方法，并经转化大肠杆菌感受态细胞TOP10和BL21(DE3)，IPTG诱导，体外诱导表达蛋白CdtB，该蛋白有望作为蛋白药物应用于肿瘤等疾病...
- 徐艳李璐杨迷芳王晓茜段君兰
- 文献传递
- 伴放线放线杆菌cdtB基因克隆及其表达蛋白的体外生物学活性检测被引量：4
- 2010年
- 目的 体外构建伴放线放线杆菌（Actinobacillus actinomycetemcomitans,Aa）CdtB蛋白的原核表达载体并诱导其表达,通过变性、复性获得有Ⅰ型脱氧核糖核酸酶（deoxyribonuclease Ⅰ,DNase Ⅰ）样活性的重组CdtB蛋白,为进一步研究AaCdtB的功能以及Aa细胞致死性扩张毒素三聚体全毒素在牙周炎发生、发展过程中的分子致病机制奠定基础.方法 以AaATCC29522基因组DNA为模板,采用聚合酶链反应（PCR）法获得cdtB基因,经双酶切、连接的定向克隆技术构建原核表达载体pET-15b-cdtB.转化大肠杆菌感受态细胞BL21（DE3）,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导CdtB蛋白表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）及蛋白质印迹法检测并鉴定蛋白表达.纯化的重组CdtB体外与超螺旋质粒（pET-32a）DNA孵育,观察其生物学活性.结果 经测序鉴定,构建的原核表达载体pET-15b-cdtB转染的感受态大肠杆菌携带有cdtB基因,该基因片段与GenBank中已收录的AacdtB基因序列一致性高达99%.SDS-PAGE观察到32 000左右的高表达蛋白条带,蛋白质印迹法发现带有6个组氨酸蛋白标签标记的目的 蛋白CdtB.超螺旋质粒DNA与CdtB体外孵育后发生了解螺旋现象.结论 本项研究成功构建了AaCdtB的原核表达载体并诱导CdtB蛋白的体外表达,获得了具有DNaseⅠ样活性的重组CdtB蛋白.
- 李璐段君兰王晓茜杨迷芳徐艳
- 关键词：基因克隆
- 小鼠黑素瘤细胞系分泌的外泌体促进间充质基质细胞增殖和迁移被引量：3
- 2016年
- 目的研究黑素瘤来源的外泌体（exosome）如何与微环境相互作用。
方法分离并鉴定小鼠黑素瘤细胞培养液上清中的外泌体，并与间充质基质细胞（MSC）共培养。利用免疫荧光观察细胞摄入外泌体情况，CCK-8及transwell实验测定MSC增殖与迁移的变化情况，Western blot检测外泌体对MSC的α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的影响。
结果发现MSC在摄取外泌体后，增殖和迁移能力显著上升，α-SMA的表达明显上调。且这些变化都可被TGF-β受体的抑制剂阻断。
结论外泌体可能通过TGF-β诱导MSC构建微环境，促进黑素瘤的生长与转移。
- 曹蕾杨迷芳平锋锋田田王磊
- 关键词：外泌体黑素瘤Α平滑肌肌动蛋白
- 用于流式管的样本过滤装置
- 本实用新型提供一种用于流式管的样本过滤装置，包括手柄、定型组件和过滤网，过滤网采用倒圆锥型过滤网，定型组件包括固定圈、若干连接柱和定型圈，过滤网的端部设有固定圈，固定圈设有手柄，过滤网的中部设有定型圈，固定圈与定型圈同心...
- 杨迷芳胡伟谭明娟
- 文献传递
- cdt基因亚基cdtA的克隆及其原核表达载体的构建被引量：1
- 2009年
- 目的:进行伴放线放线杆菌(Actinobacillus actinomycetemcomitans,Aa)cdtA基因的克隆并构建其原核表达载体,为进一步研究CdtA蛋白功能以及CDT全毒素的功能做准备。方法:从AaATCC29522中通过PCR获得cdtA基因片段,克隆到中间载体pMD19-TVector中,再经双酶切得到cdtA片段克隆到原核表达载体pET-15b中,得到融合表达载体pET-15b-cdtA。结果:成功构建pET-15b-cdtA,经PCR鉴定以及测序鉴定插入cdtA基因序列正确,阅读框架完整,未发现突变。结论:成功克隆了cdtA基因,并在原核载体上得以表达。
- 李璐徐艳王晓茜杨迷芳段君兰
- 关键词：原核表达载体
- rhIL-1α/rhTGF-β1诱导下大鼠髁突软骨细胞PRG4的表达被引量：4
- 2010年
- 目的:观察rhTGF-β1对rhIL-1α作用下大鼠髁突软骨细胞蛋白多糖4(PRG4)表达的影响。方法:酶消化法获取髁突软骨细胞,甲苯胺蓝染色鉴定。细胞上清液中加入10ng/ml的rhIL-1α,48h后加入10ng/ml的rhTGF-β1。不同时间点应用RT-PCR检测PRG4mRNA的表达情况,ELISA法检测PRG4蛋白的分泌变化。结果:加入rhIL-1α24、48、72h组的PRG4表达量与对照组均有统计学差异(P<0.05),且逐渐降低。48h组再加入rhTGF-β124h后PRG4表达量与对照组无统计学差异(P>0.05),而48h后与各组均有统计学差异(P<0.05),且最高。结论:rhTGF-β1可以上调髁突软骨细胞PRG4的表达,且可逆转IL-1α的下调作用。
- 魏红程杰王子露杨迷芳王琰玲
- 关键词：髁突软骨细胞白细胞介素-1Α
- 用于加力板的裁膜定位装置
- 本实用新型提供一种用于加力板的裁膜定位装置，本装置适用于Flexcell<Sup>®</Sup>的6孔加力板。本定位装置包括底座和若干支撑单元，每个支撑单元包括单个托架，托架与加力板的膜孔一一对应设置，托架的一端均垂直设...
- 蒋玲玲杨迷芳马兰胡伟李敏谭明娟
- 文献传递
