王敦成
- 作品数：17 被引量：36H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- 亚甲基蓝/光化学法灭活血浆中的模型病毒及其对血浆蛋白影响的研究
- 该课题以水泡性口膜炎病毒(vesiculau stomatitis virus,VSV)、新德毕斯病毒(sindbis virus,SNV)为模型病毒,宿主细胞分别为非洲绿猴肾(vero)细胞和金黄地鼠肾细胞(BHK-2...
- 王敦成
- 关键词：VSV亚甲基蓝病毒灭活
- 红细胞分化相关因子EDRF1的反义RNA下调蛋白激酶C-α mRNA的表达被引量：2
- 2001年
- 为了研究通过功能筛选得到的一个新的红细胞分化相关的全长cDNA(命名为EDRF1)的功能 ,选择K5 6 2细胞作为模型细胞来观察反义EDRF1表达对细胞功能的影响。通过快速构建 ,同时得到了正向和反向插入片段的真核表达载体pcDNA3 EDRF1 S(sense)及pcDNA3 AS(antisense) ,并通过改进的LipofectAMINE细胞转染和G418筛选 ,得到了稳定表达的细胞株 ,进行基因组PCR鉴定 ,证明了转染的高效性。NorthemBlot试验的结果表明 ,反义载体转染的K5 6 2细胞中 ,EDRF1在mRNA表达水平上受到下调 ,提示EDRF1反义DNA的表达可能抑制了EDRF1mRNA的正常转录。进一步 ,γ 珠蛋白和PKC α的表达在反义构建质粒转染K5 6 2细胞中的表达均受到下调 ,这可能传递了红细胞分化的负反馈信号 。
- 王敦成张晓东王建安赖春宁黎燕沈倍奋
- 关键词：反义RNA红细胞分化蛋白激酶C-Α信号转导珠蛋白
- 模型病毒在光化学灭活血液制品中病毒中的应用被引量：1
- 1999年
- 光化学方法灭活血液制品中的病毒是近几年发展较快、应用前景好的灭活方法。它高效灭活病毒，并确保血液或血液制品的完整性和功能活性。选择合适的病毒模型不仅能评价灭活效果，还能替代尚未建立系统培养的病毒株考察灭活效果。
- 王敦成卜凤荣
- 关键词：病毒灭活血液制品
- 两个新的红细胞分化相关因子的cDNA克隆及功能探讨
- 我们曾报道,在终末分化阶段的红细胞中可表达一些与珠蛋白基因增强子HS2序列特异结合的蛋白因子,并利用杂交瘤技术制备了两株针对上述蛋白的单克隆抗体.为进一步研究其功能,本实验利用这两株单抗筛选构建于λgt11的人胚肝cDN...
- 王鑫陈兴王敦成胡美茹王建安黎燕沈倍奋
- 关键词：红细胞分化CDNA克隆RTPCR
- 文献传递
- 光化学法灭活红细胞浓缩液中病毒的研究进展被引量：2
- 1998年
- 光化学法灭活红细胞浓缩液中病毒的研究进展王敦成卜凤荣许金波（军事医学科学院放射医学研究所，北京１００８５０）关键词血液消毒病毒灭活光化学法红细胞浓缩液（ｒｅｄｂｌｏｏｄｃｅｌｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｓ，ＲＢＣＣ）是重要的血液制品之一。如何灭活该类制品...
- 王敦成卜凤荣许金波
- 关键词：病毒灭活光化学法血液制品
- 新的红细胞分化相关因子反义RNA特异抑制K562细胞中的GATA-1转录因子活性
- 2002年
- 以往报道了通过基因转染技术观察新的红细胞分化相关因子（EDRF1）反义RNA表达和EDRF1过表达对细胞增殖和分化的影响,结果表明,反义EDRF1表达载体转染后的K562细胞α-globin,γ-globin mRNA表达水平下降.本文利用基因芯片和真核基因转染技术观察了EDRF1对60种细胞因子及其受体表达水平的影响,发现EDRF1明显调节IL-6受体,GM-CSF受体,c-Jun/c-Fos,c-myc及c-kit（SCF受体）等基因的表达水平,并通过RNA点杂交进行验证,EDRF1对几个重要的细胞因子受体表达的调节可能是其执行功能的一个重要途径.Northern blot实验结果表明,GATA-1mRNA在转染EDRF1反义表达载体后表达水平有所下调,随后的凝胶阻滞电泳实验（gel shiftassay,EMSA）证明,与对照相比,EDRF1反义表达载体转染的K562细胞中,红系特异的转录因子GATA-1的活性受到明显的抑制,而另一个红系特异的转录因子NF-E2则没有明显的活性改变,对照NF-κB的转录活性也基本保持恒定.因此推测,K562细胞增殖和分化的调节很可能是通过直接影响红系特异的转录因子GATA-1与顺式序列相互作用的转录活性来实现的.
