巩慧慧 作品数:14 被引量:74 H指数:6 供职机构: 宁夏医科大学检验学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 教育部“新世纪优秀人才支持计划” 宁夏回族自治区自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
氧化低密度脂蛋白与高密度脂蛋白比值在同型半胱氨酸致ApoE-/-鼠动脉粥样硬化中的意义 被引量:10 2013年 目的探讨ox-LDL/HDL在同型半胱氨酸(Hcy)致ApoE-/-鼠动脉粥样硬化(AS)中的意义。方法选用SPF级5周龄雄性ApoE-/-小鼠为研究对象,随机分为3组:对照组,高蛋氨酸组,folic acid and VitB12干预组。所有小鼠喂养14周后处死,进行后续实验。行主动脉病理切片HE染色;全自动生化分析仪检测血清Hcy、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、总胆固醇(TC)含量,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清ox-LDL含量。结果与对照组比较,高蛋氨酸组与folic acid and VitB12干预组动脉粥样硬化斑块面积不同程度的增大,高蛋氨酸组ApoE-/-小鼠主动脉内膜见灶性病变部位隆起并突入动脉腔内,富含粥样坏死物质。高蛋氨酸组血清Hcy、LDL、TC和ox-LDL均升高,血清HDL含量减少,LDL/HDL、TC/HDL及ox-LDL/HDL升高,与对照组比较差异有显著性(P<0.05);叶酸与维生素B12可以改善高蛋氨酸所致的改变。血清Hcy浓度与LDL/HDL比值(γ=0.4938,P<0.05)、TC/HDL比值(γ=0.4474,P<0.05)及ox-LDL/HDL比值(γ=0.5434,P<0.05)均呈正相关。结论 ox-LDL/HDL比值更能预测和反映Hcy诱导AS形成及进展程度,在探索防治AS途径中更有价值。 王菊 杨安宁 孙炜炜 巩慧慧 马胜超 马长剑 姜怡邓关键词:动脉粥样硬化 同型半胱氨酸 MMP-9 DNA甲基化变化在ApoE^(-/-)小鼠肾脏中的作用及高蛋氨酸饮食的影响 被引量:3 2012年 目的探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)DNA甲基化变化在载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)C57BL/6J小鼠肾脏中的作用及高蛋氨酸饮食的影响。方法将ApoE-/-小鼠随机分成模型组、高蛋氨酸组和叶酸及维生素B12治疗组,并设正常C57BL/6J小鼠为正常对照组,喂养14周后采血,分离肾脏。全自动生化分析仪检测血清同型半胱氨酸(Hcy)、尿素(Urea)和肌酐(Cr)水平;免疫组织化学法分析肾脏MMP-9蛋白表达;荧光定量RT-PCR检测MMP-9 mRNA表达;巢式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)和降落式PCR检测MMP-9 DNA甲基化变化程度。结果模型组血清Hcy、Urea、Cr浓度均明显升高,MMP-9甲基化程度降低,mRNA和蛋白表达增强(均P<0.05),与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);高蛋氨酸组各项指标变化较模型组更为明显(均P<0.05);而叶酸及维生素B12治疗组MMP-9 mRNA和蛋白表达减少,甲基化程度升高(P<0.05)。结论 MMP-9 DNA甲基化变化可能是ApoE-/-小鼠高蛋氨酸饮食致肾功能损伤的重要机制之一。 梁宇 马琳娜 杨晓玲 王菊 巩慧慧 姜怡邓关键词:基质金属蛋白酶-9 DNA甲基化 脂肪酸结合蛋白4在高同型半胱氨酸血症致ApoE~/(-//-/)鼠动脉粥样硬化的作用研究 目的动脉粥样硬化/(atherosclerosis,AS/)是以脂代谢紊乱为主的慢性炎症性疾病,同型半胱氨酸/(homocysteine,Hcy/)是其重要的独立危险因子之一,ApoE~/(-//-/)鼠是研究AS的重要... 巩慧慧关键词:动脉粥样硬化 高同型半胱氨酸血症 DNA甲基化 文献传递 同型半胱氨酸对血管平滑肌细胞周期及P27和CyclinA表达的影响 被引量:6 2011年 目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)对血管平滑肌细胞(VSMCs)生长周期的变化特点及P27和细胞周期素A(CyclinA)表达的影响。方法正常人脐动脉VSMCs体外培养,随机分为空白对照组、不同浓度Hcy干预组(50、100、200、500 uM)、叶酸治疗组(Hcyl00 uM+叶酸30 uM),总计6组。