张坤
- 作品数：7 被引量：31H指数：3
- 供职机构：第四军医大学基础医学部神经科学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 食用黑米替代墨汁灌注测定大鼠排便时间方法的建立被引量：1
- 2006年
- 目的:建立食用黑米替代墨汁测定大鼠排便时间的方法.方法:SD大鼠10只随机分为A组:应用墨汁灌胃;B组:食用黑米饲料.测定两组大鼠首粒便排出时间;6h内排便粒数及便粒颜色.结果:两种方法测得两组大鼠首粒排便时间(475.0±55.4vs524.2±22.6,P>0.05)及6h内排便粒数(11.8±2.2vs9.8±3.0,P>0.05)均无差异;B组(黑米组)比A组(墨汁组)的便粒颜色黑,且实验组便粒的颜色均一.结论:食用黑米测定排便时间的方法可以替代墨汁灌注测定排便时间的方法.
- 谢甲琦于蒲张坤戴竞耀刘利兵
- 关键词：排便时间墨汁黑米
- M1//M2型炎症环境对小鼠脊髓神经干细胞分化的影响
- 损伤脊髓后的内环境不足以支持NSC向神经元方向分化，从而无法补充因损伤所失去的神经元。不同于脑中的NSC主要存在于侧脑室下区（subventricular zone，SVZ）和海马齿状回的颗粒下区（Subgranular...
- 张坤
- 关键词：神经干细胞星形胶质细胞少突胶质细胞
- 文献传递
- 弱激光照射对小鼠骨髓来源巨噬细胞极化的调控作用被引量：5
- 2016年
- 目的研究不同能量参数的810 nm弱激光照射对于巨噬细胞极化状态的影响。方法体外分离、培养BALB/c小鼠来源的骨髓巨噬细胞,应用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)条件性培养基培养的骨髓细胞,流式细胞术检测F4/80表达鉴定培养结果。脂多糖-γ干扰素(LPS-IFN-γ)刺激进行M1细胞极化诱导,反转录PCR检测诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、精氨酸酶1(Arg1)、CD86 mRNA水平,Western blot法检测i NOS和Arg1蛋白水平。应用(1、2、3、4)J/cm2的810 nm弱激光对体外培养的M1细胞进行照射,MTT法检测细胞增殖,免疫荧光细胞化学染色检测i NOS、Arg1的表达,反转录PCR检测M1细胞i NOS、Arg1 mRNA水平,Western blot法检测M1细胞i NOS、Arg1蛋白水平。结果流式细胞术结果证明分离细胞的F4/80阳性率达99.9%。骨髓源性巨噬细胞在LPS-IFN-γ刺激下,高表达i NOS和CD86 mRNA。Western blot法检测发现,给予极化刺激后,骨髓源性巨噬细胞高表达i NOS和CD86蛋白。不同能量的弱激光照射M1型巨噬细胞,MTT法检测发现,(1、2、3)J/cm2弱激光刺激时,M1细胞活力与对照组比较无显著性差异;4 J/cm2刺激时,M1细胞活力降低。免疫荧光细胞化学染色显示,与对照组比较,(1、2)J/cm2照射时,M2型巨噬细胞标志物Arg1阳性细胞数无明显差异,照射剂量为(3、4)J/cm2时,Arg1阳性细胞数显著增多,M1型巨噬细胞标志物i NOS阳性细胞数显著减少。与对照组比较,照射剂量为(1、2)J/cm2时,i NOS及Arg1 mRNA和蛋白表达水平无明显变化,在照射剂量为(3、4)J/cm2时,i NOS mRNA和蛋白水平表达下降,Arg1 mRNA和蛋白水平表达升高。结论 (1、2)J/cm2的810 nm弱激光对于M1型巨噬细胞活力及极化无影响。照射剂量为3 J/cm2时,M1型巨噬细胞可向M2型巨噬细胞极化,且细胞活性无明显变化。但照射能量为4 J/cm2时,M1型细胞虽然可向M2型细胞极化但同时伴有细胞活性降低。
