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基于四重iTRAQ标记结合LC-MALDI-TOF-TOF方法分析雌二醇和它莫西芬对MCF-7乳腺癌细胞内蛋白质含量影响的研究被引量：5: 2008年; 应用体外iTRAQ标记结合LC-MALDI-TOF-TOF方法对雌二醇刺激、雌二醇与它莫西芬共同处理,将它莫西芬处理与正常培养的MCF-7乳腺癌细胞内蛋白质表达的差异进行了比较分析。结果表明:各实验组与对照组之间存在数种上调或下调1倍以上的差异表达蛋白质,雌二醇可显著改变74种蛋白质的含量,雌二醇与它莫西芬共同处理引起26种蛋白质水平的显著变化,它莫西芬引起18种蛋白质表达的明显改变。各组之间既有变化趋势相同的蛋白质,也有变化趋势相反的蛋白质。; 倪国新郭立海朱镭郭妍徐学敏林标扬刘建华李伟; 关键词：雌二醇它莫西芬

基质辅助激光解析电离-串联飞行时间质谱与电喷雾离子化-四极杆-飞行时间质谱分析蛋白质被引量：3: 2009年; 为比较基质辅助激光解析电离-串联飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOF)和电喷雾离子化-四极杆-飞行时间质谱(ESI-Q-TOF)在蛋白质定性和定量分析方面的性能,分别利用两种仪器对用于相对和绝对定量的等量异位标签(iTRAQ)标记的雌激素刺激前后MCF7细胞内的蛋白质水解产生的多肽进行了定性和定量分析。结果表明,用MALDI-TOF-TOF和ESI-Q-TOF方法分别鉴定出1086种和848种蛋白质,其中相同的蛋白质为633种;MALDI-TOF-TOF和ESI-Q-TOF方法分别找到38种和33种表达差异在0.5倍以上的蛋白质,其中3种为相同的蛋白质。实验数据说明,两种仪器在蛋白质定性和定量分析方面有很大的互补性,将两种仪器结合使用,不仅能够显著提高蛋白质定性和定量分析的覆盖率,而且可提高分析的置信度。; 倪国新朱镭马小土徐学敏胡晓芳刘建华李伟

利用组织芯片检测乳腺癌组织中Ⅲ型胶原α1多肽链表达的研究: 2007年; 为了研究Ⅲ型胶原蛋白α1多肽链的表达与浸润性导管癌之间的关系,利用中密度组织芯片免疫组化染色结合组织病理检测了癌细胞和间质细胞中该蛋白质的表达水平.比较了正常乳腺组织和分化程度不同的浸润性导管癌之间蛋白表达水平的差异,得到如下结果:①Ⅲ型胶原蛋白α1多肽链主要在间质细胞中表达.②Ⅲ型胶原蛋白α1多肽链的表达与癌细胞的分化程度呈一定程度的正相关.结合芯片标本和临床病理资料分析发现:③Ⅲ型胶原蛋白α1多肽链的表达与癌细胞雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)的表达无明显相关性.④Ⅲ型胶原α1多肽链的表达与癌细胞淋巴结转移无明显的相关性.; 李伟朱镭倪国新徐学敏林标扬; 关键词：浸润性导管癌组织芯片

NKX3.1基因沉默对LNCaP细胞基因表达谱的影响: 2009年; 目的探讨降低NKX3.1表达对雄激素依赖性前列腺癌细胞系(LNCaP)基因表达谱的影响。方法用表达NKX3.1 shRNA的质粒转染LNCaP细胞,经Northern blot和Western blot检测其干扰NKX3.1 mRNA和蛋白表达的效果,基因表达芯片法比较转染shRNA的细胞与转染空载体的对照细胞之间mRNA表达的差异。结果shRNA干扰可降低LNCaP细胞内NKX3.1蛋白的水平,可引起115种基因表达下调,114种基因表达上调;在严谨条件下进行功能聚类可得到与细胞凋亡相关、与糖代谢相关和与氨基酸代谢相关等共7个基因功能富集组。结论NKX3.1蛋白水平下调可引起LNCaP细胞基因表达谱的显著改变,其中一些基因表达的改变可能与NKX3.1的肿瘤调节活性密切相关。; 朱镭倪国新张政希程培徐学敏林标扬李伟; 关键词：NKX3.1 SHRNA 基因表达谱

E2F3对肝癌细胞内基因表达调控功能的研究: E2F3是一种重要的转录因子,以往的研究表明它的异常表达与人类多种癌症的发生发展密切相关。本研究通过体外转染的方法分别在人肝癌细胞系SMMC-7721和Hep G2中过表达E2F3基因,然后利用基因表达芯片分析E2F3基...; 倪国新; 关键词：E2F3 肝癌基因表达芯片实时荧光定量PCR; 文献传递

用于相对和绝对定量的等量异位标签-二维液相色谱-串联质谱法分析雌二醇和血清剥夺对乳腺癌细胞内蛋白质含量的影响被引量：6: 2009年; 雌激素和血清中的激素及各种生长因子在乳腺癌的发生、发展过程中发挥着重要的作用。研究雌激素和血清对乳腺癌细胞中蛋白质组成和含量的影响对于阐明雌激素和血清对乳腺癌细胞影响的分子机理具有重要的意义。利用四重用于相对和绝对定量的等量异位标签(isobaric tags for relative and absolute quantification,iTRAQ)标记结合二维液相色谱-串联质谱(two-dimensional liquid chrom atography-tandem mass spectrometry,2D-LC-MS/MS)对雌二醇(17β-oestradiol,E2)和血清各自以及共同作用对MCF7乳腺癌细胞内蛋白质表达的影响进行了比较,共鉴定到置信度在95%以上的蛋白质576种,其中各组相对于正常培养组的细胞共找到26种差异在1倍以上的蛋白质,其中10种上调,16种下调。研究发现E2和血清可显著影响细胞内与蛋白质合成相关的蛋白质的水平。实验结果表明:iTRAQ-LC-MS/MS是进行多个样品差异蛋白组比较的一种有效方法。; 朱镭倪国新张政希徐学敏胡晓芳李伟; 关键词：血清剥夺乳腺癌细胞

重组C8orf32蛋白的表达、纯化及抗体制备被引量：1: 2009年; C8orf32是一种功能未知基因,其mRNA含量在乳腺癌组织中显著高于正常乳腺组织。将其开放式阅读框插入pGEX-6P1原核表达载体T7启动子控制下的GST编码基因下游,构建了C8orf32蛋白表达质粒pGEX-6P-C8。表达质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导,成功表达了GST-C8orf32融合蛋白。经带有GST标签的位点特异性蛋白酶切割除去GST-C8orf32融合蛋白的GST标签,获得了N端带有8个多余氨基酸残基的C8orf32蛋白,蛋白纯度为95%左右。N端氨基酸序列分析表明该蛋白N端氨基酸序列正确,质谱鉴定进一步证明所表达C8orf32蛋白的正确性。用制备的C8orf32蛋白免疫新西兰白兔,获得了能够正确识别C8orf32蛋白的抗血清。该蛋白及其抗体的成功制备,为进一步研究C8orf32蛋白的结构功能和体内分布打下了基础。; 朱镭张政希倪国新徐学敏林标扬李伟; 关键词：GST融合蛋白质谱鉴定

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倪国新