王东宁
- 作品数：6 被引量：34H指数：3
- 供职机构：上海交通大学生命科学技术学院更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 鲎血细胞中脂多糖结合蛋白TALF在大肠杆菌中的表达研究被引量：3
- 2004年
- TALF(Tachyleusanti lipoposaccharidefactor)对细菌内毒素 (LPS)的核心部分有抑制作用。研究TALFcDNA基因在大肠杆菌中的表达 ,首先将TALFcDNA基因分别插入大肠杆菌表达载体pGEX 4T 2、pET2 2b、pET2 8a中 ,构建重组表达质粒 ,转化于大肠杆菌BL2 1 (DE3)。结果表明克隆于pET2 2b、pET2 8a中的TALFcDNA基因没有表达 ,而融合了GST的TALF基因 (GST TALF)能够在大肠杆菌中表达 ,并形成包涵体。从 1L培养基中可获得 4mg纯度为 91 %的GST TALF融合蛋白。经复性和纯化后的融合蛋白GST TALF几乎检测不到抑菌活性及LPS中和活性 。
- 王东宁孙向军张惟杰吴祥甫
- 关键词：融合蛋白包涵体变复性抑菌活性
- 东方鲎血细胞中两种脂多糖结合蛋白的基因克隆、表达及其生物学功能研究
- 细菌内毒素是革兰氏阴性菌（Gˉ菌）细胞外壁的主要成分,它是一种复合糖脂,又称为脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）.在鲎血细胞诸多的防御分子中,有两种蛋白质具有对LPS的结合活性,它们与LPS高特异的结...
- 王东宁
- 关键词：脂多糖东方鲎基因克隆
- 文献传递
- 次级淋巴趋化因子SLC的克隆及其在原核系统中的表达被引量：3
- 2001年
- 以中国人的淋巴组织为材料抽提总RNA ,用RT PCR的方法扩增了次级淋巴组织趋化因子 (Secondarylym phoid tissuechemokine,SLC)的成熟肽基因。序列分析表明 ,我们克隆的SLC基因与文献报道的仅有一个核苷酸的差异 ,且并不影响氨基酸的编码。将SLC的cDNA插入含T7启动子的表达载体pET 2 8a(+)中构建重组质粒pET SLC ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3)筛选表达菌株。表达菌株经 1mmol LIPTG诱导表达 3～ 5h后 ,超声破菌 ,离心后将上清进行SDS PAGE ,可以看到在 18kD左右处有明显的表达条带。用Ni2 + 亲和层析柱纯化表达产物 ,纯度达到 90 %以上。
- 王东宁李明峰曾而良张惟杰吴祥甫
- 关键词：趋化因子克隆基因表达趋化作用
- 东方鲎Factor C中的结构域在结合脂多糖中的作用被引量：3
- 2004年
- FactorC是鲎血细胞中的一种丝氨酸蛋白酶原 ,因其能以高亲和力结合脂多糖 (LPS) ,在医药产品的内毒素检测中起着重要的作用 .以往研究表明处于N端的 3个Sushi结构域对FactorC的LPS结合活性起着关键作用 ,而FactorCN端的其他 3个结构域 ,包括Cys rich结构域、EGF like结构域和Lectin like结构域对LPS结合活性的影响尚不清楚 .利用Bac to Bac昆虫细胞表达系统可使rFactorC及其 4个截短的片段rCES12 3L ,rCES12 3,rS12 3L和rS12 3获得表达 ,并且可采用亲和层析柱将这 5个重组表达产物纯化 .通过测定 5个重组表达产物的LPS结合活性及抑菌活性 ,可以确定FactorC的LPS结合位点位于S12 3区域 .尽管Cys rich结构域、EGF like结构域和Lectin like结构域中不存在LPS结合位点 ,但当这 3个结构域同时存在时 ,可提高FactorC或CES12 3L的LPS结合能力 ,因此rCES12 3L具有与rFactorC非常相近的LPS结合能力 .实验结果表明 ,rCES12 3L在昆虫细胞中的表达量比rFactorC高出 4倍 ,预示出rCES12
- 孙向军王东宁张惟杰吴祥甫
- 关键词：东方鲎血细胞体外抑菌活性细菌内毒素脂多糖
- 抗内毒素治疗的新策略被引量：25
- 2001年
- 脂多糖 (Lipopolysaccharide,LPS)是G- 菌造成的败血症或脓毒性休克病理中最重要的致病因素 ,若在整个病理过程的上游 ,即在细菌内毒素水平阻断脓毒性休克的发生 ,就可能限制或阻止病理性的次级炎症级联反应。本文综述了各种不同来源的LPS结合蛋白在结合LPS从而中和并阻断内毒素的过程中的功效及应用现状 。
- 王东宁张惟杰吴祥甫
- 关键词：细菌内毒素抗内毒素治疗败血症脓毒性休克
