冯雅
- 作品数：5 被引量：14H指数：3
- 供职机构：暨南大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生轻工技术与工程化学工程更多>>
- 人内皮细胞抑制生长素在毕赤酵母中的高效表达被引量：3
- 2004年
- 根据人胶原蛋白ⅩⅧNC结构域C末端编码内皮细胞抑制生长素 (Endostatin)的成熟多肽序列 ,人工合成了由毕赤酵母 (Pichiapastoris)中偏爱密码子组成的内皮细胞抑制生长素基因序列。该基因以N端融合的方式正确插入毕赤酵母诱导型表达载体pPICZαA中。通过电激将线性化的重组质粒转化到毕赤酵母SMD1 1 68细胞中 ,筛选获得表达具有生物活性的内皮细胞生长抑制素的高产菌株。在摇瓶发酵水平上 ,产量达到 80mg L。而利用生物反应器进行高密度发酵 ,Endostatin的产量可达 1 2 5mg L。
- 苏志坚吴晓萍郑青冯雅于平野曲红艳刘太胜李校堃
- 关键词：毕赤酵母高密度发酵癌症
- 一种缺失核定位信号区的hbFGF的表达及纯化(英文)
- 2005年
- 目的:为了研究缺失核定位信号区的人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF)独特的转运机制,在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达和纯化了缺失核定位信号区的hbFGF。方法:将PCR扩增得到的hbFGFcDNA片断克隆到表达载体pET3c中,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,通过离子交换和肝素亲和层析从菌体上清中纯化目标蛋白,MTT法检测促分裂活性。结果:hbFGF的表达量约为全菌体蛋白的20%,纯化的缺失核定位信号区的hbFGF的促分裂活性与缺失核定位信号区的hbFGF标准品相当。结论:BL21(DE3)/pET3c表达系统能高效表达缺失核定位信号区的hbFGF,纯化得到的hbFGF可用于进一步的研究。
- 吴晓萍苏志坚郑青吴思娴冯雅曲红艳许华李校堃
- 关键词：人碱性成纤维细胞生长因子核定位信号纯化
- 抗菌肽和人酸性成纤维细胞生长因子融合蛋白在毕赤酵母中的表达及其活性鉴定被引量：7
- 2005年
- 目的 :构建和表达一种抗菌肽和人酸性成纤维细胞生长因子的融合蛋白 ,在创伤皮肤表面应用时能裂解成有功能的抗菌肽和人酸性成纤维细胞生长因子 ,预防伤口感染和促进皮肤修复。方法 :利用PCR技术分别扩增出带有凝血酶切割位点的天蚕素杂合肽基因和人酸性成纤维细胞生长因子基因。再将两者作为模板 ,用PCR方法扩增出编码融合蛋白的DNA。将该DNA片段插入到载体pPICZαA中 ,并利用电转法将质粒转入毕赤酵母smd116 8中 ,Zeocin抗性筛选重组转化子。甲醇诱导 96h ,SDS PAGE电泳检测融合蛋白的表达 ,并用Western blot杂交检测融合蛋白的免疫原性。利用肝素亲和层析纯化融合蛋白 ,同时检测融合蛋白的抑菌和促3T3Bal/b细胞分裂活性。结果 :筛选出能表达相对分子质量约为 19kD融合蛋白的重组转化株 ,SDS PAGE电泳检测显示甲醇诱导 96h后 ,融合蛋白表达量达到最高 ,且能与人酸性成纤维细胞生长因子抗体产生免疫反应。融合蛋白没有抑菌活性 ,而裂解产物则具有抑菌活性。此外 ,融合蛋白的促细胞分裂活性与野生型人酸性成纤维细胞生长因子相比没有明显的降低。结论 :获得含凝血酶切割位点的抗菌肽和人酸性成纤维细胞生长因子的融合蛋白 ,并在毕赤酵母中实现了表达。融合蛋白的裂解产物具有抑菌活性。
- 苏志坚吴晓萍郑青黄亚东庞实锋冯雅李校堃
- 关键词：抗菌肽人酸性成纤维细胞生长因子融合蛋白毕赤酵母
- 酸性成纤维细胞生长因子对人脐静脉血管内皮细胞一氧化氮生成的影响被引量：1
- 2005年
- 目的:观察人酸性成纤维细胞生长因子(haFGF)及其非促分裂型突变体(nmhaFGF)对人脐静脉血管内皮细胞(HEC)一氧化氮(NO)生成的影响。方法:实验分3组,分别为haFGF组、nmhaFGF组和对照组。用Griess反应法检测细胞培养上清NO相对含量(NO2ˉ)。结果:haFGF和nmhaFGF都能诱导内皮细胞NO的生成,但同样条件下,nmhaFGF组诱导产生NO的相对含量与对照组比较在0.10、1.00、10.00、50.00、100.00 ng/mL时均高(P<0.01)。与haFGF组比较在0.10、1.00、10.005、0.00 ng/mL时nmhaFGF组诱导产生NO的相对含量明显下降(P<0.01),在0.01和100.00 ng/mL时也有降低(P<0.05)。结论:nmhaFGF仍保留一定的诱导内皮细胞产生NO的作用,但NO生成量有显著下降。
- 郑青汪小凤吴晓萍许华苏志坚冯雅李校堃
- 关键词：人酸性成纤维细胞生长因子内皮细胞一氧化氮
- 一种新型天蚕素杂合肽AD和aFGF突变体融合蛋白S的构建及表达被引量：3
- 2004年
- 目的 :构建和表达一种带有凝血酶切割位点的天蚕素杂合肽AD和人酸性成纤维细胞生长因子 (acidicfibroblastgrowthfactor ,aFGF)突变体的融合蛋白S ,在创伤皮肤表面应用时能自动裂解成有抗感染功能的天蚕素杂合肽AD和皮肤修复功能的aFGF突变体。方法 :利用PCR技术分别扩增出带有凝血酶切割位点的天蚕素杂合肽AD基因和aFGF突变体基因。再利用两者作为模板 ,用PCR方法扩增出编码融合蛋白S的DNA。将该DNA片段插入到载体pPICZαA中 ,并利用电转法将质粒转入毕赤酵母smd116 8中 ,Zeocin抗性筛选重组转化子。甲醇诱导 72h ,SDS -PAGE电泳检测融合蛋白S的表达 ,并用Western -blot杂交检测融合蛋白S的免疫原性。结果 :筛选出的重组转化株在甲醇诱导后能表达相对分子质量约为 190 0 0的融合蛋白S ,而该蛋白能与aFGF抗体产生免疫反应。结论 :用PCR方法获得编码含凝血酶切割位点的天蚕素杂合肽AD和aFGF突变体的融合蛋白SDNA 。
- 苏志坚吴晓萍郑青黄亚东庞实锋冯雅李校堃