- 戴晨宋基伟梁卓文张倩张坤王哲胡学昱
- 关键词：脊髓损伤
- miR-9和miR-124共表达载体的构建与靶分子鉴定
- 2015年
- 目的构建miR-9和miR-124单独表达和串联共表达的真核表达载体,并鉴定其共同靶分子。方法将pri-miR-9和pri-miR-124的编码序列分别插入或串联后插入真核表达载体p CAG,转染He La细胞后,实时定量PCR鉴定成熟miRNA的表达水平。构建miR-9和miR-124分子完全互补的靶基因萤光素酶报告载体,双萤光素酶报告系统检测表达的成熟miRNA的生物学功能。利用生物信息学软件预测miR-9和miR-124的共同靶分子,将靶分子mRNA的3'非翻译区(UTR)克隆入p GL3luciferase报告基因载体中,观察转染细胞后miRNA对报告基因表达的影响。结果经测序及酶切鉴定证实3种miRNA表达载体构建完全正确,实时定量PCR检测表明这3种表达载体均能正确高表达成熟的miRNA。双萤光素酶报告系统检测证实3种载体表达的miRNA分子具有生物学活性。生物学软件预测发现小分子GTP结合蛋白Ras相关蛋白2a(Rap2a)是miR-9和miR-124的靶基因,成功构建了含有Rap2a 3'UTR的萤光素酶报告基因载体。双萤光素酶报告系统提示miR-9和miR-124均能抑制Rap2a的表达。结论成功构建了miR-9和miR-124的单独表达和共表达载体,并能高表达具有生物学活性的成熟的miR-9和miR-124分子。Rap2a可能是miR-9和miR-124的一个共同靶分子。
- 薛茜王琰张坤赵湘辉田婉莹杨安钢鞠躬王键
- 关键词：MIRNA脊髓损伤
- 食用香蕉对长期服用番泻叶大鼠所致副作用的改善作用
- 2006年
- 目的:观察食用具有润肠通便、止泻止痢、预防消化道溃疡作用的香蕉是否可以减轻大鼠长期服用番泻叶引起的副作用。方法:实验于2005-03/07在解放军第四军医大学基础部教学实验中心实验室完成。①选用SD大鼠18只。随机分为3组:番泻叶组[灌胃番泻叶浸液(番泻叶购自西安中药集团公司葆露堂连锁店,准确称取番泻叶5g,加水50mL,直火煎煮15min后冷却,过滤,将浸液定容至50mL)10mL/(kg·d),1次/d,共12d],香蕉组[香蕉购自西安市朝阳门爱家超市,番泻叶浸叶灌胃10mL/(kg·d),1次/d,同时进食香蕉200g/(kg·d),共120d],正常组(正常饲养,共120d),每组6只。②每组干预90d后测血钾浓度。干预120d后,于大鼠饥饿24h后,喂饲黑米饲料,记录从食用黑米饲料到大鼠首粒黑便的排出时间(排便时间),测定白细胞计数,取结肠标本作苏木精-伊红染色观察。③计量资料差异比较采用单因素方差分析,均数间的两两比较采用LSD-t检验。结果:大鼠18只大鼠均进入结果分析。①血钾水平:番泻叶组明显低于香蕉组和正常组(P<0.01),香蕉组和正常组差异不明显(P>0.05)。②排便时间:番泻叶组明显长于正常组和香蕉组(P<0.05),香蕉组明显短于正常组(P<0.01)。③白细胞计数:番泻叶组明显低于香蕉组和正常组(P<0.01),香蕉组和正常组大鼠差异不明显(P>0.05)。④结肠病理切片显示:番泻叶组的肠黏膜局部出现表浅糜烂,绒毛水肿,间质淋巴细胞浸润较多。香蕉组与番泻叶组相比病变较轻。结论:香蕉可以避免大鼠长期服用番泻叶后引起的血钾降低、白细胞数目减少,减轻番泻叶引起的药源性便秘。
