张中林
- 作品数：25 被引量：239H指数：12
- 供职机构：中国农业科学院生物技术研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划引进国际先进农业科技计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生化学工程更多>>
- nifH基因能够在高等植物叶绿体原核环境中表达被引量：2
- 2001年
- 以高等模式植物烟草为材料，对固氮酶铁蛋白基因ｎｉｆＨ在叶绿体中的表达进行了研究．构建了ｎｉｆＨ基因叶绿体转化载体，并利用基因枪轰击法对烟草叶片进行了转化．基因枪轰击后，共获得６株壮观霉素抗性再生植株．ＰＣＲ检测及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交鉴定结果表明，ａａｄＡ和ｎｉｆＨ等外源基因已整合进入受体植物叶绿体基因组中； Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫沉淀法的测定结果则证明，ｎｉｆＨ基因能够在叶绿体原核环境中表达．
- 张中林钱凯先沈桂芳
- 关键词：叶绿体NIFH基因高等植物原核表达烟草
- 丙型肝炎病毒融合抗原基因NS3CE对番茄的遗传转化被引量：14
- 2003年
- 丙型肝炎病毒是危害人类健康重要的病源之一 ,研制安全、经济、有效和易于推广使用的抗病毒疫苗是预防和控制 HCV的有效手段。本实验用 PCR方法克隆了 HCV中能够产生中和性抗体、具有很好免疫原性的非结构 N S3区基因片段及核心抗原 CE基因片段 ,并在两段基因之间加入连接肽 SPGS的密码子序列 ,构建成融合抗原基因 N S3- CE。将该融合基因连接到载体 p BI12 1上 ,构建植物表达载体 p BINS3CE。通过根癌农杆菌 EHA10 5介导获得转基因番茄。并进行了 PCR扩增、Southern杂交及 RT- PCR等分子检测 ,结果证明外源基因已整合到转基因番茄的基因组中 ,并在转录水平得到表达。
- 李轶女张中林苏宁孙萌倪丕冲沈桂芳
- 关键词：丙型肝炎病毒番茄转基因番茄
- 外源基因在叶绿体中表达的研究被引量：6
- 1998年
- 综述了叶绿体表达系统的特点，及国内外此方面的研究动态，提出了外源基因在叶绿体中表达存在的问题和解决策略．
- 范国昌张中林钱凯先沈桂芳
- 关键词：叶绿体外源基因同质化
- 丙肝病毒融合抗原基因导入烟草叶绿体及转化株同质化的研究被引量：13
- 2000年
- 植物生物反应器的研究已成为当前基因工程领域的一个新生长点。本实验用 PCR方法 ,从丙型肝炎病毒 c DNA文库中克隆了非结构 NS3区基因片段及核心抗原 C区基因片段 ,并在两段基因间加入连接肽 SPGS的密码子序列 ,构建成融合抗原基因 NS3- C。将该融合基因转入烟草叶绿体转化及表达载体中 ,通过基因枪转化法得到转基因植株。对 NS3- C融合基因转化植株进行 PCR及 Southern杂交试验分析 ,证明外源基因已整合到烟草叶绿体基因组中 ;对转化植株的 Southern杂交试验还表明 ,通过不断地分化筛选培养 。
- 山松张中林吴祥甫沈桂芳
- 关键词：烟草同质化
- 除草剂抗性基因bar导入烟草叶绿体被引量：29
- 1999年
- 将编码Phosphinothricin acetyltransferase的bar基因与水稻叶绿体psbA基因的启动子和终止子构建成表达盒,连同烟草叶绿体基因组同源片段rpl2-trnH-psbA和trnK-ORF509A以及选择标记基因aadA一起构建成烟草叶绿体转化载体pTZBA.基因枪法转化烟草叶片,经壮观霉素筛选获得转化再生植株.分别以1.0kb的叶绿体同源片段trnK-ORF509A和0.6kb的bar基因为探针,对转基因烟草叶绿体DNA进行Southern杂交检测,证明外源基因已整合入烟草叶绿体基因组中.抗性试验表明,转基因植株具备除草剂(PPT)抗性.
- 张中林山松陈曦刘春英钱凯先沈桂芳
- 关键词：BAR基因烟草除草剂叶绿体
- 通过叶绿体基因工程表达聚3-羟基丁酸酯合成相关基因被引量：9
- 2002年
- 构建了含phbB,phbA,phbC和aadA基因表达盒的叶绿体整合及表达载体,通过基因枪轰击法转化烟草.对具壮观霉素抗性的植株进行PCR和Southern等分析,确证外源基因已整合到叶绿体基因组中,同时测定了其同质化程度.Northern点杂交、RT-PCR分析结果表明,叶绿体型转基因植株中目的基因在转录水平的表达明显高于核转化植株中相应基因,并且未观察到基因沉默现象.叶绿体型转基因植株还具有环境安全性好、底物丰富、产物区域化等优点,表明叶绿体基因工程在转基因植物生产聚3-羟基丁酸酯（PHB）方面极具潜力.