- 王敦成沈倍备马淑华王升启
- 关键词：反义表达载体细胞因子受体K562细胞
- 红细胞分化相关因子1对人红白血病细胞珠蛋白表达的影响
- 2001年
- 目的 探讨红细胞分化相关因子 (EDRF) 1基因在人红白血病 (HEL)细胞中珠蛋白表达的影响。方法 构建EDRF1真核正义和反义表达载体 ,转染HEL细胞并筛选稳定表达细胞克隆。然后利用Northernblot和逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)的方法观察红系标志基因表达水平的改变 ,应用凝胶阻滞电泳 (EMSA)的方法观察红系转录因子DNA结合活性的改变。结果 与对照相比 ,EDRF1过表达的HEL细胞中α 珠蛋白合成明显增加 ,EDRF1反义表达载体转染的HEL细胞中的α 、γ 珠蛋白合成下调 ,而红细胞生成素 (EPOR)表达水平没有明显改变。红细胞特异的转录因子GATA 1和NF E2mRNA的表达在转染前后没有明显改变。GATA 1转录因子的DNA结合活性在反义表达载体转染的HEL细胞中受到明显的抑制 ,而红系核因子 (NF E) 2的转录活性则没有明显的改变。结论EDRF1下调珠蛋白的合成是通过抑制红系特异的转录因子GATA 1的DNA结合活性实现的。
- 王敦成沈倍奋黎燕李仝王建安赖春宁施明
- 关键词：细胞分化珠蛋白转录因子基因表达调控白血病
- 亚甲基蓝/光化学法灭活血浆中指示病毒及对血浆成分影响的初步研究被引量：20
- 2000年
- 目的 探讨亚甲基蓝光化学法灭活血浆中模型病毒的效果。方法 用VSV Indiana株作为指示病毒 ,接种于Vero单层细胞中 ,孵育 39℃ 2 4h ,用微量细胞病变法 ,进行病毒滴定。并用小量试验观察病毒灭活效果及对血浆蛋白的影响。结果 亚甲基蓝 (methyleneblueMB)结合可见光照射可有效灭活血浆中的指示病毒 ,极低浓度的染料加光照可完全灭活血浆中大于 6log10 TCID50 的水泡性口膜炎病毒 (VSV) ,处理后的凝血因子活性大都改变不大 ,前后亦未发生明显的免疫学特征改变 ,白蛋白未见明显的数量改变。灭活病毒使用的亚甲基蓝量仅相当于临床治疗高铁血红蛋白血症经典用量的百分之一。结论 初步证明亚甲蓝 /光化学法可高效灭活血浆中的模型病毒 ,与此同时 ,几种凝血因子的活性也受到不同程度的影响。
- 王敦成卜凤荣许金波周锡鹏沈倍奋
- 关键词：亚甲蓝光化学病毒血液凝固因子
- 两个新的红细胞分化相关因子的cDNA克隆及功能探讨被引量：4
- 2000年
- 曾报道在终末分化阶段的红细胞中可表达一些与珠蛋白基因增强子HS2序列特异结合的蛋白因子, 并利用杂交瘤技术制备了两株针对上述蛋白的单克隆抗体. 为获得编码这些因子的基因, 实验利用这两株单抗筛选构建于(gt11的人胚肝cDNA表达文库, 并获得阳性克隆. 经分析, 其中一株 cDNA克隆具有全长编码序列(EDRF1), 另一株为具有可读框的cDNA片段(EDRF2), 由它编码的氨基酸序列含有反式调节因子特有的亮氨酸拉链结构域. 与GenBank作同源比较后确定上述两株cDNA序列均未见报道. Northern印迹结果表明, 它们编码的蛋白质为红细胞分化相关蛋白. RT-PCR系统地观察了EDRF1, EDRF2在多种细胞株和组织中的表达, 提供了重要的功能线索. EDRF1和EDRF2主要在造血系统和早期的胚胎多种组织表达, 说明它与血细胞成熟和早期的组织发育相关, 也可能是传递早期造血与胚胎发育的分子语言.
- 王鑫陈兴王敦成胡美茹王建安黎燕沈倍奋薛社普
- 关键词：红细胞分化CDNA克隆CDNA文库
- 新的红细胞分化相关基因EDRF1功能的初步研究被引量：3
- 2001年
- 曾报道过通过功能筛选得到一个新的红细胞分化相关基因, 并命名为EDRF1(erythroid differentiation related factor 1, GenBank登录号为AF040247). 鉴于功能线索明确, 选择K562细胞作为模型细胞, 通过基因转染技术观察了EDRF1反义RNA表达和EDRF1过表达对细胞增殖和分化的影响, [3H]TdR掺入和半固体集落培养实验的结果显示EDRF1过表达时, 细胞增殖代谢能力有所下降. Northern印迹和RT-PCR的结果表明, 反义EDRF1表达载体转染后的K562细胞a-globin, g-globin mRNA表达水平下降, STAT3, c-myc, GATA-1表达下调, 红细胞生成素受体(EpoR)在反义表达载体转染后表达有一定程度的上调. 说明EpoR和珠蛋白的表达调节没有内在的正协同关系, EDRF1对K562细胞增殖和分化的调节有可能是通过影响GATA-1等诸多红系特异的转录因子与顺式序列相互作用的转录活性实现的.
- 王敦成沈倍奋赖春宁黎燕王建安
- 关键词：红细胞分化GATA-1红细胞生成素受体基因转染技术球蛋白