以MTT检测VSMCs的增殖率,流式细胞仪测定细胞周期,R T-PCR和Western blotting测定P27和CyclinA基因mR NA及蛋白水平。结果不同浓度Hcy干预的VSMCs与空白对照组和叶酸治疗组相比:随着Hcy浓度的增加VSMCs增殖率增加,处于S及G0/M期的VSMCs比例亦逐渐增加;RT-PCR和Western blotting显示CyclinA mR NA与蛋白表达逐渐增加,P27 mRNA与蛋白表达逐渐降低;叶酸治疗组与空白对照组比所有结果均无明显变化。结论Hcy可通过调节P27和CyclinA mR NA水平,影响细胞周期各时相分布,从而促进VSMCs的增殖;叶酸对Hcy有拮抗作用。 于海娇 马琳娜 徐支芳 孙炜炜 巩慧慧 马长剑 姜怡邓关键词:同型半胱氨酸 平滑肌细胞 细胞周期 P27 CYCLINA HHcy对ApoE^(-/-)鼠动脉粥样硬化的影响及叶酸、VB_(12)的干预效应 被引量:3 2011年 目的探讨高同型半胱氨酸血症(HHcy)对ApoE-/-鼠动脉粥样硬化(AS)形成的影响及叶酸、维生素B1(2VB12)的干预效应。方法健康5周龄雄鼠(SPF级C57BL/6J)作为对照组,饲以普通饮食。另选5周龄雄性纯合子ApoE-/-鼠(SPF级近交系C57BL/6J)36只,随机平均分为高脂血症组、HHcy组、干预组。喂养14周后,取血测定血清Hcy及血脂水平,取主动脉进行石蜡包埋并切片,HE染色后检测主动脉斑块面积及内中膜厚度。结果 HHcy组血清同型半胱氨酸(Hcy)水平明显高于对照组与干预组(P<0.001),与对照组比较,其血脂LDL、TG、CHOL分别升高约2.2、7.6、7.2倍,HDL下降约63%(P<0.001)。HE染色可见三组ApoE-/-鼠均有AS斑块形成,HHcy组主动脉斑块面积6.21×105μm2明显大于高脂血症组3.99×105μm2与干预组4.41×105μm(2P<0.05)。AS斑块面积与其血清Hcy水平呈正相关(r=0.4898,P<0.001)。结论 HHcy导致ApoE-/-鼠AS病变形成,且病变程度依赖血清Hcy水平,叶酸和VB12的干预可有效缓解HHcy引起的血管损伤。 巩慧慧 王菊 孙炜炜 马胜超 马琳娜 姜怡邓关键词:叶酸 维生素B12 动脉粥样硬化 内皮型一氧化氮合酶基因启动子区DNA甲基化调控同型半胱氨酸致内皮细胞损伤的作用机制 目的:探讨内皮型一氧化氮合酶基因启动子区DNA甲基化在同型半胱氨酸致内皮细胞损伤中的作用机制。方法:原代培养人脐静脉内皮细胞,加入0、50、100、200、500μmol/L同型半胱氨酸和100μmol/L同型半胱氨酸+... 姜怡邓 孙炜炜 马胜超 王菊 巩慧慧 马长剑凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1甲基化在同型半胱氨酸作用下对人内皮细胞存活的影响 被引量:5 2013年 目的 :探讨凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)甲基化在同型半胱氨酸(Hcy)对动脉粥样硬化过程中降低内皮细胞存活率的作用机制研究。方法 :按不同浓度的Hcy对人脐静脉内皮细胞作用分组:对照组(0μM Hcy)、50μM Hcy组、100μM Hcy组、200μM Hcy组和500μM Hcy组;②100μM Hcy+30μM维生素B12+30μM叶酸组(拮抗剂组),各组(n=5)培养液孵育72 h后,采用3-(4,5)-双甲基-2-噻唑-(2,5)-2苯基溴化四氮唑蓝试验检测Hcy对内皮细胞活性的影响;用分光光度比色法检测各组细胞中过氧化氢;酶免法检测氧化低密度脂蛋白、甲基转移酶-1(DNMT-1)含量;荧光定量聚合酶链式反应(PCR)测LOX-1和DNMT-1 mRNA的表达;蛋白免疫印迹法测LOX-1蛋白的表达;巢式降落式PCR法测LOX-1基因甲基化的改变。结果 :同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞存活率的影响:拮抗剂组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。100、200、500μMHcy组与对照组比较:氧化低密度脂蛋白和过氧化氢的含量、LOX-1信使核糖核酸(mRNA)相对甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)表达量及LOX-1蛋白相对β-肌动蛋白表达量均增加;DNMT-1的含量和mRNA表达、LOX-1基因甲基化程度均降低,差异均有统计学意义(P<0.001)。