张春梅
- 作品数：57 被引量：167H指数：8
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- Visfatin在3T3-L1脂肪细胞诱导分化过程中的分泌变化及胰岛素的调节作用被引量：4
- 2009年
- 目的观察3T3-L1前体脂肪细胞诱导分化过程中Visfatin蛋白分泌水平的变化,探讨胰岛素对脂肪细胞Visfatin分泌水平的调节作用。方法体外培养3T3-L1前体脂肪细胞,采用1-甲基-3-异丁基黄嘌呤(MIX)、胰岛素、地塞米松方案诱导3T3-L1前体脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞,诱导分化过程中采用油红O染料鉴定并观察细胞分化情况。在诱导3T3-L1前体脂肪细胞分化成熟的不同时段(第0、4、6、8天)收集细胞培养上清液;并以100nmol/L胰岛素干预诱导分化第6、8天的成熟脂肪细胞,设未干预组为对照组,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清液中Visfatin的蛋白水平。结果未诱导分化的3T3-L1前体脂肪细胞仅分泌低水平Visfatin蛋白[(29.0±2.4)μg/L],诱导分化后随3T3-L1脂肪细胞逐渐分化成熟,脂肪细胞培养上清液中Visfatin的蛋白水平逐渐升高,至分化第8天成熟脂肪细胞Visfatin分泌达到高峰[(48.0±3.4)μg/L]。以100nmol/L胰岛素干预第6天和第8天分化成熟的脂肪细胞后,细胞培养上清液Visfatin的蛋白水平均较对照组显著升高[(57.9±5.7)μg/Lvs(45.7±3.8)μg/L;(61.0±4.2)μg/Lvs(48.0±3.4)μg/LPa<0.05]。结论Visfatin蛋白分泌与脂肪细胞成熟度有关,胰岛素对脂肪细胞Visfatin的分泌可能具有正性调节作用。
- 陈小慧张敏张敏池霞邱洁季晨博张春梅陈荣华
- 关键词：VISFATIN3T3-L1前体脂肪细胞脂肪细胞分化胰岛素
- 不同浓度葡萄糖和游离脂肪酸对大鼠骨骼肌细胞株L6细胞胰岛素敏感性和细胞内活性氧的影响被引量：3
- 2011年
- 目的研究不同浓度的葡萄糖和游离脂肪酸（FFA）对骨骼肌L6细胞胰岛素敏感性及细胞内活性氧（ROS）的影响。方法L6细胞诱导分化成熟后，分为6组，以5mmol／L葡萄糖为低糖对照组，其中加0．3或1mmol／L的混合FFA为低糖低FFA或低糖高FFA组，以25mmol／L葡萄糖为高糖对照组，其中加0．3和1mmol／L的FFA的培养基为高糖低FFA或高糖高FFA组。干预48h，^3H—D葡萄糖摄取实验（加与不加100nmol／I，胰岛素37℃30rain）验证L6细胞胰岛素敏感性，经荧光探针H2DCFDA观察细胞内ROS含量的变化。结果在5mmol／L葡萄糖组，低糖对照组基础摄糖值为22777．6±6608．7，低糖低FFA组为26027．5±4085．7，低糖高FFA组为146805．1±21099．4。胰岛素刺激后，低糖对照组为76586．5±18450．1，低糖低FFA组为43738土9203．6，低糖高FFA组为32050．6±3362．3，较低糖对照组显著降低（P〈0．01）。在25mmol／L葡萄糖组，基础葡萄糖摄取量为11793．8±551．4，高糖低FFA组11887．3±2082．3高糖高FFA组为13886．1±3872．9，差别无统计学意义（P〉0．05），但较低糖对照组显著降低（P〈0．01）．加入胰岛素刺激后，高糖对照组为42798．8±9441．5，高糖低FFA组为23946．9±3839．6，高糖高FFA组为13886．1±3872．9，各组之间差别显著（P〈0．01）。对细胞内R0s的研究发现，低糖低FFA组为2234．2±477．2，低糖高FFA组为1969．0±480．9，高糖对照组为1969．0土229．4，高糖低FFA组为2]84．5±734．2，高糖高FFA组为2571．3±96．7，可以显著增加的L6细胞内ROS，与低糖对照组（615．3±244．3）相比差别显著（P〈0．01）。除对照组之外的各组之间差别无统计学意义（P〉0．05）。结论高糖和高FFA可以诱导L6细胞出现氧化应激，同时高糖和高FFA是导致骨骼肌细胞胰岛素抵抗的重要原因之一。
- 高春林赵亚萍陈小慧季晨博张春梅朱春朱金改郭锡熔
