朱敏生
- 作品数：63 被引量：75H指数：4
- 供职机构：南京大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金南京市医学科技发展项目教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Duchenne型肌营养不良症药物筛选模型的构建被引量：1
- 2006年
- 建立一种能方便检测utrophin表达的方法,制备筛选Duchenne肌营养不良症治疗药物的细胞模型。将Utrophin基因上18号和19号外显子及其周围约6.7kb的DNA,分三段克隆下来,并将TETC报告基因插入插入片段Ⅰ(其中的18号外显子)中,构建打靶基因。经过电转化的方法,将测序正确的打靶基因转染到C2C12细胞株中。经G418筛选,FlAsH荧光染色,PCR扩增鉴定得到正确同源重组的细胞株。为筛选utro-phin表达促进剂建立了细胞模型,为筛选DMD治疗药物打下基础。
- 潘英钱之玉孙勇军沈月王晓春朱敏生
- 关键词：DUCHENNE肌营养不良症抗肌萎缩蛋白UTROPHIN报告基因同源重组
- N-IL_2对S_(180)实体瘤抑制作用的实验研究被引量：3
- 1989年
- 向S_(180)实体肉瘤体内注射自然培养的人白细胞介素Ⅱ(N-IL2),结果能抑制肿瘤的生长和提高荷瘤鼠NK细胞的活性。当剂量为20IU、1O01U、200IU时,肿瘤四倍体积的生长延迟时间分别为0.4、2.9,2.7天。治疗后第4天,小鼠尾静脉血的淋巴细胞比例分别为64·8％、59.0％、60.5％,与对照组比较均有显著性差异。荷瘤鼠瘤体内注射N-IL2后第4天,其脾NK细胞活性随剂量的加大而增加,并与肿瘤的抑制程度呈平行关系。
- 朱敏生虞冠华丁树标施风霞朱有华许祥裕
- 关键词：白细胞介素实体瘤
- 长肌球蛋白轻链激酶的5DFRXXL序列促使肌动蛋白聚集成束
- 2005年
- 长肌球蛋白轻链激酶(L-MLCK)含有5个DFRXXL序列,可与丝状肌动蛋白(F-actin)结合.结合动力学结果提示,一个DFRXXL序列可与F-actin中的一个单体结合,但其生物学意义仍不清楚.L-MLCK的5DFRXXL序列既然含有多个actin的结合位点,推测有可能它通过该序列发挥一个F-actin成束蛋白的作用.为此,体外表达并纯化了HA标记的重组5DFRXXL蛋白,并通过结合动力学实验分析了重组5DFRXXL蛋白与肌丝或F-actin的结合特征,结果表明,重组5DFRXXL蛋白与F-actin和肌丝均具有较高的亲和力,其中与肌丝的结合常数KD为0.45μmol/L,与F-actin的结合常数为0.41μmol/L.通过交联实验发现,重组5DFRXXL蛋白可以有效地交联F-actin并使其形成大分子聚集物.应用激光共聚焦和电子显微镜方法观察到该聚集物具有典型的F-actin蛋白束结构.将5DFRXXL的表达质粒转染真核细胞后,可见5DFRXXL能促使细胞边缘的“微绒毛”结构形成,可能与5DFRXXL聚集F-actin的活性有关.这些结果表明,L-MLCK除能通过其磷酸激酶活性控制细胞收缩外,还可能作为一个新的F-actin成束蛋白影响细胞骨架形成.
- 杨春香魏冬梅陈晨余卫平朱敏生
- 关键词：肌球蛋白轻链激酶肌动蛋白F-ACTIN
- 重组载体pLNCX/iNOS的构建及其在NIH3T3细胞中滴度的测定
- 2002年
- 目的 :构建重组质粒pLNCX/iNOS。方法 :用PCR技术从pCMV/iNOS质粒中扩增出iNOS全长cDNA ,与逆转录病毒pLNCX构建重组质粒pLNCX/iNOS ;通过脂质体介导把重组质粒转染入包装细胞PA3 17中 ,经G418筛选出抗性克隆。通过NIH3T3细胞测定病毒滴度。结果 :经过酶切分析和核苷酸序列分析鉴定重组质粒构建正确。G418筛选出 16个抗性克隆 ,能稳定合成并分泌重组逆转录病毒颗粒。NIH3T3细胞测定病毒滴度为 2 .1×10 4CFU·ml-1。结论
- 陈宝安朱梁军朱敏生潘英杜娟陈苏宁王骏邵泽叶
- 关键词：逆转录病毒基因转染NOS
- 真核表达载体pIRES2-DsRed2-Hath1的构建及其在HEK293T细胞中的表达被引量：2
- 2007年