结论 :LOX-1低甲基化可能是Hcy致内皮细胞损伤的重要机制之一,其中过氧化氢、氧化低密度脂蛋白和DNMT-1可能起了重要的作用。 马胜超 孙炜炜 巩慧慧 马长剑 王菊 田珏 姜怡邓关键词:同型半胱氨酸 甲基化 人脐静脉内皮细胞 凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1 LDLR启动子区DNA甲基化调控同型半胱氨酸致平滑肌细胞增殖的作用机制 被引量:3 2012年 目的探讨低密度脂蛋白受体(LDLR)在同型半胱氨酸(Hcy)致血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖中的作用机制。方法原代培养VSMCs,用50、100、200及500μmol/L Hcy干预72 h;MTT法观察VSMCs增殖的活性,ELSIA法和同位素法分别检测VSMCs中ox-LDL含量和DNA甲基转移酶活性;实时定量PCR和巢式降落式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)检测LDLR的表达和启动子区DNA甲基化的状态。结果随着Hcy浓度的增加,VSMCs中ox-LDL含量和DNA甲基转移酶活性明显增加,而VSMCs增殖活性下降,同时LDLR mRNA表达增高,且LDLR基因启动子区呈低甲基化状态,与对照组比较有显著性差异(P<0.05,P<0.01)。结论 LDLR基因启动子区DNA低甲基化致LDLR表达增高可能是Hcy引起VSMCs损伤的重要机制之一。 姜怡邓 孙炜炜 马长剑 王菊 马胜超 巩慧慧 梁宇关键词:低密度脂蛋白受体 同型半胱氨酸 血管平滑肌细胞 同型半胱氨酸致内皮细胞、平滑肌细胞和泡沫细胞低密度脂蛋白受体DNA甲基化的比较研究 被引量:2 2011年 目的观察同型半胱氨酸(Hcy)对内皮细胞、平滑肌细胞以及泡沫细胞中低密度脂蛋白受体(LDLR)DNA甲基化的影响。方法原代培养内皮细胞、人脐静脉血管平滑肌细胞(VSMCs)和单核细胞源性泡沫细胞,用0、50、100、200和500μM Hcy干预后培养72 h,提取基因组DNA,巢式降落式PCR(nMS-PCR)法分别检测3种细胞中LDLR DNA甲基化修饰状态的变化,以观察Hcy对不同细胞LDLR的作用和影响。结果内皮细胞、VSMCs与不同浓度Hcy培养72 h后,LDLR基因启动子区DNA呈高甲基化改变,泡沫细胞LDLR启动子区DNA呈低甲基化改变,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),且以50或100μM Hcy组最明显。结论 Hcy对不同细胞LDLR启动子区DNA甲基化的影响有差异性,提示可能存在更深层次的机制。 孙炜炜 马琳娜 徐支芳 马长剑 王菊 巩慧慧 姜怡邓关键词:低密度脂蛋白受体 DNA甲基化 同型半胱氨酸 同型半胱氨酸致动脉粥样硬化的机制研究 被引量:14 2012年 目的通过观察不同浓度同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)干预对人脐静脉血管内皮细胞(HumanUmbilical Vein Endothelial Cells,HUVEC)和氧化应激的影响,探讨其在动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)中的作用。方法体外培养HUVEC,将其分为正常对照组(Hcy 0μmol·L-1)、Hcy干预组(浓度分别为50、100、200、500μmol·L-1)、100μM Hcy+叶酸+VitB12治疗组,每个浓度组再分为24、48、72h三个时间组。MTT法检测各组细胞增殖抑制率,测定各浓度Hcy干预HUVEC 72h的氧化应激损伤指标。结果各浓度Hcy干预组随着Hcy浓度增高及干预时间延长HUVEC的细胞增殖抑制率增加,500μM Hcy 72h干预组最明显(P<0.05)。HUVEC内H2O2和MDA含量随Hcy浓度的增加而增加,Hcy100~500μM组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01);Hcy100~500μM组HUVEC内SOD活性和T-AOC活性均较对照组降低(P<0.01),并且Hcy的浓度越高降低程度越明显。100μM Hcy+叶酸+VitB12治疗组与对照组比较上述各指标的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 Hcy抑制HUVEC增殖的作用呈剂量依赖关系,病理水平Hcy可以增强氧化应激损伤反应,而叶酸和VitB12对Hcy所致氧化应激损伤有一定的拮抗作用。 纳莉 徐支芳 巩慧慧 孙炜炜 梁宇 姜怡邓关键词:同型半胱氨酸 氧化应激损伤 动脉粥样硬化