宋军
- 作品数：12 被引量：74H指数：4
- 供职机构：东北农业大学更多>>
- 发文基金：黑龙江省海外学人科研资助项目黑龙江省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 体细胞核移植克隆民猪:培养液对卵母细胞成熟及胚胎发育的影响被引量：22
- 2007年
- 体外培养成熟的卵母细胞是进行克隆猪研究所需受体卵母细胞的主要来源,卵母细胞成熟质量与体细胞核移植胚胎发育能力关系密切.为提高卵母细胞体外成熟率和成熟质量,进而提高体细胞核移植猪的成功率,本实验以改进的TCM199培养液为基础液(T),分别添加10%的猪卵泡液(T+pFF)和10%的胎牛血清(T+FBS)后进行卵母细胞成熟培养,以成熟率和体细胞核移植胚胎发育率等重要指标为标准,研究了pFF和FBS对卵母细胞成熟及核移植胚胎发育能力的影响.T,T+pFF和T+FBS组在成熟培养后42h卵母细胞成熟率分别为(53.2±3.8)%,(69.7±3.8)%和(70.2±3.7)%,添加10%的pFF和FBS显著(P<0.05)提高了卵母细胞成熟率;3组不同成熟培养液获得的成熟卵母细胞在体细胞核移植后囊胚发育率差异不显著,但T+pFF组的囊胚细胞数(34.5±2.24)显著(P<0.05)高于T组的囊胚细胞数(26.6±1.25).来自T+pFF组的体细胞核移植胚胎经手术法移植入发情周期为第0天或第1天的18头受体母猪输卵管,其中有3头受体母猪妊娠发育到期,获得克隆民猪14头,其中有6头健康成活至今.实验结果表明,培养液中添加10%pFF可以有效提高卵母细胞成熟比例和成熟质量,在含有10%pFF培养液中获得的成熟卵母细胞具有支持核移植胚胎全程发育的能力.
- 刘忠华田江天郑重王振坤宋军尹智高力马海鹍孔庆然孙爽李玉田王洪斌
- 关键词：体细胞核移植体外成熟胎牛血清
- 一种识别PAM序列的MCM5-Cas9变体及其应用
- 一种识别PAM序列的MCM5‑Cas9变体及其应用，属于基因工程技术领域。本发明为解决现有技术中Cas9介导的HDR途径中长片段敲入能力较差，准确性和可靠性较低的技术问题，利用人源MCM5序列(SEQ ID No.1)，...
- 宋军赵多维赵祥杰尹智刘忠华
- 东北民猪体细胞核移植及绿色荧光蛋白转基因猪研究
- 刘忠华李玉田王洪斌宋军尹智田江天郑重王振坤孔庆然孙爽马海鲲高力范洪刚
- 该研究针对猪体细胞核移植的特殊性，为建立稳定的体细胞核移植猪的技术体系以及基于体细胞核移植的转基因猪技术体系，主要开展了如下的研究内容：卵母细胞体外成熟培养体系建立；东北民猪、大白猪和长白猪体细胞采集培养及冷冻保存；体细...
- 关键词：
- 关键词：克隆猪核移植
- 利用细菌人工染色体构建人SIRPα转基因兔模型
- 2024年
- 异种细胞和组织移植是免疫缺陷动物主要研究方向之一,为增强免疫缺陷动物对人源细胞与组织的亲和性,降低免疫排斥反应,常通过转入人SIRPα(Signal regulatory proteinα)基因使其免疫细胞表达人源SIRPA蛋白。hSIRPA蛋白可识别并结合人源移植细胞上的CD47分子,形成“不要吃我”信号,抑制吞噬细胞吞噬,显著降低受体动物对外来细胞和组织的免疫排斥反应,提高其在动物体内的移植效果。研究通过显微操作技术将含有hSIRPα基因的BAC质粒注射到兔受精卵原核中,经胚胎移植成功获得h SIRPα转基因兔。通过PCR、real-time PCR、流式细胞术等方法检测转基因兔基因型与表型。结果表明:通过检测F0和F1两代hSIRPα转基因兔基因型,hSIRPα基因被完整地转入兔体内。在转基因各组织中hSIRPα基因表达水平存在差异,在回肠、胃、脾脏中,hSIRPα基因表达水平显著高于野生型兔;外周血流式细胞技术检测结果可知,hSIRPα在转基因兔的表达水平高于野生型,不影响兔免疫细胞及组分正常发育。综上,试验成功获得hSIRPα转基因兔,为获得类似于NSG、NOG小鼠的免疫缺陷兔模型奠定基础。
- 杨素杰陶源耿阳赵多维李传沛尹智赵祥杰刘忠华宋军
- 利用体细胞核移植技术生产转基因猪的研究
- 转基因动物是目前生物领域的研究热点之一，其通过改变了动物的遗传组成，使动物按照人们的意愿进行改造。以传统的原核显微注射法生产转基因动物的效率非常低下(成功率仅为3～5％)，严重地制约了转基因动物研究进展。与之相比，体细胞...