- 目的构建真核表达载体pIRES2-DsRed2-Hath1,并验证其在HEK293T细胞中的表达。方法从人的全血标本中提取DNA模板,经PCR获得Hath1-cDNA,将Hath1-cDNA和pIRES2-DsRed2质粒用限制性内切酶XhoⅠ、EcoRⅠ双酶切,酶切产物琼脂糖凝胶电泳,割胶纯化,前者回收1065bp片断,后者回收大片断,再将回收的2个片断用T4DNA连接酶连接,转化感受态DH5α细胞,挑选单克隆,提取质粒,将所提取的质粒双酶切鉴定并测序。再将构建成功的pIRES2-DsRed2-Hath1质粒通过脂质体LipofectamineTM2000转染HEK293T细胞,观测其转染情况和目的基因的表达情况。结果成功地构建了真核表达载体pIRES2-DsRed2-Hath1,该质粒能有效地转染HEK293T细胞,目的基因能有效表达。结论pIRES2-DsRed2-Hath1的构建为Hath1基因转染致聋小鼠的耳蜗的实验奠定了基础。
- 陈杰高下朱敏生张文程麻晓峰顾香芳
- 关键词：基因克隆真核表达载体脂质体
- Lipofectamine ^(TM)2000介导pIRES2-EGFP-NT3转染新生小鼠离体耳蜗基底膜的实验研究被引量：7
- 2007年
- 目的构建真核表达质粒载体pIRES2-EGFP-NT3,检测其在阳离子脂质体介导下对新生小鼠离体耳蜗基底膜的转染情况。方法构建含有目的基因NT3的真核表达质粒载体pIRES2-EGFP-NT3后,在阳离子脂质体LipofectamineTM2000介导下将其转染新生小鼠离体耳蜗基底膜培养组织,转染后24 h,通过Confocal显微镜观察小鼠离体耳蜗基底膜的转染情况和转染效率。结果成功构建了真核表达质粒载体pIRES2-EGFP-NT3,通过阳离子脂质体LipofectamineTM2000介导,该质粒在新生小鼠离体耳蜗基底膜转染的范围内转染进17个细胞,说明该质粒在阳离子脂质体介导下能转染新生小鼠离体耳蜗基底膜培养组织。结论含有目的基因NT3的真核表达质粒载体pIRES2-EGFP-NT3的成功构建,及其在阳离子脂质体介导下对新生小鼠离体耳蜗基底膜培养组织的有效转染,为研究NT3基因转染对正常及致聋小鼠耳蜗效应的实验奠定了基础。
- 陈杰高下朱敏生张文程麻晓峰顾香芳
- 关键词：耳蜗
- 胸腺细胞在培养肌肉干细胞中的用途
- 本发明涉及胸腺细胞在培养肌肉干细胞中的用途。本发明提供胸腺细胞、其培养物、分泌物和/或其提取物在促进肌肉再生和/或修复、增加肌肉纤维的数量、增加肌肉干细胞的数量、抑制骨骼肌衰老等中的用途。本发明发现，由胸腺细胞制备的条件...
- 朱敏生
- 一种基于MYPT1基因敲除建立新型高血压小鼠模型的方法及其用途
- 本发明提供了一种通过MYPT1基因敲除而建立的新型高血压小鼠模型的方法。这个高血压小鼠模型是通过在平滑肌中特异性剔除MYPT1基因，提高MYPT1底物肌球蛋白调节轻链(RLC)的磷酸化水平，从而导致外周血管阻力增大，小鼠...
- 朱敏生乔艳宁何伟奇
- 文献传递
- 以pMSEx-1作为共转染质粒观察人NF-IL6过量表达对NIH3T3细胞成瘤性的影响被引量：1
- 1998年
- 我们曾以ｐＳＶ２ｎｅｏ作为共转染质粒观察到ＮＦＩＬ６具有转化基因活性。本文以ｐＭＥＳｘ１（含ｎｅｏ抗性基因）质粒作为共转染质粒，发现能表达有义ＮＦＩＬ６的ＮＩＨ３Ｔ３转染子，可同时出现转化形态的克隆和扁平形态的克隆，二者比例６∶４，且ＮＦＩＬ６的表达状态相似。我们提出，ＮＦＩＬ６在ＮＩＨ３Ｔ３细胞表现为转化基因活性时，作用方式具有随机性。本文还提出。
- 朱敏生刘定干刘定干
- 关键词：转化基因肿瘤发生
- 诱生型一氧化氮合成酶N端蛋白的诱导表达与纯化被引量：1
- 1998年
- 诱生型一氧化氮合成酶（ｉＮＯＳ）Ｎ端蛋白的表达，对阐明其功能和制备ｉＮＯＳ特异性抗体具有重要意义。本文对ｉＮＯＳ１１９６ＡＡ重组蛋白在大肠杆菌中的表达条件进行了优化，结果表明：在优化条件下，经ＩＰＴＧ诱导，重组蛋白表达量可达菌体蛋白的１５％２０％。为获得重组蛋白纯品，建立了Ｈｉｓ．ＢｉｎｄＴＭ柱亲和层析法和凝胶蛋白的两步纯化法。
- 潘英钱之玉许祥裕朱东亚朱有华朱东亚朱有华朱敏生
- 关键词：诱生型一氧化氮合成酶蛋白纯化