- 张景昱赵华燕朱生伟宋艳茹苏宁张中林
- 关键词：叶绿体基因工程聚3-羟基丁酸酯
- Bt叶绿体转基因植株的抗虫性及后代表型分析被引量：15
- 1999年
- 将Ｂｔ ＣｒｙＩＡ（ｃ） 基因与水稻（ Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ Ｌ．） 叶绿体ｐｓｂＡ 基因的启动子和终止子构建成表达盒，连同烟草（ Ｎｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍ Ｌ．） 叶绿体基因组同源片段ｒｐｌ２＿ｔｒｎＨ＿ｐｓｂＡ和ｔｒｎＫ＿ＯＲＦ５０９Ａ 以及选择标记基因ａａｄＡ一起构建成烟草叶绿体转化载体ｐＴＲＳ８。基因枪法转化烟草叶片，经壮观霉素筛选获得转化再生植株。有些转基因植株对３龄棉铃虫（ Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ｚｅａ） 具有较强的毒杀作用，并能显著抑制昆虫蜕皮和生长发育。对高抗虫性植株的子一代（Ｔ１） 和子二代（Ｔ２） 进行的遗传学和分子生物学分析表明，Ｂｔ 基因已稳定地遗传给子代叶绿体。
- 张中林陈曦钱凯先沈桂芳
- 关键词：BT基因叶绿体转化抗虫作用母系遗传
- 棉花叶绿体70S核糖体S7蛋白基因的克隆和序列分析被引量：7
- 1997年
- 叶绿体基因组具有高度保守性,来源于不同植物的叶绿体基因的同源性很高。应用PCR技术,从棉花叶绿体基因组中扩增并克隆了长度为1.okb的叶绿体DNA片段。该片段含有叶绿体核糖体小亚基S7蛋白基因rps7。采用限制性内切酶消化连接的策略构建亚克隆,并测定了该片段的全部核苷酸序列。结果表明,棉花叶绿体rps7基因与烟草、水稻的相应基因同源性很高,分别为97.9％和89.5％,3’非编码区的同源性分别为96.3％和83.9％。本文首次报道了棉花叶绿体rps7基因的序列,并讨论了它的功能及保守性。
- 樊卫华沈燕新张中林沈桂芳
- 关键词：棉花叶绿体基因组
- 烟草叶绿体转化载体的构建及转基因植株的获得被引量：14
- 1998年
- 选择烟草叶绿体基因组同源片段rp12-trnH-psbA和trnK-ORF509A,及aadA抗壮观霉素基因,构建烟草叶绿体转化载体pTRZ。制备pTRZ DNA金粉子弹,通过基因枪轰击烟草幼苗叶片,经壮观霉素筛选获得了愈伤组织和转化再生植株。对烟草叶绿体转化植株进行PCR和Southern分析,结果证明其中No.13、16、23为整入了外源aadA的叶绿体转基因植株,同时其子代呈现壮观霉素抗性,aadA基因得到稳定遗传。
- 邹竹荣张中林山松倪丕冲沈桂芳
- 关键词：烟草叶绿体转化转基因植株
- 油菜叶绿体基因组同源重组片段的克隆及phb基因定点整合载体的构建被引量：5
- 2001年
- 利用叶绿体基因组在进化过程中高度保守的特点 ,根据烟草、水稻和玉米叶绿体基因组全序列资料 ,设计合成引物 ,PCR扩增并克隆了油菜叶绿体两个重要的功能基因rbcL和atpB(GenBank登录号分别为AF2 67640和AF2 67641) ,并以此作为定点整合外源基因的同源重组片段。以来自叶绿体的强启动子PpsbA和Prrn等驱动PHB合成途径中 3个关键酶基因phbA、phbB和phbC ,分别构建表达盒 ,并将它们按照其在原始菌株中的自然转录顺序phbC phbA phbB相串联 ,最后连同选择标记基因aadA表达盒一起 ,克隆到油菜叶绿体同源片段中 ,构建成phb基因定点整合载体pRCABZ和pRCABF。酶切及Southern杂交结果证明所构建的转化载体符合预期设计。叶绿体转化及后续工作目前正在进行之中。
- 张中林张景昱李轶女苏宁宋艳茹沈桂芳
- 关键词：叶绿体转化油菜