- 于蒲张坤谢甲琦刘利兵陈健康于军龙惠琴
- 关键词：排便白细胞计数
- 小鼠脊髓损伤早期不同炎症因子的表达变化被引量：20
- 2012年
- 目的:探讨小鼠脊髓夹伤后早期各时间点损伤区中IL-1β、IL-6、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、巨噬细胞炎性蛋白-1(MIP-1)、IL-4、IL-10、TGF-β的表达变化情况。方法:6 8周雄性BALB/c小鼠行T8节段脊髓重度夹伤模型,分别于术后6 h、12 h、24 h、3 d和7 d取以损伤区为中心共5 mm脊髓,用TRIzol试剂提取总RNA,反转录后进行实时定量PCR检测上述各基因的表达情况。结果:小鼠脊髓损伤早期,损伤区促炎因子IL-1β、IL-6及趋化因子MCP-1、MIP-1急剧升高,6 h内即达高峰,随后开始下降,3 d内归于正常;而炎症抑制因子IL-4早期不升反降,3 d降至最低;IL-10在6 h有所升高,但无统计学意义;TGF-β逐渐升高,12 h至高峰,随后下降,7 d再度升高。结论:脊髓损伤早期损伤区促炎因子表达增加,炎症抑制因子表达不变或减少,可能使损伤局部的炎症反应呈扩大趋势,从而导致继发的炎症损伤。
- 郑晶晶姚安会刘芳芳王亚周于才勇陈鹏张坤鞠躬王键
- 关键词：脊髓损伤炎症因子实时定量PCRBALB/C小鼠
- 不同刺激因子对小胶质细胞系N9极化的影响被引量：4
- 2012年
- 目的:揭示不同的炎症因子在体外培养的条件下,对小胶质细胞系N9不同极化方向的影响。方法:将小鼠小胶质细胞系N9细胞分为四组:空白对照组(正常培养基)、LPS组、LPS+INF-γ组、IL-4组。各组细胞在上述刺激条件下培养24 h,以及撤去上述刺激条件,继续培养24 h后,分别提取各组细胞总RNA,利用荧光实时定量PCR的方法检测各组N9细胞表达的细胞因子在mRNA水平的变化;利用Western blot检测各组N9细胞极化相关蛋白的变化。结果:在LPS以及LPS+INF-γ刺激条件下培养24 h,M1型巨噬细胞特异性标记物iNOS和CD86的mRNA及蛋白表达水平在N9细胞中明显升高,并且LPS+INF-γ刺激组升高更为明显;而撤除LPS+INF-γ刺激因子后继续培养24 h,N9细胞表达的iNOS和CD86 mRNA的水平均有下调,但仍明显高于对照组。在IL-4刺激条件下培养24 h,M2型巨噬细胞特异性标记物Arg1和CD206的mRNA及蛋白表达水平均在N9细胞中明显上调;同样撤除IL-4刺激因子后,继续培养24 h,N9细胞表达的ArgI和CD206的mRNA水平均有明显下调,但仍然高于对照组。此时ArgI的蛋白表达变化也与其mRNA水平的变化相符。结论:小胶质细胞的分型分化具有明显的细胞因子依赖性,LPS和LPS+INF-γ可使N9小胶质细胞向M1型巨噬细胞方向极化;IL-4可促使N9小胶质细胞向M2型巨噬细胞方向极化;LPS与IFN-γ二者在极化N9小胶质细胞中具有协同作用。极化后的N9细胞在去除刺激因子后,仍可在一定程度上维持其极化状态。
- 张坤柳霞姚安会陈鹏刘芳芳郑晶晶鞠躬王键
- 关键词：脊髓损伤小胶质细胞细胞因子