- 关键词：骨骼肌细胞活性氧游离脂肪酸葡萄糖
- 人类肥胖相关新基因LYRM1的克隆及其生物信息学分析被引量：5
- 2009年
- 目的克隆人类肥胖相关新基因LYRM1,并对其进行初步的生物信息学分析。方法以人网膜脂肪组织为模板,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术从人网膜脂肪组织中分离LYRM1基因的完整编码框,并将其克隆到TA克隆载体,RT-PCR法鉴定并测序。利用一系列生物信息学软件或数据库初步分析预测LYRM1基因及其编码蛋白的基因结构、染色体定位、蛋白质理化性质、二级结构、信号肽、跨膜结构域、疏水性/亲水性、可溶性、结构域及亚细胞定位等。结果扩增出包含LYRM1基因开放阅读框的cDNA片段,采用RT-PCR及测序方法证实成功克隆出目的片段。生物信息学分析显示,LYRM1基因cDNA全长1589bp,开放阅读框长369bp,编码122个氨基酸,相对分子质量13270;定位于染色体16p11.2区域,含4个外显子和3个内含子。蛋白序列分析显示LYRM1基因编码蛋白无跨膜螺旋结构,为一非分泌蛋白。亚细胞定位分析提示其定位于胞核的可能性较大,蛋白结构域分析提示N端存在一LYR结构域,可能参与线粒体功能及能量代谢。蛋白序列比对提示LYRM1基因编码蛋白相对保守。结论LYRM1基因的成功克隆及生物信息学分析为进一步研究该基因奠定了基础。
- 邱洁郭锡熔周晓玉程锐张春梅季晨博高春林张敏
- 关键词：肥胖克隆生物信息学
- 抗STEAP4多克隆抗体的制备、纯化和鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的制备兔抗人STEAP4多克隆抗体及其特性鉴定。方法应用DNAStar软件对STEAP4的蛋白序列进行分析,选择STEAP4基因编码蛋白的近N端序列合成多肽并与牛血清白蛋白(BSA)交联。以纯化的STEAP4免疫新西兰白兔,制备抗STEAP4蛋白多抗,间接ELISA检测兔血清效价,Westernblot和免疫组织化学法鉴定多抗的特异性。结果得到兔抗人STEAP4多肽抗体,效价达16000。ELISA及蛋白印迹证实兔抗人STEAP4抗体可特异性识别STEAP4多肽。Westernblot结果显示该抗体识别的相应抗原的相对分子质量为52000。以一抗采用STEAP4多克隆抗体的脂肪组织石蜡切片为检测标本,进行STEAP4组织定位研究,发现STEAP4蛋白表达于脂肪细胞膜;以上结果皆与STEAP4的生物信息学分析一致。结论成功制备了抗STEAP4多克隆抗体,制备的兔抗人STEAP4合成肽抗体可应用于Westernblot和免疫组织化学试验,为后续深入研究STEAP4蛋白的功能奠定了基础。
- 朱春季晨博邱洁张春梅倪毓辉刘峰陈晓慧朱金改费莉郭锡熔
- 关键词：多克隆抗体蛋白印迹
- 蛎壳状二期梅毒疹合并糖尿病1例被引量：1
- 2007年
- 患者男,36岁。躯干、四肢脓疱、蛎壳状结痂伴消瘦40天。查体见躯干、四肢散在分布的脓疱约20个,核桃至鸡蛋大小,基底潮红浸润,表面结蛎壳状厚痂,疼痛明显。双侧腹股沟淋巴结肿大,伴疼痛。近40天体重下降约8kg。TPHA(+),RPR 1:64(+),HIV(-),空腹血糖8.52 mmol/L,餐后血糖14.54 mmol/L,确诊为二期梅毒合并Ⅱ型糖尿病,予以苄星青霉素及降糖药口服,治疗3周,皮疹完全消退,体重不再下降。现随访中。
- 张春梅郭盛华
- 关键词：二期梅毒糖尿病
- NYGGF4基因过表达对成熟脂肪细胞线粒体形态及动力学的影响被引量：11
- 2011年
- 目的探讨NYGGF4基因过表达对成熟3T3-L1脂肪细胞线粒体形态及动力学的影响。方法以3T3-L1前体脂肪细胞为载体,建立NYGGF4基因稳定过表达细胞株,以空载质粒转染的细胞为对照,将前体脂肪细胞诱导分化为成熟脂肪细胞。采用透射电镜观察成熟脂肪细胞的线粒体形态,采用荧光定量PCR技术检测成熟脂肪细胞中线粒体融合基因(Mfn)1 mRNA、Mfn2 mRNA、线粒体动态相关基因(Drp)1 mRNA的表达水平。采用Western blot方法检测Mfn1蛋白、Mfn2蛋白、Drp1蛋白的表达水平。结果 1.电镜观察发现NYGGF4基因过表达的成熟脂肪细胞线粒体体积变小、数量明显减少,线粒体嵴断裂、减少、消失,部分线粒体肿胀,甚至呈空泡状;对照组成熟脂肪细胞的线粒体形态基本正常,线粒体嵴清晰可见,线粒体无明显肿胀、皱缩。2.NYGGF4基因过表达成熟脂肪细胞Mfn1 mRNA及Mfn1蛋白表达水平均显著高于对照组。3.NYGGF4基因过表达成熟脂肪细胞的Mfn2 mRNA、Drp1mRNA及相应蛋白表达水平与对照组比较差异均无统计学意义。结论在3T3-L1成熟脂肪细胞中,NYGGF4基因过表达可导致线粒体形态发生变化、数量减少,同时上调Mfn1 mRNA和Mfn1蛋白表达水平,提示NYGGF4基因在成熟脂肪细胞中过表达能影响细胞线粒体形态及动力学。
