张顺
- 作品数：5 被引量：11H指数：2
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 痘苗病毒/T7 RNA聚合酶辅助的原核基因在真核细胞中的表达(英文)
- 2011年
- 痘苗病毒/T7RNA聚合酶这一瞬时表达系统由于具有很多优于其他表达系统的特点而被广泛地应用于表达外源蛋白。TB-Chen株轮状病毒的VP6 DNA编码片段插入到原核质粒pETL的噬菌体T7启动子和终止子之间,获得重组表达质粒pET-VP6。构建好的重组表达质粒pET-VP6通过脂质体转染到真核细胞MA104中,用携带噬菌体T7RNA聚合酶基因的重组痘苗病毒vTF7-3再感染,可在细胞检测到目的蛋白VP6的表达。研究结果还显示,痘苗病毒vTF7-3感染后,细胞病变较快,严重影响了蛋白的表达量。结果提示,如果能降低痘苗病毒vTF7-3的致细胞病变作用而不影响其在细胞中合成T7 RNA聚合酶的能力,蛋白可能会得到高效表达。为进一步研究VP6基因的特性及更好地应用痘苗病毒/T7 RNA聚合酶这一瞬时表达系统提供理论基础。
- 潘小霞张顺文喻玲袁静陈元鼎
- 关键词：真核细胞T7RNA聚合酶
- A组人轮状病毒VP3基因的原核表达及鉴定被引量：2
- 2012年
- 目的克隆并原核表达A组人轮状病毒(Rotavirus,RV)TB-Chen株结构蛋白VP3基因,并进行分子系统进化和基因分型。方法采用PCR法扩增A组人轮状病毒TB-Chen株VP3编码基因,克隆至pETL载体上,构建重组原核表达质粒pET-VP3,转化大肠杆菌BL21(DE3),并进行表达。表达的重组蛋白经SDS-PAGE及Western blot鉴定后,对VP3基因进行分子系统进化及基因型分析。结果重组表达质粒pET-VP3经双酶切及测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为98 000,以包涵体形式存在;重组VP3蛋白可被抗SA11株全病毒豚鼠免疫血清识别;迄今发现的A组RV VP3可分为7个基因型,TB-Chen株和SA11株VP3基因分别属于M2型和M5型。结论成功原核表达了A组人RV TB-Chen株VP3蛋白,为进一步研究VP3的结构功能及开发新型RV疫苗、诊断试剂和治疗药物奠定了基础。
- 张顺潘小霞袁静文喻玲陈元鼎
- 关键词：轮状病毒属VP3基因原核细胞基因分型
- 乙型肝炎病毒基因型的全球分布及相关研究进展被引量：3
- 2011年
- 乙型肝炎（简称乙肝）是由乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）感染引起的人类急性和/或慢性肝脏疾病。全世界大约20亿人已感染HBV,其中超过3.6亿人为慢性乙肝患者,并有罹患肝硬化和肝癌的高风险。
- 袁静潘小霞张顺陈元鼎
- 关键词：乙型肝炎病毒基因型地理分布
- 轮状病毒VP_6蛋白免疫学研究进展被引量：8
- 2011年
- 轮状病毒(Rotavirus,RV)是引起婴幼儿急性胃肠炎的主要致病病原体之一。作为主要结构蛋白和组抗原蛋白的VP6,在病毒复制过程中具有重要的生物学意义。近年研究发现,VP6在免疫保护反应方面也发挥较重要的作用。现就VP6蛋白的生物学和免疫学研究最新进展,以及其在研制RV重组疫苗中的潜在应用价值作一简要评述。
- 潘小霞张顺陈元鼎
- 关键词：轮状病毒免疫学性质疫苗
- 增强型绿色荧光蛋白基因与轮状病毒VP6基因融合表达载体的构建及表达
- 2011年
- 目的构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与轮状病毒(RV)VP6基因融合表达载体,研究融合蛋白表达及在细胞中的分布。方法提取A组人RVTB-Chen株VP6基因,用PCR扩增VP6编码cDNA片段。将此基因片段与真核表达载体pEGFP-C1携带的EGFP融合;运用脂质体的方法 ,将获得的重组质粒转染到MA104细胞中,在荧光显微镜下观察蛋白的表达及其在细胞中的分布情况。结果成功构建了融合表达质粒;转染细胞后,融合蛋白可在MA104细胞中表达且主要分布在胞质中。结论 RVVP6可与EGFP融合表达,融合蛋白在细胞质中呈均匀的分布,与RV感染细胞中合成的VP6蛋白的分布有较大的差别。
- 潘小霞张顺袁静文喻玲陈元鼎
- 关键词：轮状病毒属基因融合绿色荧光蛋白质类生物医学研究
