葛菲菲
- 作品数：5 被引量：37H指数：3
- 供职机构：上海市畜牧兽医站更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 马立克病病毒gB主要抗原决定簇融合基因的真核表达
- 2007年
- 为了合成由HA表位和串联的马立克病病毒（MDV）gB主要抗原决定簇基因所构成的融合蛋白基因,并在真核中表达,选取了MDV GA株gB 250位～460位氨基酸为目的片段,应用基因重组技术,通过一个由柔性氨基酸组成的linker,使该基因片段在体外串联,并在串联片段的前端加上HA表位,末端加上终止密码子,以形成完整的阅读框;通过测序分析证明,引入的HA表位序列以及融合基因的阅读框完全正确.将融合基因克隆入真核载体pIRES中,从而获得真核表达质粒pCMV-HAgB（L）,利用脂质体将该表达质粒转染CHO细胞,通过间接免疫荧光（IFA）和RT-PCR鉴定,发现该融合基因可以在真核细胞中正确表达,为开发新型的马立克病疫苗奠定了基础.
- 葛菲菲刘佩红王建周锦萍沈莉萍徐锋孙泉云
- 关键词：真核表达马立克病病毒抗原决定簇
- 食源性沙门氏菌快速检测技术的应用研究被引量：16
- 2008年
- 通过样品试验,得到优化的沙门氏菌检验方法,了解上海地区沙门氏菌污染情况。在免疫胶体金技术、单抗直接ELISA、PCR法检测沙门氏菌的基础上,将PCR法和单抗直接ELISA三种快速检测方法进行比较研究。用免疫胶体金技术、直接ELISA、PCR法对鸡蛋、水样、牛奶、猪肉、牛肉、虾仁等样品401份进行沙门氏菌检测,并与常规国标方法对比,直接ELISA法的敏感性和特异性达100%和97.3%,免疫胶体金技术敏感性和特异性达100%和95.3%,PCR法的敏感性和特异性均为100%。通过对样品的检测,最终确定较优化的沙门氏菌检测程序。PCR法的特异性优于免疫胶体金技术和直接ELISA法。对大量样品检测,可采用免疫胶体金技术或直接ELISA法筛检,除去大量阴性样品,阳性样品用PCR法作进一步鉴定;需要确定血清型时则用国标法。
- 鄢志刚徐锋王建沈莉萍葛菲菲刘佩红
- 关键词：沙门氏菌PCRELISA免疫胶体金
- 胸膜肺炎放线杆菌PCR检测方法的建立及临床应用
- 2008年
- 为建立检测可疑病料中猪胸膜肺炎放线杆菌(App)的方法,针对App的RTX毒素(ApxⅣA毒素)毒力基因长约449 bp的片段设计引物,以App 10个血清型的基因组分别作为模板,对PCR扩增条件进行优化筛选,并进行了特异性及重复性试验。对副猪嗜血杆菌、马链球菌兽疫亚种、多杀性巴氏杆菌的扩增结果为阴性,表明该PCR方法特异性强,建立了该菌的种属特异性PCR方法。以筛选出的优化条件,对22份临床可疑病料进行了检测。结果表明,建立的PCR方法特异、快速、稳定、敏感,优于传统的细菌学方法,可作为App可疑病料的检测方法。
- 葛菲菲徐锋沈莉萍王建
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌多聚酶链反应特异性
- 副溶血性弧菌PCR检测方法的建立被引量：14
- 2008年
- 为了建立适于基层单位应用的针对副溶血性弧菌检测的特异PCR方法,检测副溶血性弧菌的基因序列。针对该菌的属特异性基因t1基因进行引物设计,扩增片段大小为449 bp。运用该PCR法可特异性的从副溶血性弧菌ATCC17802标准株中扩增出目的基因片段,与GenBank上发表的序列同源性为100%。而经常污染海产品的溶藻弧菌,嗜水气单胞菌标准株J-1,铜绿假单胞菌标准株ATCC27853结果均为阴性。该PCR法最低检出菌体DNA量为10-2 ng以及最低检出菌数为5.7×103 CFU/mL。对临床上送检的35份样品进行菌体DNA PCR方法检测并同时与国标GB/T4789.7-2003中使用的检测方法进行比对,两种检测方法的结果完全符合,与国标中使用的检测方法相比可大大缩短鉴定时间。因此该PCR法能快速鉴定当前副溶血性弧菌流行群,有利于流行病学溯源等研究。
- 葛菲菲徐锋沈莉萍王建
- 关键词：副溶血性弧菌PCR
- 乙脑病毒E蛋白中和表位与结核杆菌hsp70在大肠杆菌中的融合表达被引量：7
- 2008年
- 根据大肠杆菌偏嗜性密码子原则,人工合成了乙脑病毒E蛋白C末端的中和表位,位于E蛋白上373-399 aa,通过EcoRⅠ和HindⅢ连接构建原核表达载体pET-32a-epitope。将hsp70通过HindⅢ和XhoⅠ连接到载体pET-32a-epitope上中和表位的3′端,构建融合表达载体pet-32a-epitope-hsp70。诱导表达后,将上清和沉淀分别进行SDS-PAGE,结果表明该融合蛋白以包含体形式存在。将包含体在8 mol/L的尿素中过夜溶解,然后将上清过柱,获得良好的纯化结果。融合蛋白的分子量为94 kD。Western blot显示该蛋白兼具对JEV和结核杆菌热休克蛋白70（M.Thsp70）的特异抗原性。
- 葛菲菲刘佩红王建沈莉萍徐锋孙泉云
- 关键词：大肠杆菌包含体
