康雪莲
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：西北大学生命科学学院更多>>
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- 相关领域：生物学更多>>
- 人分泌磷蛋白2(SPP2)基因的克隆、原核表达与活性检测
- 目的：分泌磷蛋白2(Secreted Phosphorprotein2，SPP2)是最初从牛骨密质中分离纯化的一种非胶原基质蛋白质，由于在其第131到139位氨基酸残基处存在一段富含磷酸化丝氨酸的序列且分子量约为24kD...
- 康雪莲
- 关键词：基因克隆原核表达
- 文献传递
- 人分泌磷蛋白2基因的克隆、原核表达与活性检测被引量：1
- 2010年
- 提取人肝癌组织RNA,通过RT-PCR扩增人SPP2成熟蛋白编码区基因并克隆至原核表达载体pET-22b(+),将测序正确的质粒转化大肠杆菌BL2l(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达,用Ni-NTA柱进行纯化,SDS-PAGE电泳及Western blot检测并证实目的蛋白的表达,通过重组蛋白对木瓜蛋白酶的抑制作用验证其生物学活性。重组质粒测序和酶切结果显示SPP2成熟蛋白基因已成功克隆到pET-22b(+)。IPTG诱导重组菌后有25kDa大小的目的蛋白表达。优化诱导表达条件,获得可溶性表达的目的蛋白,纯化后纯度达90%,western blot表明其具有His标签抗原活性。重组SPP2成熟蛋白可抑制木瓜蛋白酶的水解作用(酪蛋白为底物),重量抑制比为1∶3.1,抑制比活性为2511U/mg。
- 刘建玲康雪莲董辉王嘉颖曹琳徐晓晶金维荣
- 关键词：基因克隆原核表达