- 朱冠忠张春梅朱春朱金改赵亚萍秦大妮寇春兆郭锡熔
- 关键词：线粒体3T3-L1脂肪细胞
- STEAP4基因蛋白铁氧化还原酶活性分析被引量：1
- 2011年
- 目的分析肥胖相关基因STEAP4的铁氧化还原酶活性。方法体外温箱培养昆虫细胞株(Sf9),分别将pAcSec1-STEAP4转移载体和pAcSec1-vector转移载体与SapphireTM杆状病毒基因组混合后共转染Sf9昆虫细胞,通过G418药物筛选稳定表达STEAP4蛋白的细胞株,并抽提细胞总蛋白进一步应用Western blot技术验证其转染情况。应用分光光度计法检测铁氧化还原酶活性。应用SPSS11.5软件进行统计学分析。结果 Western blot技术证实STEAP4过表达细胞株构建成功;分光光度计法检测STEAP4铁氧化还原酶活性,STEAP4过表达组A值为5.182 5±0.230 4,空载组A值为1.615 0±0.822 6,STEAP4过表达组铁氧化还原酶活性明显高于空载组,差异有统计学意义(Pa<0.001)。结论 STEAP4基因蛋白具有铁氧化还原酶活性。
- 秦大妮季晨博张春梅史春梅朱冠忠郭锡熔
- 关键词：肥胖
- PTEN、FOXP1基因在单心室胎儿心肌组织中的表达
- 2010年
- 目的探讨单心室胎儿心肌组织中PTEN、FOXP1基因的表达。方法取3例妊娠26周龄单心室胎儿(单心室组)和正常胎儿(对照组)各3例心室肌组织标本,采用实时荧光定量-PCR技术检测心室肌组织PTEN、FOXP1基因mRNA的表达。结果单心室组PTEN基因的表达量显著高于对照组[(1477.95±93.3881)vs.(320.6969±27.6075)](P<0.01);单心室组FOXP1基因的表达量也显著高于对照组[(1271.4907±167.3863)vs.(376.5057±236.4714)](P<0.05)。结论 PTEN、FOXP1基因在单心室胎儿心肌组织中表达上调可能与单心室的发生有关。
- 朱春余章斌张春梅郭锡熔韩树萍
- 关键词：PTEN基因单心室
- 熵理论在过劳性脏腑功能耗竭研究中的意义和价值
- 目的探讨熵理论在过劳性脏腑功能耗竭研究中的应用。方法从系统熵涨落理论角度研究过劳性脏腑功能耗竭发生、发展、变化规律。结果过劳作为熵在人体变化信号,正是反映人体体内紊乱程度的重要标尺性症候。结论人体由于熵涨落现象所导致不同...
- 于金昌肖钢王宇光李乃民张永丰刘珊刘静朱建章冷楚君张春梅孙婷
- 文献传递
- NYGGF4基因表达沉默对3T3-L1脂肪细胞线粒体代谢的影响被引量：1
- 2012年
- 目的探讨NYGGF4(又称PID1)基因沉默对脂肪细胞线粒体代谢的影响。方法以3T3-L1前体脂肪细胞为研究对象,体外培养稳定转染NYGGF4基因沉默载体(pGPU6/GFP/Neo-shRNA,NYGGF4-RNAi)的3T3-L1前体脂肪细胞,以转染空载体(pG-PU6/GFP/Neo-shRNA,NC shRNA)的3T3-L1前体脂肪细胞作为对照,经1-甲基-3异丁基黄嘌呤加地塞米松、胰岛素方案诱导分化为成熟脂肪细胞,采用实时定量RCR技术检测成熟脂肪细胞中线粒体代谢酶指标:己糖激酶、乙酰辅酶A羧化酶柠檬酸合成酶、肉毒碱棕榈酰转移酶1、细胞色素C基因表达水平。结果 NYGGF4表达沉默与NYGGF4基因过表达相比,可以部分逆转3T3-L1脂肪细胞中己糖激酶、乙酰辅酶A羧化酶、柠檬酸合成酶、肉毒碱棕榈酰转移酶1、细胞色素C基因表达水平,差异均有统计学意义。结论NYGGF4基因过表达,下调3T3-L1脂肪细胞中定位于线粒体的代谢关键酶,提示NYGGF4基因的动态平衡对维持3T3-L1脂肪细胞的线粒体代谢具有重要作用。
- 史春梅季晨博张春梅朱金改陈玲郭锡熔
- 关键词：线粒体线粒体代谢3T3-L1脂肪细胞