- 宋军
- 关键词：绿色荧光蛋白转基因动物体细胞核移植脂质体转染转基因猪
- 文献传递
- PRKDC基因敲除免疫缺陷动物模型的构建方法和应用
- 本发明属于动物模型构建领域，具体涉及PRKDC基因敲除的动物模型的构建方法和应用，在本课题之前的研究中发现采用传统的靶向第一、二等靠前的外显子虽然可以获得PRKDC基因敲除动物，但是无法获得免疫缺陷表型。本发明针对PRK...
- 宋军赵祥杰陶源尹智刘忠华
- 牛Asia1型口蹄疫病毒3A非结构蛋白B细胞线性抗原表位鉴定
- 口蹄疫(Foot-and-MouthDisease,FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-MouthDiseaseVirus,FMDV)引起的以感染偶蹄动物为主的急性、热性、高度传染性疫病。该病的发生和流行严重危害畜...
- 宋军
- 关键词：ASIA1型口蹄疫病毒间接ELISA方法口蹄疫
- 猪卵母细胞c-mos基因表达以及RNA干扰被引量：3
- 2007年
- c-mos基因在动物卵母细胞减数分裂调控中起作用,但其作用机制目前仍不清楚。本实验通过RT-PCR、免疫荧光激光共聚焦检测方法检测了猪卵母细胞在体外成熟培养过程中c-mos基因在转录水平、翻译水平上的表达以及蛋白的分布,并应用注射小干扰RNA(siRNA)方法对其进行了RNA干扰(RNAi)研究。结果显示,猪卵母细胞在体外成熟培养过程中c-mos基因mRNA量逐渐增高,电激活后6h接近完全降解;MOS(c-mos基因蛋白产物)在GV卵母细胞生发泡中有一定量的表达,生发泡破裂(GVBD)前表达量增加且开始向卵母细胞胞质弥散,成熟培养44h未成熟卵母细胞中的MOS表达量要高于成熟卵母细胞,激活后6h核区MOS明显减少,但仍然有少量MOS分布于胞质中;成熟培养前干扰c-mos基因,所用三个siRNA都能成功敲低mRNA量,分别是同时期对照组mRNA量的0.08±0.03,0.11±0.06和0.20±0.06倍,干扰后虽然没有完全剔除MOS,但MOS量比同期卵母细胞有明显下降,仍可以引发成熟卵母细胞染色体解凝集。研究结果揭示了猪卵母细胞体外成熟及发育进程中c-mos基因在转录和翻译水平上的动态表达规律,建立了猪卵母细胞c-mos基因RNAi体系,为MOS在猪卵母细胞发育过程中的功能研究建立了重要的基础。
- 刘丽清田江天格日乐其木格孙爽赵祥杰宋军张永富李玉田刘娣刘忠华
- 关键词：卵母细胞RNAI
- 利用体细胞核移植技术生产表达绿色荧光蛋白转基因猪胚胎的研究被引量：12
- 2008年
- 试验对脂质体转染猪胎儿成纤维细胞的技术程序进行了筛选,以绿色荧光蛋白基因转染后的阳性细胞作为体细胞核移植的核供体,以体外成熟卵母细胞为核受体构建了绿色荧光蛋白转基因克隆猪胚胎,并对重构胚在体外发育情况以及绿色荧光蛋白表达情况进行了跟踪研究。结果显示,采用4.0μg.mL-1脂质体转染试剂,1.6μg.mL-1质粒DNA,转染6 h可以获得最佳转染效果,转染效率达4.48%;GFP转基因体细胞重构胚体外囊胚发育率为10%,GFP阳性胚胎率为48%。结果表明,脂质体转染试剂可以高效转染猪胎儿成纤维细胞,获得的阳性细胞具有支持猪全程发育的潜能。
- 宋军王振坤孔庆然赵祥杰刘丽清田江天郑重孙爽尹智刘忠华
- 关键词：转基因绿色荧光蛋白核移植脂质体
- 猪精液颗粒冷冻技术的研究被引量：10
- 2008年
- 为提高猪冻精质量,加速猪冻精在生产上的应用,本试验以解冻后的精子活率、顶体完整率和体外受精(IVF)结果作为判定指标,探讨了冷源和Equex.STM对猪精液颗粒冷冻效果的影响。手握法采集成年、健康种公猪精液,分别采用含有Equex.STM的稀释液和普通稀释液进行两步法稀释,然后以干冰或液氮为冷源进行精液冷冻。结果表明,以干冰为冷源滴冻精液冻后活率为0.487833±0.046761,顶体完整率为0.782±0.039704,而以液氮为冷源的方法冻后活率为0.3334±0.055734、顶体完整率为0.5578±0.068482,前者在这两项指标上均显著优于后者(P<0.05)。另外,在稀释液中添加Equex.STM,以干冰为冷源进行滴冻,可使冻精顶体完整率极显著提高(P<0.01)。以含有Equex.STM的稀释液采用干冰滴冻的冻精进行IVF,胚胎卵裂率、囊胚率分别为0.5316±0.125582和0.216±0.053198。结果表明,采用Equex.STM作为冷冻保护剂并以干冰作为冷源可以获得高质量的猪冷冻精子。
- 赵祥杰李玉田孙爽宋军刘丽清尹智田江天郑重刘娣刘忠华
- 关键词：干冰冷冻精子
